基于同源加尾系统的双重实时PCR方法鉴定混合肉样中猪成分比例

论文摘要

为了对掺入猪肉成分的比例进行鉴定,本研究拟建立基于同源加尾系统（Homo-tag Assisted Non-dimer system,HANDS）的双重实时PCR检测方法,借助简易数学模型将实时PCR的Ct值（循环阈值）换算成猪肉成分的百分比。根据常见家畜、家禽染色体中的管家基因Myostatin序列设计家禽家畜通用引物和探针序列,针对猪染色体beta actin基因设计猪源性成分特异型引物和探针序列,并在所有引物5’端加上同源引物。通过评估以上两套引物和探针的通用性,特异性,优化引物和探针浓度、退火温度,构建同源加尾双重实时PCR检测方法对不同猪源性成分比例的肉样进行检测并换算Ct值得出混合肉样中猪源性成分的比例。所构建的同源加尾双重实时PCR方法两重之间扩增效率相近,通用性引物、探针可以扩增所有家畜家禽成分,特异性引物探针只扩增猪源性成分。通过检测制备的混合肉样显示,该方法换算结果与肉样实际比例接近。

论文目录

1 材料与方法

1.1 原料

1.1.1 畜禽样品

1.1.2 非畜禽样品

1.1.3 主要试剂

1.1.4 主要仪器设备

1.2 方法

1.2.1 单一样品的制备

1.2.2 混合样品的制备

1.2.3 样品DNA的提取

1.2.4 引物和探针的设计

1.2.5 双重实时PCR检测方法的建立

1.2.6 My75引物、探针通用性试验

1.2.7 Sus91引物、探针特异性试验

1.2.8 双重实时PCR的扩增效率验证

1.2.9 混合肉样中猪源性成分检测比例验证

1.2.1 0 双重实时PCR检测结果与猪源性成分所占比例的换算

2 结果与讨论

2.1 My75引物、探针的通用性

2.2 Sus91引物、探针的特异性

2.3 双重实时PCR的扩增效率

2.4 不同混合比例肉样的双重荧光PCR扩增结果

2.5 扩增结果与所占比例的换算

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邵建宏,廖秀云,罗宝正,赵福振,沙才华,陈轩,薄清如

关键词: 混合肉样,猪肉,比例,同源加尾系统,双重实时

来源: 现代食品科技 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 中华人民共和国拱北海关

基金: 原国家质量监督检验检疫总局科技项目(2016IK299)

分类号: TS251.7

DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.2.037

页码: 264-269

总页数: 6

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基于同源加尾系统的双重实时PCR方法鉴定混合肉样中猪成分比例

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