刘秀军1郭秀春2（通讯作者）秦娜3
（1内蒙古巴彦淖尔市医院甲乳外科内蒙古巴彦淖尔015000）
（2内蒙古巴彦淖尔市医院肿瘤内科内蒙古巴彦淖尔015000）
（3内蒙古巴彦淖尔市医院神经内科内蒙古巴彦淖尔015000）
【摘要】目的：为检测miR-124在甲状腺乳头癌组织中的表达情况，探讨miR-124在甲状腺乳头状癌发生发展、侵袭转移中的相关功能机制。方法：收集2014年3月～2015年4月在我院手术切除并经病理确诊的50例无淋巴结转移甲状腺乳头状癌患者新鲜组织，30例甲状腺乳头状癌伴淋巴结转移患者的原发灶组织、其对应的30例转移淋巴结癌组织，以及50例甲状腺腺瘤肿块旁组织作为对照。采用实时荧光定量real-timePCR方法检测miR-124，ELISA法检测检测IQGAPl在无转移甲状腺组织、有转移甲状腺癌原发灶、转移灶组织、腺瘤肿块旁组织中的表达情况。结果：real-timePCR检测在腺瘤肿块旁组织、无转移甲状腺乳头状癌、有淋巴结转移甲状腺乳头状癌原发灶、转移甲状腺乳头状癌淋巴结转移灶中miR-124的相对表达量依次降低(P<O.01)。ELISA法检测IQGAPl结果显示无转移PTC癌组织、有转移PTC原发灶、PTC转移灶腺瘤肿块旁组织中IQGAPl表达依次增加。结论：miR-124在甲状腺乳头状癌组织及细胞中低表达尤其是淋巴结转移灶中更为明显，提示miR-124与甲状腺乳头状癌侵袭转移相关。
【关键词】甲状腺癌；miR-124；侵袭转移
【中图分类号】R73【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）09-0035-02
甲状腺癌是最常见的内分泌器官来源恶性肿瘤，占所有内分泌肿瘤的94.5％和所有恶性肿瘤的2.6％，发病率在头颈部恶性肿瘤中居首位。MicroRNA(miRNA)是近些年来被发现的一类非编码单链小RNA分子。已知MicroRNA在多种恶性肿瘤中表达异常。本研究的目的为检测miR-124在甲状腺乳头癌组织中的表达情况。
1.材料和方法
1.1一般材料
收集2014年3月～2015年4月在我院手术切除并经病理确诊的50例无淋巴结转移甲状腺乳头状癌患者新鲜组织，30例甲状腺乳头状癌伴淋巴结转移患者的原发灶组织、其对应的30例转移淋巴结癌组织，以及30例甲状腺腺瘤肿块旁组织作为对照。
1.2方法
采用实时荧光定量real-timePCR方法检测miR-124在无转移甲状腺组织、有转移甲状腺癌原发灶、转移灶组织、腺瘤肿块旁组织中的表达情况。ELISA法检测IQGAPl在无转移甲状腺组织、有转移甲状腺癌原发灶、转移灶组织、腺瘤肿块旁组织中的表达情况在无转移甲状腺组织、有转移甲状腺癌原发灶、转移灶组织、腺瘤肿块旁组织中的表达情况。
1.3统计学处理
计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，组间数据采用t检验，以P<0.05为差异有显著性。
2.结果
Real-timePCR检测甲状腺乳头状癌中miR-124的表达水平目的基因miR-124的扩增曲线符合4个特征性阶段(基线期，指数期初起，指数期，平台期)的平滑曲线，熔解曲线只有一个峰值，没有出现杂峰(见图la、图1)。提示目的基因得到有效扩增、基因扩增产物单一，符合实验要求。计算各标本组中miR-124的相对表达量。我们发现无转移PTC癌组织、有转移PTC原发灶、PTC转移灶中miR-124的相对表达量分别只为腺瘤肿块旁组织中miR-124表达量的0.56倍、0.42倍、0.33倍。其中无转移PTC癌组织的相对量表达量为1.89±0.162，有转移的PTC原发灶为1.43±0.122，PT1AC转移灶为1.12±0.104，腺瘤肿块旁组织为3.33±0.165。LSD-t检验行两两比较，各组之间均有统计学意义差异(P<0.01，见表1)。
表1Real-timePCR检测各组中miR-124的表达水平
提取无转移PTC癌组织、有转移PTC原发灶、PTC转移灶、腺瘤肿块旁组织的总蛋白，以GAPDH作为内参对照，应用Westernblot的方法检测总蛋白中IQGAPl的表达。结果为我们发现无转移PTC癌组织、有转移PTC原发灶、PTC转移灶、腺瘤肿块旁组织中IQGAPl表达依次增加。其中无转移PTC癌组织的21.89±5.16，有转移的PTC原发灶为27.46±8.35，PT1AC转移灶为34.31±10.32，腺瘤肿块旁组织为42.79±14.62。LSD-t检验行两两比较，各组之间均有统计学意义差异（P<0.01，见表2）。
3.讨论
microRNA是一类内源性单链非编码小RNA，长度约为19.22nt，通过转录水平后调控，靶向作用于特定的mRNA，抑制其表达，最终导致细胞或组织功能学上的变化。大量的研究证据表明，miRNA的异常上调或下调和多种肿瘤的发生有关，并参与肿瘤的发生发展及侵袭转移中。
miR-124作为一种抑癌基因，在多种肿瘤中明显下调。Li等人的研究发现，miR-124在乳腺癌细胞系及患者肿瘤标本组中的表达较正常细胞系及癌旁正常组织明显降低。Xie等人发现miR-124在胃癌细胞系及癌组织中明显下调。Lu等人在肝癌中也发现相似的结果。而我们通过Real-timePCR检测miR-124表达情况，结果发现甲状腺癌组
织中miR-124表达水平明显低于腺瘤肿块旁组织，其中淋巴结转移灶中的表达量最低。这强烈提示我们miR-124的下降可能参与PTC的成瘤、侵袭转移的过程。在后续的研究中发现IQGAPl基因在甲状腺癌组织中表达水平明显高于腺瘤肿块旁组织，其中淋巴结转移灶中的表达量最高。提示我们miR-124的下降失去对IQGAPl抑制作用从而使得肿瘤的形成，加快侵袭转移的过程。
4.结论
4.1miR-124在甲状腺乳头状癌组织及细胞中低表达尤其是淋巴结转移灶中更为明显，提示miR-124与甲状腺乳头状癌侵袭转移相关。
4.2IQGAPl为miR-124的靶基因，miR-124可能是通过调控IQGAPl基因的表达,抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖、侵袭转移。
表2Westernblot的方法检测各组总蛋白中IQGAPl的表达
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