川西獐牙菜SmSLS2基因的克隆、生物信息学及表达分析

川西獐牙菜SmSLS2基因的克隆、生物信息学及表达分析

论文摘要

裂环马钱子苷合成酶(SLS)是环烯醚萜类化合物合成途径的限速酶。该研究根据川西獐牙菜转录组信息获得SmSLS2基因序列,对该基因进行克隆、生物信息分析、原核表达载体构建及蛋白体外诱导。结果表明SmSLS2 cDNA全长1 566 bp(GenBank编号MH535904),编码521个氨基酸,推测其蛋白相对分子质量为59. 79kDa,等电点为8. 92。结构域分析表明SmSLS2含一个跨膜结构域,SmSLS2的gDNA全长为2 576 bp,含5个外显子和4个内含子。SmSLS2蛋白与其他植物中SLS蛋白具有高度的相似性。进一步将SmSLS2构建到原核表达载体pET-28a-sumo上,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在37℃、0. 5 mmol·L-1IPTG条件下进行原核表达,诱导出与预测蛋白大小一致的目的蛋白。该研究成功从川西獐牙菜中克隆了SmSLS2,为进一步阐明该基因在环烯醚萜合成途径中的作用和通过基因工程手段改良环烯醚萜类化合物产量提供了理论基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 总RNA提取及cDNA的合成
  •   1.3 Sm SLS2全长cDNA的克隆
  •   1.4 Sm SLS2基因结构分析
  •   1.5 Sm SLS2重组质粒的获得与鉴定
  •   1.6 Sm SLS2的生物信息学分析
  •   1.7 原核表达载体的构建
  •   1.8 Sm SLS2在大肠杆菌中的原核表达
  • 2 结果与分析
  •   2.1 川西獐牙菜Sm SLS2基因的开放阅读框 (ORF) 的克隆
  •   2.2 川西獐牙菜Sm SLS2基因的生物信息学分析
  •     2.2.1 川西獐牙菜Sm SLS2蛋白质序列分析
  •     2.2.2 氨基酸序列同源性分析
  •   2.3 川西獐牙菜Sm SLS2蛋白的原核表达
  •     2.3.1 Sm SLS2基因原核表达载体的构建
  •     2.3.2 将p ET-28a-SmSLS2转入表达菌株BL21 (DE3) 中进行原核表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李文静,冯雨,侯晓强,孙艳香,韩美玲,李晓雪,王勇,向蓓蓓

    关键词: 川西獐牙菜,裂环马钱子苷合成酶,基因克隆,生物信息学分析,原核表达

    来源: 植物研究 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,农作物

    单位: 廊坊师范学院生命科学学院,南开大学生命科学学院,天津中医药大学中药学院

    基金: 河北省高等学校科学技术研究青年基金项目(QN2018017),天津市自然科学基金(18JCQNJC14000)~~

    分类号: Q943.2;S567.239

    页码: 431-440

    总页数: 10

    文件大小: 4420K

    下载量: 123

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