猪流感病毒H1N1亚型HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

猪流感病毒H1N1亚型HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为获得H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(McAb),选取A/swine/NanChang/H1N1/2009毒株,病毒经增殖、超速离心后,收集病毒粒子作为免疫原,将SIV粒子包被建立了间接ELISA方法。将免疫4次的BALB/c小鼠,经间接ELISA测定小鼠血清效价,将效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合。采用间接ELISA的方法筛选效价高的阳性细胞孔,采用有限稀释法进行3轮亚克隆,得到了5株杂交瘤细胞株,分别命名为2C6、5G5、1D5、3G3、4F11。随后对5株杂交瘤细胞的亚型进行鉴定,显示2C6、1D5、4F11为IgM亚型,5G5、3G3为IgG1亚型,5株杂交瘤的L链均为k链。间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测表明,5G5能够与HA蛋白发生特异性的结合。本研究为进一步建立H1亚型SIV的相关检测方法及对HA蛋白的功能研究奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病毒、细胞和试验动物
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 免疫原的制备
  •   1.4 动物免疫
  •   1.5 间接 ELISA 方法的建立
  •   1.6 免疫后小鼠效价测定
  •   1.7 细胞融合和筛选
  •   1.8 单克隆抗体的亚型的鉴定
  •   1.9间接免疫荧光 (IFA) 和Western blot筛选针对HA蛋白的杂交瘤细胞株
  •   1.10 腹水的制备及效价测定
  •   1.11 McAb中和效价测定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 间接ELISA方法的建立
  •   2.2 融合前小鼠效价测定
  •   2.3 细胞融合
  •   2.4 杂交瘤细胞的筛选及克隆
  •   2.5 单克隆抗体的亚型的鉴定
  •   2.6 IFA筛选识别HA蛋白的杂交瘤细胞株
  •   2.7 Western blot筛选识别HA蛋白的杂交瘤细胞株
  •   2.8 腹水的制备及效价测定
  •   2.9 McAb中和效价测定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 朱和超,范桂芳,朱莉莉,彭忠,华琳,吴斌

    关键词: 猪流感病毒,流感病毒血凝素蛋白,杂交瘤细胞,单克隆抗体

    来源: 畜牧与兽医 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 生猪健康养殖协同创新中心/华中农业大学动物医学院

    基金: 国家科技支撑计划(2015BAD12B04)

    分类号: S852.651

    页码: 81-85

    总页数: 5

    文件大小: 1708K

    下载量: 190

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