导读:本文包含了非定标突变论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:硝基,突变,甲基,损伤,基因,保真度,细胞系。
非定标突变论文文献综述
罗月球,余应年[1]（2005）在《POLK和POLH在N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起的非定标突变中的作用》一文中研究指出目的 研究DNA聚合酶kappa(POLK)和DNA聚合酶eta(POLH)的功能。方法 采用穿梭质粒pZ189介导的突变试验,对建立的阻断细胞系FL POLK- 和FL POLH- 进行非定标突变研究。结果穿梭质粒pZ189在FL POLK- 和FL POLH- 细胞中复制后,其supFtRNA基因的自发突变频率分别为11.2×10 - 4和13 .5×10 - 4,而对照细胞FL和FL M分别为4 .9×10 - 4和3 .7×10 - 4。质粒在接触过N 甲基 N′硝基 N 亚硝基胍的FL POLK- 和FL POLH- 细胞中复制,其supFtRNA基因的非定标突变频率下降。结论 POLK和POLH在维持哺乳类细胞的基因组稳定性中起重要作用,同时它们还参与了哺乳动物细胞非定标突变的形成,如同其同源基因编码的PolⅣ和PolⅤ在E .coli的非定标突变形成中的作用(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2005年02期）
余应年,杨军[2]（2003）在《化学诱变剂诱发基因非定标性突变的分子机理研究》一文中研究指出应用将突变靶基因与哺乳细胞基因组 DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生在于化学诱变剂诱发的基因表达改变。应用 m RNA差异显示和反义核酸技术分离到2个基因表达序列标识 ,阻断其相关基因表达 ,可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。应用蛋白质组学技术发现有 6 0多个蛋白质斑点在 MNNG处理后发生了显着变化 ,根据肽质指纹图对其中大部分蛋白作了鉴定 ,发现了很多新的参与应答的蛋白质。用体外 DNA复制技术证明 ,其发生基础是化学诱变剂引发细胞 DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但 DNA聚合酶酶谱发生改变。用反义核酸技术 ,证明 POLζ、POLκ和 POLη可能参与非定标性突变形成。其发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活 ,提示细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。研究还证明调节 POLβ表达的 c AMP- PKA- CREB通路在 MNNG处理后激活 ;MN-NG还可诱发细胞表面受体的聚簇 ,但其发生并不依赖于 MNNG对(本文来源于《浙江大学学报(医学版)》期刊2003年05期）
罗月球,杨军,余应年[3]（2003）在《POLΗ基因反义阻断细胞系的建立及POLΗ在MNNG引起的非定标性突变中的作用》一文中研究指出目的 :通过建立 POLΗ反义阻断细胞系 FL - POLΗ-,研究 POLΗ的功能。方法 :将 POLΗ基因的 14 73～ 2 131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,将重组表达质粒转染 FL细胞 ,G4 18筛选 ,获得 POLΗ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系 FL - POLΗ-。采用穿梭质粒 p Z189介导的突变实验 ,观察在 POLΗ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率和 MNNG引起的诱发突变频率。结果 :成功建立细胞系 FL -POLΗ-。穿梭质粒 p Z189在 FL- POLΗ-细胞中复制后 ,其 Sup F t RNA基因的自发突变频率为 13.5× 10 -4,而对照细胞 FL和 FL- M分别为 4 .9× 10 -4和 3.7× 10 -4。同时 ,质粒在接触过 MNNG的 FL- POLΗ-细胞中复制 ,其 Sup Ft RNA基因的非定标性突变频率不发生。结论 :POLΗ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用 ,且参与哺乳动物细胞中 MNNG引起的非定标性突变。(本文来源于《浙江大学学报(医学版)》期刊2003年05期）
罗月球[4]（2003）在《DNA聚合酶κ和DNA聚合酶η在烷化剂MNNG引起的非定标突变中的作用》一文中研究指出DNA经常遭受内源和外界环境因子的攻击，造成DNA损伤，大部分的损伤是可以被无误的DNA修复机制消除的，但也有一些损伤会因为在复制过程中没有被修复而在染色体上继续存在，如发生在S期的损伤、一些比较大的损伤、染色体组上的损伤和一些不容易被修复的损伤会，此时DNA聚合酶会在损伤处停顿，DNA复制不能正常进行，从而影响细胞的分裂，更为严重的会导致细胞的死亡。作为对这些损伤的反应，细胞体内发展了一种损伤耐受机制，使DNA遭受严重损伤时，复制还能继续进行，跨损伤合成机制就是其中的一种。 跨损伤合成可分为两类，无误(error—free)跨损伤合成和易误(error—prone)跨损伤合成。跨损伤合成需要一类特殊的聚合酶来完成，原核生物和真核生物(包括人)中参与跨损伤合成的酶有多种，包括原核细胞的DNA聚合酶Ⅳ、Ⅴ和真核细胞的DNA聚合酶κ、η、ι、REV1等，由于这些酶在进化上的保守性，统称为UmuC超家族。DNA聚合酶ζ也参与跨损伤合成，但不属于UmuC超家族 E.coli中，损伤诱导的突变由SOS反应诱导产生的DNA聚合酶V来完成。DNA聚合酶V由UmuD'_2C蛋白复合物组成，其中UmuC具有催化活性。在SSB、RecA存在下，polV的跨损伤合成能力增强，导致SOS定标性突变(SOS targeted mutagenesis)。当复制未损伤的DNA时，pol V也表现出高突变性并且易形成嘌呤—嘌呤、嘧啶—嘧啶错配，导致SOS非定标性突变(SOS non(un)targeted mutagenesis)。大肠杆菌E.coli SOS反应还启动dinB基因，编码pol Ⅳ, polⅣ缺少3—>5’外切酶活性，是低保真度聚合酶，参与λ噬菌体的非定标突变(λUTM)，polⅣ过表达，F'lac质粒的移码突变和碱基替换突变都上升。 在小鼠和人中发现了DinB基因的同源物，分别命名为Dinbl和DINBl。 浙江大学学位论文 罗月球Dffi81编码的蛋白为 P。IK，是真核生物中一类新的跨损伤合成酶。体外实验中，不自跨过 UV损伤（ets－syn TT和 6一 4TT dimer）、1’匝铂力合物（cisPlatin adduct），但能有效跨过8一氧代鸟瞟吟，在它对面插入碱基A，在AP位点大多也会插入碱基A，继续延伸的话，会插入碱基T，导致一1移码突变。在乙酚氨基苑（AAF）修饰的G 模板对面往往插入碱基C，少数情况下会插入A。在苯并花 比enzo（a》yrene）修饰的碱基G对面插入正确的碱基C。将Dinbl基因的cDNA瞬时转染入小鼠细胞中，发现突变率升高了 10倍18，9］。最近人们意识到 P＊。可能与遗传不稳定的发生有关，因此我们在本课题中研究了 P。IK与非定标突变的关系。 Poln（DNA polymerase eta）也是UmuC超家族的一个跨损伤聚合酶。Pcin能在＊6yn TT对面插入正确的碱基，的A TT却不能被正确修复。同时人们还发现P。lfl在复制未损伤的 DNA时，具有比其它已发现的其它 DNA聚合酶具有更低的保真度。由于P。In缺少外切核酸酶活性，在复制DNA模板时，每18．380个核昔酸便有一个碱基被替换，这种非常低的保真度提示P。lfl在正常复制时肯定是被严格控制的，这样子才能防止正常复制时诱变DN A的合成＊‘’，“］。P＊的以上特性，提示它可能也参与了哺乳动物细胞中遗传不稳定的发生。 目前对哺乳类动物细胞中非定标突变情况的研究尚不多。我们和其它实验室己有的工作证明哺乳类细胞中也存在非定标突变。我们用携带靶基因 SopF tRNA的穿梭质粒pZ189转染在12—24小时前经低剂量烷化剂N－甲基N’1基N－亚硝基肌（MNNG）处理过的细胞并使之在其中复制。在回收的质粒中，我们检测到了延迟发生的、高于对照的突变。其中本实验室已经证实的发生非定标突变的聚合酶有P。lp、P。二二。本课题继续研究了P。l。、P。In与非定标突变的关系。 建立 P。IK和 P。lit表达阻断的细胞系：我们用反义 NA技术建立了 POIK表达下调的转基因细胞系。RT—PCR扩增得到 229 hp的 POIK CDNA片段，并在其上下游引物中分别引入了 ho和 Nhe内切酶位点。此片段克隆入 TA克隆载体后，经ho和 Nhe消化收回在上、下游分别有ho和 Nhe粘性末端的POIK。DNA片段，透析袋电泳纯化。利用真核细胞地塞米松（DEX）诱导表达载体 pMAMneo－amp’多克隆位点中 no和 Nhe内切酶限制性位点的位置（Nhe在上游 1545而 hO位于下游 1570），使 P。IK CDNA片段反向插入到表达载 4 浙江大学学位论文 罗月球体中，即 pMAMneo仓呷”－POI。。纯化的 pMAMneo－amp”P x以及对照空白质粒pMAMneo－m叩”转染FL细胞，同时还对另一个本实验室己经建立的表达重组质粒 pMAMneo－m叩“Pci g转染 FL细胞，利用载体携带的抗性基因通过 G418筛选转有质粒的细胞。DEX诱导下，FL－P。IK－和 FLP。lfl细胞总 RNA经RTPCR扩增分别得到预期长度为 220hp和 490hp的 Pci。和 Pci n基因的反义 mRNA。 FLF、FLF fi－细胞中 MNNG诱发的非定标性突变率下降：DEX诱(本文来源于《浙江大学》期刊2003-05-01）
朱峰[5]（2003）在《人REV3基因在MNNG诱发的非定标突变中的作用及其转录水平调控的分子机理研究》一文中研究指出化学致癌物可以引起DNA损伤或非DNA损伤效应(外遗传效应)，前者如果没有被正确修复，则有可能通过跨损伤合成途径形成定标突变。非定标突变是指发生在非损伤DNA部位的突变，有可能被DNA损伤或非DNA损伤效应所诱发。 当暴露于环境因子时(比如紫外线辐射)，大肠杆菌会激活SOS反应，从而产生损伤耐受，但其后果之一是引起非定标突变，而DNA聚合酶Ⅳ、Ⅴ均参与了SOS诱发的非定标突变。DNA聚合酶Ⅳ主要引起非定标-1移码突变，DNA聚合酶Ⅴ则需要RecA*蛋白与SSB的协同，引起的非定标突变的突变谱以颠换为主(占53％)。单核苷酸置换与一个碱基缺失的比例为1:2。但是，真核生物中非定标突变的发生机制还不清楚。 我们实验室近年的工作对哺乳细胞非定标突变机制的研究初步表明，细胞在受低剂量MNNG攻击后的早期，首先发生外遗传的改变，包括45KD与62KD蛋白酪氨酸磷酸化水平的升高、JNK／SAPK通路的激活、cAMP-PKA-CREB通路的激活以及NF-κB的激活。同时在产生非定标突变的细胞中检测到基因表达的改变，进一步研究发现细胞受MNNG攻击后DNA复制保真度下降、DNA聚合酶酶谱发生改变。因此，我们推测，哺乳细胞中低保真度的跨损伤DNA聚合酶可能参与了MNNG诱导的哺乳细胞非定标突变。初步认为，MNNG诱发非定标突变的形成是继有关细胞信号转导通路激活后，导致相关基因表达的改变，并引起DNA聚合酶酶谱表达的改变，最终使DNA复制保真度下降，从而使突变发生在未损伤的DNA模板上。但是，哺乳细胞中是哪种跨损伤DNA聚合酶参与了非定标突变还不是很清楚。本实验对人DNA聚合酶＜催化亚基的编码基因REV3在非定标突变形成中的作用及其转录水平的调控机制进行了研究。 结果表明，低剂量MN’NG攻击人羊膜上皮培养细胞（FL）会引起REV3基因转录水平的表达上调，并具有时相性变化，其表达水平分别在MNNG处理后1二小时与24小时较对照提高1．刀倍与1石5倍O＜0刀匀。这种表达变化与我们实验室发现的MN’NG诱发的非定标突变形成的时相是基本一致的。进一步的非定标突变分析显示，REV3基因功能被反义阻断的细胞具有极显着的抗非定标突变的作用。在REV3基因被反义阻断的FL－REV3”细胞中，pG诱发的非定标突变频率极显着地从27．4 X10”4下降到4刀X10－4印＜0刀1人恢复到自发突变的水平。WesteX印迹证实了FLREV3细胞中REV3基因功能得到了有效的反义阻断。从而首次证实，DNA聚合酶二参与了哺乳细胞非定标突变的形成。 如前所述，低剂量MNNG会引起哺乳细胞早期的某些外遗传改变，激活转录因子CREB、AP－l以及NF－h。本实验中的生物信息学分析显示，人REV3基因启动子区域存在上述转录因子的结合位点。因此，我们推测，MN’NG引起的有些转录因子的激活导致REV3基因转录水平的表达上调。而REV3基因的激活，导致人DNA聚合酶二参与非定标突变的形成。本实验结合计算机染色体步移技术、报告基因以及瞬时转染分析，首次克隆了人REV3基因启动子，并研究了其对MN’NG的反应。结果表明，在细胞受到MNNO攻击后24小时，与基础表达相比，REV3基因的 3启动子强度极显着地增强了。进一步的REV3基因启动子缺失体分析结果表明，REV3基因启动子对MN’NG的反应元件区域存在于位于REV3基因上游－404～102核昔酸之间upGL3卫582重组子的20if位与2314位Sma酶切位点之（e），而仅含有单独的CREB元件还不足以激活REV3基因的表达，需要数个转录因子的共同调控。 综合上述研究表明，在MNNG诱发的哺乳细胞非定标突变形成过程中，早期的外遗传改变可以最终激活人DNA聚合酶＜的催化亚基编码基因REV3的表达，从而募集低保真度的DNA聚合酶二参与形成非定标突变。(本文来源于《浙江大学》期刊2003-02-01）
王谷亮[6]（2002）在《DNA聚合酶β在烷化剂MNNG引起的非定标性突变中的作用》一文中研究指出化学致癌物能直接在DNA上造成修饰和损伤：如果没有被正确修复，这些损伤将导致突变的形成。 然而机体能主动地对环境的刺激作出反应；突变的生成也并非完全是被动的过程。当受到外源DNA损伤因子的攻击时，大肠杆菌E.coil能启动SOS反应以应对不良环境，提高对致损伤刺激的耐受能力，减少损伤的发生。而在出现SOS反应的细胞中还观察到了在复制过程中的产生的、发生在没有外源损伤DNA上的突变事件，被称为SOS非定标性突变。可诱导的DNA聚合酶在其中起到了关键作用。在UmuD'，RecA和单链结合蛋白SSB的协助下，polV(UmuC)能在单链模板上催化DNA合成并产生高频率的以碱基颠换为主要形式的突变；另一个与非定标性突变有关的易误DNA聚合酶是polⅣ，为dinB基因的编码产物。它可能直接与DNA复制叉相联系而参与了DNA合成，产生—1移码为主的非定标性突变。 但对真核细胞，尤其是哺乳类动物细胞中非定标性突变的情况目前还研究不多。我们和其它实验室的工作证明哺乳类细胞中也存在非定标性突变。我们用携带靶基因SupF tRNA的穿梭质粒pZ189转染在12—24小时前经低 渐江大学博士学位论文 王谷亮 浓度烷化剂 N．甲基N”硝基N．亚硝基皿（MNNG）处理过的细胞并使之在 其中复制。在收回的质粒上我们检测到了延迟发生的、高于对照5倍以上的 突变。由于W在细胞中的半寿期仅为1．！小时；0．20M的MNNG经 洗涤后的极微量残留经过10—20多个半衰期的降解后，己不足攻击转人的 Q DNA分子，因此这种突变显然是发生在MNNG直接攻击部位以外的正常碱－基上。这种不依赖于DNA损伤的非定标性突变随后被证明依赖于MN’NG 引起的细胞内基因表达的变化。进一步我们用RTPCR技术证明DNA聚合 酶e（P。lp）的表达在MN’NG处理后显着升高。 Pci6在单碱基切除修复（base excision fpair，BER）起到不可替代的 重要作用，因此认为POIp是参与维持细胞遗传稳定性的细胞内因子。然而 由于以下特征，P。lP表现出很低的DNA复制保真度：它没有3’一5’外切酶 活性因而在＊＊A复制中缺乏校读活性：对底物dN＊P鉴别能力低卜 在长 单链模权上催化DNA复制时散布式的合成方式。最近人们逐渐意识到P。l p可能作为增变因子参与了遗传不稳定的发生。因此我们在本课题中研究了 P。ID与非定标性突变形成的关系以及MNNG诱导P。lP表达的信号机制。 MNNG处理诱导P。lp的表达：我们用Western印迹方法检测了经 MNNG处理后细胞中的 P。lp蛋白水平的表达情况。MN’NG处理后 12小时， 细胞内P。lp较对照组有轻度升高：在处理组中每单位总蛋白中P。lp的量 为 65．互自定义单位，而对照中为 50．8。处理后 18或 24小时后升高更为明 显。24 ’J’时后处理组细胞中 POIp为 125．5，比对照 66．8高出近 2倍。己经；发现过表达的 p。ID可以与其它聚合酶竞争，参与核v酸切除修复（NER）、 DNA半保留复制等过程。由于下。ID的低保真度，尤其它在长距离模板上的 保真度更低，我们推测经诱导高表达的P。lp可能冈其低保真度而参与了非 定标性突变的形成。 建立P。lp表达阻断的细胞系：为验证此假设，我们用反义NA技术 3 一I 浙江大学博士学位论文 王谷亮1 建立了 Pci D表达下调的转基因细胞系。RT一PCR扩增得到 358 hp的 Pcilp CDNA片段，并在其上下游引物中分别引人了 h。I和 ie内切酶位点。l 此片段克隆人TA克隆载体后，经h。I和he消化收回在上下游分别有ho11和Wb。他性末端的POlpCDNA片段。利用真核纫胞地塞米松（DEX）诱It卜 导表达载体pMA力心柏。m叩”多克隆位点中col和Me呐切酶限制性位点的 －位置（he在上游 1545而Xho位于下游 1570），使PolpcDNA片段反向I 插入到表达载体中，即pMAMneo－p“巾of 6－。插人外源片段中存在1个 卜EcoRI内切酶位点，被用于鉴定重组子中片段的插人与否。扩增纯化的 PNu山山惦o－Hxx－n个。卜p”以及对照空白质粒p MAMllMAMlleo－幼叩”通过磷酸钙沉淀 法转染FL细胞，利用载体携带的抗性基因通过G418筛选转有质粒的细胞。I 通过有限稀释法共得到16个单细胞来源的转基因细胞系FL．P。l住。经DEXI 诱导72 ，J’时后，用Western印迹法鉴定各细胞系的反义阻断效果并挑选其 中效果最佳的细胞系以供以后实验之川。?(本文来源于《浙江大学》期刊2002-05-01）
金静华,余应年,钱羽力[7]（2001）在《反义阻断抑制非定标性突变相关基因后Vero细胞蛋白质组的表达差异》一文中研究指出用mRNA差异显示和反义技术筛选到一个片段 (片段 9)相关基因 (fragment 9relatedgene ,FNR基因 )具有抑制甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱发的哺乳类细胞非定标性突变发生的功能。为研究FNR基因的功能机制 ,利用双向凝胶电泳结合相应的 2D分析软件比较反义阻断FNR基因的Vero pM amp-9-细胞和转染空载体的对照细胞Vero pM amp-在MNNG处理后细胞蛋白质组的表达差异。分析结果显示有 12个点仅在Vero pM amp-细胞中检测到 ,2个点仅在Vero pM amp- 9-细胞中检测到 ,统计结果显示有 2 4个点Vero pM amp- 9-细胞表达量高于Vero pM amp-细胞 (P <0 .0 5 ) ,其中有 7个点表达量高于 5倍以上 .说明该基因被反义阻断后有一系列基因表达水平的改变 ,同时也为进一步鉴定与识别非定标性突变发生相关的蛋白质及相应的基因提供线索(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊2001年06期）
任泽舫,庄志雄,张锦周,黄海雄,黄钰[8]（2001）在《镍诱导pSP189质粒的非定标性突变及其与DNA损伤的关系》一文中研究指出目的 检测醋酸镍诱导pSP189质粒在Vero细胞中的非定标性突变及其DNA损伤 ,分析其间的关系 ,为探讨镍的致癌机制提供线索。方法 醋酸镍染毒Vero细胞 2 5h ,再常规培养 2 4h后 ,转染野生型质粒pSP189,获取经该哺乳动物细胞复制过的质粒 ,转化其进入大肠杆菌MBM70 70 ,通过特殊培养基筛选突变子 ;用改良的单细胞凝胶电泳法检测开始转染时Vero细胞的DNA损伤。结果 醋酸镍浓度为 2 5 0 μmol/L和 10 0 0 μmol/L剂量组诱导出了非定标性突变 ,其突变率分别为 9 46×10 4 和 15 0 1× 10 4 ,是对照组的 4 41和 6 98倍 ,各剂量组的DNA链断裂、DNA 蛋白交联和DNA DNA交联均显着高于对照组 ,但无剂量 效应关系 ;突变率和DNA DNA交联均出现了剂量跳跃现象。结论 醋酸镍在穿梭质粒系统中可诱导出非定标性突变 ,并与宿主细胞的DNA DNA交联效应可能相关(本文来源于《中华预防医学杂志》期刊2001年02期）
余应年,孙雪敏,冯朝晖,胡文蔚,宋韬[9]（2000）在《细胞信号转导、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞非定标性突变——致癌物诱发基因突变分子机制研究》一文中研究指出本实验室曾应用一携带ＳｕｐＦｔＲＮＡ基因的穿梭质粒ｐＺ1 89,转染在 2 4ｈ前经受半寿期仅 1 1ｈ的烷化剂Ｎ -甲基 -Ｎ’ -硝基 -Ｎ -亚硝胍 (ＭＮＮＧ)攻击的ｖｅｒｏ细胞 ,从回收的在细胞中进行过复制的质粒中选出了靶基因ＳｕｐＦｔＲＮＡ(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2000年10期）
宋韬,余应年,徐方[10]（2000）在《反义阻断hREV3基因表达抑制MNNG诱发的非定标性突变的发生率》一文中研究指出目的 :ＲＥＶ3基因是酵母中发现的具有跨损伤修复活性的ＤＮＡ聚合酶 ,参与真菌易误性复制后修复通路。本研究采用反义核酸技术建立ｈＲＥＶ3基因表达阻断的人胚肾细胞系 ,研究它与非定标突变形成的关系。方法 :1 ｈＲＥＶ3基因片段从ｐＢＳ -ｈＲＥＶ3反向(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2000年10期）
非定标突变论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
应用将突变靶基因与哺乳细胞基因组 DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生在于化学诱变剂诱发的基因表达改变。应用 m RNA差异显示和反义核酸技术分离到2个基因表达序列标识 ,阻断其相关基因表达 ,可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。应用蛋白质组学技术发现有 6 0多个蛋白质斑点在 MNNG处理后发生了显着变化 ,根据肽质指纹图对其中大部分蛋白作了鉴定 ,发现了很多新的参与应答的蛋白质。用体外 DNA复制技术证明 ,其发生基础是化学诱变剂引发细胞 DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但 DNA聚合酶酶谱发生改变。用反义核酸技术 ,证明 POLζ、POLκ和 POLη可能参与非定标性突变形成。其发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活 ,提示细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。研究还证明调节 POLβ表达的 c AMP- PKA- CREB通路在 MNNG处理后激活 ;MN-NG还可诱发细胞表面受体的聚簇 ,但其发生并不依赖于 MNNG对
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
非定标突变论文参考文献
[1].罗月球,余应年.POLK和POLH在N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起的非定标突变中的作用[J].中国药理学与毒理学杂志.2005
[2].余应年,杨军.化学诱变剂诱发基因非定标性突变的分子机理研究[J].浙江大学学报(医学版).2003
[3].罗月球,杨军,余应年.POLΗ基因反义阻断细胞系的建立及POLΗ在MNNG引起的非定标性突变中的作用[J].浙江大学学报(医学版).2003
[4].罗月球.DNA聚合酶κ和DNA聚合酶η在烷化剂MNNG引起的非定标突变中的作用[D].浙江大学.2003
[5].朱峰.人REV3基因在MNNG诱发的非定标突变中的作用及其转录水平调控的分子机理研究[D].浙江大学.2003
[6].王谷亮.DNA聚合酶β在烷化剂MNNG引起的非定标性突变中的作用[D].浙江大学.2002
[7].金静华,余应年,钱羽力.反义阻断抑制非定标性突变相关基因后Vero细胞蛋白质组的表达差异[J].生物化学与生物物理学报.2001
[8].任泽舫,庄志雄,张锦周,黄海雄,黄钰.镍诱导pSP189质粒的非定标性突变及其与DNA损伤的关系[J].中华预防医学杂志.2001
[9].余应年,孙雪敏,冯朝晖,胡文蔚,宋韬.细胞信号转导、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞非定标性突变——致癌物诱发基因突变分子机制研究[J].中国病理生理杂志.2000
[10].宋韬,余应年,徐方.反义阻断hREV3基因表达抑制MNNG诱发的非定标性突变的发生率[J].中国病理生理杂志.2000
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