导读:本文包含了人骨形成蛋白成熟肽基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,杆菌,成熟,基因,油菜,胚轴,烟草。
人骨形成蛋白成熟肽基因论文文献综述
邵彩慧,刘瑞吉,廉红星[1]（2007）在《骨形成发生蛋白-7成熟肽基因克隆及序列测定》一文中研究指出目的:克隆人骨形态发生蛋白-7成熟肽基因。方法:根据Genebank人骨形态发生蛋白-7基因序列合成两条引物,从培养的人胎儿软骨细胞中提取mRNA,利用OnestepRT-PCR技术扩增出人骨形态发生蛋白-7成熟肽的基因序列,将PCR扩增产物基因片段连接克隆载体质粒中转化大肠杆菌DH5α进行克隆筛选鉴定及测序。结果:琼脂糖凝胶电泳检测RT-PCR产物显示一长约456bp的条带,阳性克隆质粒经双酶切可切出约456bp的片段,DNA测序结果与Genebank中的序列相符。结论:利用RT-PCR技术可成功的从人胎儿软骨细胞中克隆出人BMP-7成熟肽基因。(本文来源于《中国误诊学杂志》期刊2007年03期）
刘蕾,王慧,颜光涛,史晶,包士中[2]（2006）在《人骨形成蛋白-7成熟肽基因在巴斯德毕氏酵母中的分泌表达》一文中研究指出目的:利用甲醇酵母表达系统,构建重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)成熟肽的基因工程菌,并实现其分泌表达。方法:采用PCR方法,依据GenBank数据库中hBMP-7成熟肽序列(AccessionNo.NM_001719)设计并合成一对引物,从已构建的含hBMP-7的克隆载体中扩增获得人骨形成蛋白-7成熟肽基因片段,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,电转化巴斯德毕氏酵母SMD1168,于30℃进行甲醇诱导分泌表达,经筛选获得rhBMP-7成熟肽表达株,并进行了表达产物的活性测定。结果:表达产物存在于培养上清中,约占分泌蛋白总量的8%。经Western印迹分析可以检测到重组表达产物,ELISA检测其具有特异性结合活性。结论:构建了重组人骨形成蛋白-7成熟肽的基因工程菌并在甲醇酵母中实现了分泌表达,为进一步的活性及功能研究奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2006年06期）
曲福军,侯宜,刘丽玲,陈化兰,侯立中[3]（2004）在《家兔关节软骨骨形成蛋白-7成熟肽基因克隆及序列测定》一文中研究指出目的 证实家兔膝关节软骨中骨形成蛋白-7(BMP-7)的表达,获得BMP-7成熟肽基因。方法 提取家兔膝关节细胞总RNA,反转录合成cDNA,以特异性引物扩增BMP-7成熟肽基因并克隆人T载体,筛选阳性克隆质粒进行核酸序列分析。结果 PCR扩增得到一特异性的约630 bp片段,克隆后筛选出阳性克隆质粒,序列测定结果表明与发表的BMP-7成熟肽基因序列一致。结论 家兔膝关节软骨细胞中有BMP-7成熟肽基因的表达,克隆得到了BMP-7成熟肽基因,为BMP-7在软骨发育中的作用及其功能研究奠定了基础。(本文来源于《中国地方病学杂志》期刊2004年06期）
张大鹏[4]（2004）在《人骨形成蛋白-3成熟肽基因转化油菜的研究》一文中研究指出人骨形成蛋白3（hBMP-3）属于TGF-β超家族的一员，可以诱导间充质细胞分化为软骨和骨,在胚胎时期骨骼发育和骨再生修复中起着重要的作用，而且对胚胎发育过程中中胚层的诱导和分化、造血组织的发育以及神经系统的发育和修复等都起着重要作用，因而hBMP-3有广阔的市场前景。它在人体内含量极微，尽管研究人员已经在原核细胞和真核细胞表达系统中分别进行了表达，但是由于原核表达系统缺乏翻译后的加工修饰，真核表达系统存在成本高、产量低等特点，限制了其在临床上的应用。另外，随着植物基因工程的迅猛发展，一些疫苗、抗体、细胞因子等异源蛋白在植物中的成功表达，植物表达系统的优点日益受到关注。因此，本试验在已经构建好的植物表达载体pCAMBIA1300-hBMP-3m的基础上，通过电击法将其转入根癌农杆菌LBA4404中；建立了油菜下胚轴的高频率再生体系和高频遗传转化系统；然后通过农杆菌的介导，将人骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因导入油菜中，并对转基因植株进行了检测，借以探讨人骨形成蛋白在植物中的转化和表达情况，为其在更多的植物上应用提供依据。试验结果如下：1、表达载体转化根癌农杆菌将含有目的基因的表达载体质粒pCAMBIA1300-hBMP-3m通过电击法转化导入根癌农杆菌LBA4404中，卡那霉素平板筛选阳性克隆，经PCR和酶切鉴定证明表达载体质粒已转入根癌农杆菌LBA4404中。2、植株再生体系的建立采用无菌苗油菜下胚轴为外植体，以MS为基本培养基，筛选出MS+6-BA5.0mg/L+ NAA0.2mg/L培养基来诱导不定芽的分化，并于MS+IBA0.3mg/L的生根培养基上生根，获得完整再生植株。3、转化体筛选及植株再生将预培养2天的外植体与农杆菌菌液侵染2-3分钟后，共培养2天，然后转化到含<WP=6>Hyg 25mg/L的选择培养基上进行分化筛选,在转入含Hyg 25mg/L的生根培养基上进行生根培养。转入外源基因的转化体将会在这一系列筛选过程中发芽、生根，获得转基因抗性植株。4、转基因植株的PCR和Southern blot分析PCR扩增人骨形成蛋白-3成熟肽基因，以及Southern blot分析，证明人骨形成蛋白-3成熟肽基因已导入油菜中。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2004-06-01）
张大鹏,郭蔼光[5]（2004）在《根癌农杆菌介导的人骨形成蛋白-3成熟肽基因向油菜转化的研究》一文中研究指出用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法,将骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因导入甘蓝型自交系油菜(BrassicanapusL.)品种秦油-3号,并获得了hBMP-3m基因整合到油菜基因组中的植株。试验所用外植体为油菜4～5d苗龄的下胚轴;根癌农杆菌为LBA4404,其Ti质粒pCAMBIA-hBMP3m含hBMP-3m基因。切取2mm左右的下胚轴侵染根癌农杆菌后在分化培养基(MS+5.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA)上共培养2d,然后转到附加25mg/L潮霉素和500mg/L羧苄青霉素的分化培养基上。切下分化出的茎芽,插入附加25mg/L潮霉素的生根培养基(MS+0.4mg/LIBA)中,形成完整的植株。经PCR检测和Southernblot分析,证实hBMP-3m基因已插入到油菜细胞基因组中。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2004年05期）
高书颖,郭蔼光[6]（2001）在《根癌农杆菌介导法获得烟草转人骨形成蛋白-3成熟肽基因植株》一文中研究指出利用冻融法将质粒 p CAMBIA- h BMP- 3 m直接转入根癌农杆菌 LBA440 4 ,以烟草无菌苗叶盘为外植体 ,通过农杆菌介导法进行遗传转化 ,获得了在含 2 5 mg/L潮霉素 (Hy-gromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株 ,经 PCR检测呈阳性 ,初步鉴定并筛选整合了人骨形成蛋白 - 3成熟肽基因的转基因植株(本文来源于《西北植物学报》期刊2001年06期）
高书颖[7]（2001）在《人骨形成蛋白-3成熟肽基因转化烟草的研究》一文中研究指出人骨形成蛋白3(hBMP-3)是转移生长因子TGF-p超家族的一员，可以诱导间充质细胞分化为软骨和骨，对骨骼的发育和再生修复起重要作用，临床已试用于某些难治性骨折和骨缺损的治疗。hBMP-3基因编码的前体蛋白由N端的信号肽、中间区域的前肽和C端的成熟肽构成，必须经过翻译后加工：切去信号肽和前肽，并进行糖基化修饰，方可成为成熟的活性蛋白。cDNA基因编码472个氨基酸的多肽，依据BMPs前肽和成熟肽之间有一共同的内切蛋白酶酶切位点RXXR，推测hBMP-3成熟肽是C端127个氨基酸残基组成的肽段。在人体内的含量极微，尽管研究者已经在真核细胞和原核细胞表达系统分别进行了表达，但是由于原核表达系统缺乏翻译后的加工修饰，真核表达系统存在成本高、产量低等缺点，限制了其应用。随着一些疫苗、抗体、细胞因子等异源蛋白在植物中的成功表达，植物表达系统的优点日益受到关注。据此，我们在党永军构建了hBMP-3成熟肽(hBMP-3m)基因植物表达载体的基础上，将hBMP-3m基因的植物表达载体pCAMBIA1300-B3m通过冻融法转化根癌农杆菌，同时建立了烟草高频再生和转化系统，试图将人骨形成蛋白3成熟肽基因转入烟草。 本研究以烟草NC89种子为材料，在MS培养基(附加20g/L蔗糖)上培养无菌苗，继代培养3～4代后，取叶盘为外植体接种在不同的培养基上，研究不同浓度的潮霉素(Hyg)对愈伤组织分化和芽再生的影响，确定了25mg／L Hyg为烟草再生的选择压力。以NC89无菌苗叶片为外植体，用携带hBMP-3m基因的根癌农杆菌浸染烟草，研究根癌农杆菌介导的的遗传转化，经过诱导筛选分化培养，生根培养，最终获得了烟草的Hyg抗性植株。由hBMP-3m基因两端序列及35S启动子序列和hBMP-3m基因末端序列分别组成两对引物，对抗性植株总DNA进行PCR检测；提取烟草总蛋白，进行SDS-PAGE和Western Blot检测。通过研究主要获得了以下结果： 1．将hBMP-3m植物表达载体pCAMBIA1300-B3m通过冻融法导入根癌农杆菌LBA4404。 2．经潮霉素(Hyg)筛选转化体浓度梯度实验，确定了Hyg对转化不定芽的适宜筛选浓度为25mg／L。2 硕士论文：人骨形成蛋白－3成熟肽基因转化烟草的研究 弓．建立了以烟草NC89无菌苗叶盘为外植体的遗传转化体系，利用农杆菌介导法将 1300书3m基因导入烟草，最终获得了Hyg抗性植株。 4．经PCR证实部分抗性植株己将人骨形成蛋白I成熟肽基因整合到烟草基因组中，首次获得了含hBMP－3m基因的烟草转化植株。 5．Western Blot结果显示在转基因烟草中有微量 BMP生成。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2001-09-01）
人骨形成蛋白成熟肽基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:利用甲醇酵母表达系统,构建重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)成熟肽的基因工程菌,并实现其分泌表达。方法:采用PCR方法,依据GenBank数据库中hBMP-7成熟肽序列(AccessionNo.NM_001719)设计并合成一对引物,从已构建的含hBMP-7的克隆载体中扩增获得人骨形成蛋白-7成熟肽基因片段,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,电转化巴斯德毕氏酵母SMD1168,于30℃进行甲醇诱导分泌表达,经筛选获得rhBMP-7成熟肽表达株,并进行了表达产物的活性测定。结果:表达产物存在于培养上清中,约占分泌蛋白总量的8%。经Western印迹分析可以检测到重组表达产物,ELISA检测其具有特异性结合活性。结论:构建了重组人骨形成蛋白-7成熟肽的基因工程菌并在甲醇酵母中实现了分泌表达,为进一步的活性及功能研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人骨形成蛋白成熟肽基因论文参考文献
[1].邵彩慧,刘瑞吉,廉红星.骨形成发生蛋白-7成熟肽基因克隆及序列测定[J].中国误诊学杂志.2007
[2].刘蕾,王慧,颜光涛,史晶,包士中.人骨形成蛋白-7成熟肽基因在巴斯德毕氏酵母中的分泌表达[J].生物技术通讯.2006
[3].曲福军,侯宜,刘丽玲,陈化兰,侯立中.家兔关节软骨骨形成蛋白-7成熟肽基因克隆及序列测定[J].中国地方病学杂志.2004
[4].张大鹏.人骨形成蛋白-3成熟肽基因转化油菜的研究[D].西北农林科技大学.2004
[5].张大鹏,郭蔼光.根癌农杆菌介导的人骨形成蛋白-3成熟肽基因向油菜转化的研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2004
[6].高书颖,郭蔼光.根癌农杆菌介导法获得烟草转人骨形成蛋白-3成熟肽基因植株[J].西北植物学报.2001
[7].高书颖.人骨形成蛋白-3成熟肽基因转化烟草的研究[D].西北农林科技大学.2001