李金海1苏海鸿2张慧1
（1舟曲县城关社区卫生服务中心甘肃舟曲746300）
（2舟曲县人民医院甘肃舟曲746300）
【摘要】目的：探讨制何首乌多糖的纯度鉴定和理化性质。方法：采用热水浸提乙醇分级沉淀法提取制何首乌中的多糖成分，并采用凝胶过滤法、紫外光谱扫描和比旋度法对多糖成分进行纯度鉴定，分析理化性质。结果：制何首乌多糖为均一多糖，溶解于温水中，不不易溶于冷水中，溶于乙醇、丙酮等有机试剂。结论：采用的多糖提取方法、纯度鉴定方法以及理化性质分析方法具有良好的准确性和重复性。
【关键词】制何首乌；多糖；纯度鉴定；理化性质
【中图分类号】R281【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2016）11-0339-02
1.材料与试药
1.1实验仪器
高速粉碎机、旋转蒸发仪、多用冷冻干燥机、高速冷冻离心机、控温水浴锅、恒流泵、梯度混合仪、紫外可见分光光度计。
1.2实验试药
制何首乌、双氧水、硫酸、苯酚、正丁醇、无水乙醇、去离子水、DEAE-Cellulose、Sephacry1S-100HR、Sephcry1S-300HR。
2.方法与结果
2.1制何首乌多糖提取
利用95%乙醇，在78℃的温度下对制何首乌进行热回流，共进行三次，将制何首乌中的脂类成分去除；利用60℃热水侵泡制何首乌，形成水溶液，将其中的大分子杂质去除，进行透析；最后，再加入95%乙醇，含醇量达到75%时，醇沉多糖。经过提取之后，制何首乌多糖包含三种，分别为PRPM-1、PRPM-2、PRPM-3。
2.2制何首乌多糖纯度鉴定
2.2.1凝胶过滤法多糖样品纯化在之后，取适量样品，溶解，过滤，上Sephcry1S-300凝胶柱层析，洗脱液选择蒸馏水。利用自动部分收集器，对洗脱液进行收集，每管收集的量为4ml，对多糖组分的分布进行跟踪监测，采用苯酚-硫酸法进行。横坐标确定为洗脱液收集的管数，纵坐标确定为吸光度，将洗脱曲线绘制出来。依据洗脱曲线可知，在第22～26号试管之间，PRPM-1吸光度出现高峰，峰值0.83；在第27～32号试管之间，PRPM-2吸光度出现高峰，峰值为0.71；在第19～23号试管之间，PRPM-3吸光度出现高峰，峰值为0.82，由于各洗脱曲线均为单一对称峰形，证明多糖为均一多糖。
2.2.2比旋度法多糖样本纯化之后，在蒸馏水中溶解样品，采用磁力搅拌器搅拌，同时，加入乙醇，含醇量达到20%时停止，利用离心机离心，形成沉淀，在上清液中再次加入乙醇，以滴加的方式进行，含醇量达到40%时停止，利用离心机离心，形成沉淀。干燥两次沉淀，重新在蒸馏水中溶解，参照蒸馏水，在室温下对其水溶液的旋光度进行测定，依据相应公式，将比旋光度计算出来。
2.2.3紫外吸收光谱扫描多糖样本纯化之后，在蒸馏水中溶解样品，配成1mg/ml的水溶液，在200～400nm范围内，开展紫外吸收光谱扫描。通过紫外光谱图可知，波长为260nm和280nm时，多糖并未出现吸光度，证明，多糖中无蛋白质、多肽及核酸。
2.3多糖理化性质分析
多糖PRPM-1、PRPM-2干品为白色松散粉末状，多糖PRPM-3干品为淡黄色粉末。在低温条件下，对多糖PRPM-1、PRPM-2、PRPM-3进行干燥，在冷水条件下，溶解性比较差，在温水条件下，溶解性良好，在乙醇、丙酮、乙醚等有机试剂中，多糖组分不溶解。经过显色反应之后，坚定了其理化性质，在碘反应中，多糖组分理化性质为非淀粉多糖；在裴林试剂中，多糖组分理化性质为不含还原糖；在三氯化铁反应及双缩脲反应中，多糖组分理化性质为不含多酚类物质。
3.讨论
制何首乌由何首乌炮制而成，其主要的化学成分为蒽醌类（大黄素、大黄素甲醚、2-乙酰基大黄素、大黄素-3-乙醚等）、黄酮类（苜蓿素、儿茶素、槲皮素-3-O-半乳糖苷等）、二苯乙烯苷类及其葡萄糖苷类（2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等）、脂肪酸类（古巴烯、二十碳烷、十六碳烷酸甲酯等）、卵磷脂类（磷脂酰胆碱、磷脂酰乙胺醇、磷脂酸、磷脂甘油等）[1]。制何首乌性温，味苦，具有抗衰老、抗氧化、调节机体免疫动能的功能，造血系统及心脑血管系统在制何首乌作用下可有效改善，具有良好的要用价值[2]。
本研究进行了制何首乌多糖的纯度鉴定，并对其理化性质进行了分析和研究。目前，制何首乌多糖纯度鉴定的方法比较多，比如凝胶过滤法、高压电泳法、高效液相色谱法等，为了提升鉴定的准确性，至少需要使用2种纯度鉴定方法，本研究中采用凝胶过滤法、比旋度法及紫外吸收光谱扫描法进行纯度鉴定，鉴定结果显示，各个多糖成分为均一多糖[3]。经过理化性质分析可知，在冷水中，制何首乌多糖的溶解性比较差，而在温水中，制何首乌多糖可以比较好的溶解，此外，在有机溶剂中，制何首乌多糖并不会出现溶解，经过显色反应可知，在制何首乌多糖中，蛋白质、核酸、糖醛酸等物质并不包含在内，属于纯粹多糖。
综上所述，制何首乌是何首乌炮制而成，包含二苯乙烯苷、蒽醌类、多糖等活性成分，具有抗氧化、抗衰老、调节免疫的功能，药用价值比较高。通过纯度鉴定可知，制何首乌多糖为均一多糖，经过理化性质分析可知，制何首乌多糖为纯粹多糖。纯度鉴定及理化分析时采用的方法准确性及重复性比较好，可以在制何首乌多糖研究中广泛的使用。
【参考文献】
[1]高淑红，苏珍枝，肖学凤.制首乌化学成分及药理作用研究进展[J].山西中医学院学报，2012，13（02）：74-77.
[2]徐晓飞，罗珍.多糖类保健品质量控制技术的研究进展[J].中国食物与营养，2011，17（09）：18-21.