导读:本文包含了反义技术论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:核苷酸,基因,干扰,酵母,技术,麦角,分子。
反义技术论文文献综述
张春颖,乔燕楠,李南羿[1]（2019）在《利用反义RNA技术创制抗褐变双孢蘑菇材料》一文中研究指出双孢蘑菇采收后极易褐变,品质及商品性急剧下降,已成为困扰产业发展的突出问题。多酚氧化酶(PPO)活性是造成双孢蘑菇褐变的关键因素,PPO通过氧化酚类生成褐色物质,使菇体变暗腐烂。本研究克隆了双孢蘑菇PPO基因片段,构建PPO反义表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化法导入双孢蘑菇As2796中,获得抗褐变双孢蘑菇菌株。对获得的转基因双孢蘑菇PPO基因表达量进行荧光定量PCR检测表明,转基因菌株PPO基因表达有不同程度上的降低,有65%的反义菌株得到了抑制。阳性转化子经出菇试验获得转基因T1代子实体,其中菌株Y1-10的产量达15.32 kg/m2,菇盖厚度可达2.6 cm,单菇重量达39.48g,具有菇柄短小粗壮、菇盖厚实肥大等优良性状的潜力。对转基因菌株子实体的硬度、菇盖白度、子实体切面褐变等性状进行分析,反义转基因双孢蘑菇在硬度值方面显着优于CK,菌株Y1-10的硬度值最大为3.76 N,CK硬度值为2.9 N,反义菌株贮藏5天后菇盖白度值在80～82.5之间,依然处于消费者可接受范围内,明显高于未转基因对照73.5,且菇盖白度和硬度值两者具有高度相关性,反义转基因菌株所表现出的抗褐变耐贮藏性与其具有高硬度的特性有着密切的联系。本研究利用反义RNA技术能够有效抑制PPO基因的表达,有效提高蘑菇的抗褐变能力,为双孢蘑菇的抗褐变改良提供了新的途径。(本文来源于《多彩菌物 美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会论文摘要》期刊2019-08-03）
孔繁磊,刘思耘,张宝平,石喻,赵相轩[2]（2019）在《反义寡核苷酸治疗的分子影像技术进展》一文中研究指出反义寡核苷酸治疗在许多疾病的治疗中具有巨大的潜力。同时,反义寡核苷酸治疗药物在生物体内转运至靶点发挥作用过程中也面临许多障碍,并存在一些不可预期的不良反应。分子影像技术可以对反义寡核苷酸治疗的生物进程进行成像,并对治疗效果进行监测,对于优化反义寡核苷酸治疗至关重要。目前,多种分子影像模式已经应用在反义寡核苷酸治疗相关的研究上,每一个成像方式都有其独特的优势,但同样也有其固有的缺陷,多模态成像成为未来发展的趋势。(本文来源于《医学综述》期刊2019年03期）
潘辉龙,张国如,王晋,吴兴源[3]（2018）在《DNAzymes针对Ezrin mRNA的反义技术靶点筛选及验证》一文中研究指出目的分析肿瘤远处转移相关蛋白(Ezrin mRNA)的结构,寻找并验证DNAzymes作用的最佳靶点。方法利用RNAstructure与RNAdraw程序分析Ezrin mRNA结构,计算其一、二级结构,两种程序同时计算出碱基未配对的单链成环区,且连续存在4个以上,则将其设为反义技术的靶区域,在此区域内设计DNAzymes的作用靶点,再依据最低自由能原则,运用计算机中的OligoWalk程序进行筛选,以此方式得到各反义技术的作用靶点,以实验方法验证预测结果。结果两种软件预测的共同的单链区共42个,其中完全匹配的单链区21个,编码区具27个。AU1655、AU1751、AU1766、AU1789及GU2623位于连续未配对碱基超过10个的单链区,仅AU1655、AU1751、AU1766、AU1789符合要求。酶切反应结果显示DNAzymes在AU1751位点能够最为理想地切割Ezrin m RNA。结论相对于传统的单纯依靠实验来寻找靶点,核酸二级结构联合热动力学参数能够更精确、快速地处理靶点的设计和选取问题。AU1751位点相对应的DNAzymes不易形成稳定的自身杂合体,有利于DNAzymes结合RNA。(本文来源于《中国医药导报》期刊2018年36期）
张玉峰,叶坤英,钟丹[4]（2017）在《小干扰RNA与反义寡核苷酸技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果比较》一文中研究指出目的对比观察小干扰RNA(siRNA)和反义寡核苷酸(ASODN)技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果。方法将培养的大鼠肝星状细胞株HSC-T6随机分为siRNA组和ASODN组,两组又分别分为A、B、C、D各4个亚组;siRNA组和ASODN组中的A亚组不转染质粒,C、D、B亚组分别采用siRNA、ASODN技术转染大鼠RhoA特异性Rat1、Rat2质粒及HK-A阴性对照质粒。转染48 h取各组细胞,以RT-PCR技术检测细胞中的RhoA、Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中的透明质酸(HA)及层粘连蛋白(LN)。结果 siRNA组与ASODN组中RhoA、ColⅠmRNA均以C亚组表达量最低,组内A、C亚组比较差异有统计学意义(P均<0.05),组内其余亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);siRNA组C亚组RhoA、ColⅠmRNA相对表达量低于ASODN组(P均<0.05),两组A、B、D同亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。siRNA组与ASODN组细胞上清液HA、LN水平均以C亚组最低,组内A、C亚组比较差异有统计学意义(P均<0.05),组内其余亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);siRNA组C亚组细胞上清液HA、LN水平低于ASODN组(P均<0.05),两组A、B、D同亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 siRNA和ASODN均可抑制大鼠HSC-T6细胞的RhoA表达,但siRNA下Rat1质粒所介导的RNA干扰技术相对于ASODN能更有效抑制HSC-T6细胞外基质HA、ColⅠ、LN的生成。(本文来源于《山东医药》期刊2017年34期）
王庆华,高丽丽,梁会超,杜国华,巩婷[5]（2015）在《利用反义RNA技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达》一文中研究指出羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和叁萜类化合物生物合成分支形成的关键位点,下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢途径可促进其流向叁萜类化合物的代谢途径。有鉴于此,本研究根据酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)序列设计引物,扩增5'长片段(包括erg7基因5'非编码区启动子序列和部分编码区序列)、5'短片段(包括erg7基因5'非编码区部分启动子序列和部分编码区序列)和erg7基因编码区片段,分别将其反向克隆到表达载体p ESC-URA上,构建反义表达质粒。用反义表达质粒转化酿酒酵母INVSc1,在营养缺陷型培养基SD-URA上筛选重组菌株。通过半定量PCR进行检测,结果表明:与INVSc1相比,转入erg7基因编码区反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量没有显着变化,而转入5'长反义片段和5'短反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量明显降低。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与INVSc1相比,转入5'短反义片段和erg7基因编码区反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量没有显着变化,而转入5'长反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量明显降低。本研究利用反义RNA技术抑制酿酒酵母中羊毛甾醇合酶基因的表达,为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建叁萜类化合物代谢途径奠定了基础。(本文来源于《药学学报》期刊2015年01期）
冯丽[6]（2014）在《小分子干扰RNA和反义寡核苷酸技术的比较及其应用意义》一文中研究指出研究小分子干扰RNA和反义寡核苷酸技术在不同方面的比较和实际应用意义。尽管小分子干扰RNA,和反义寡核苷酸技术在有些方面的价值不是特别相同,然而从另外一个方面说,还是存在一些关联的地带,包括mRNA的作用靶点等。通过一些医学实验可以很清楚的发现,按照对反义寡核苷酸的研究来分析,小分子干扰RNA的研究也获得了一定程度的成效。本文详细的分析小分子干扰RNA,以及反义寡核苷酸技术相互之间的差异,从长远来看,这对于小分子干扰RNA的研究和医学临床实践的应用,具有很高的价值和意义。从临床实践上来分析,总结反义寡核苷酸技术的相关的经验和结果,从一个层面来说,对于小分子干扰RNA的研讨,价值深远,按照有关医学专家的预测和分析,小分子干扰RNA,在未来一定会在治疗肿瘤上发挥重要的作用。(本文来源于《生物技术世界》期刊2014年07期）
刘潜,孙云娟,付洁,宋海峰[7]（2014）在《基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片技术同时定量反义寡核苷酸药物原型及其代谢物方法的初步建立》一文中研究指出目的利用悬浮芯片技术,建立基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片技术对反义寡核苷酸药物原型及其代谢产物同时定量的分析方法。方法本研究在确证探针与微球偶联的基础上,考察生物基质效应、偶联微球浓度、检测探针浓度、S1核酸酶用量以及荧光显色液浓度等因素对方法定量的影响。最终在同一生物样品中对反义寡核苷酸原型及其代谢产物进行同时定量分析。结果通过考察生物基质效应,确定稀释10倍的PBS作为条件优化及样品定量分析的生物学基质;微球浓度为150个/μl,检测探针浓度为400 nmol/L,S1核酸酶用量为1 U/孔,荧光显色液浓度为1μg/ml。在猕猴血浆基质中该方法针对原型与代谢产物序列的定量范围均为7.81~2000 nmol/L。在同时含有低浓度(20 nmol/L)和高浓度(1500 nmol/L)AI-ON1原型(Ai)与AI-ON1缩短代谢产物(Am)的混合血浆样品中,该方法可同时特异性地定量分析Ai与Am。结论本研究成功建立基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片定量分析方法,可在微量生物样品中实现对反义寡核苷酸药物原型及其代谢产物的同时定量分析。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2014年01期）
高丽丽,杨金玲,朱平[8]（2013）在《采用基因敲除和反义技术抑制酿酒酵母ERG7基因表达》一文中研究指出酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)固有的甲羟戊酸(MVA)/麦角甾醇代谢途径生成的中间体2,3-氧化鲨烯是叁萜类化合物的合成前体,以酿酒酵母为底盘细胞通过合成生物学技术组建这些化合物的代谢途径时,需要下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢流。在酿酒酵母中由羊毛甾醇合酶(ERG7)催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和叁萜类化合物生物合成分支形成的关键位点。采用基因敲除和反义RNA 2种技术对ERG7基因的表达进行下调。设计含有与ERG7基因ORF两侧序列同源的长引物,以质粒PUG66为模板进行PCR扩增,构建带有loxP-Marker-loxP的ERG7基因敲除组件,采用LiAc/SS Carrier DNA/PEG方法转化双倍体酿酒酵母INVSc1,通过同源重组的方式获得酿酒酵母ERG7基因单倍体缺失突变株,并对其进行了分子生物学确证。大量培养野生型和突变型菌株,菌体冷干后在碱醇溶液中90℃回流1h,正己烷萃取后旋蒸干溶剂,甲醇溶解残留物麦角甾醇。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与野生型菌株相比,突变型菌株的麦角甾醇含量明显降低。(本文来源于《菌物研究》期刊2013年02期）
李莎[9]（2013）在《基于反义RNA技术降低发酵生产3-羟基丙酸中的副产物》一文中研究指出3-羟基丙酸（3-hydroxypropionic acid，3-HP）性质极为活泼，可用于合成多种物质。3-HP的微生物发酵生产是目前研究的热点，而发酵的副产物严重影响3-HP的纯度及后期的分离纯化。本文以肺炎克雷伯氏菌Klebsiella pneumoniae为宿主，利用反义RNA技术，对副产物做了研究。1、克隆了K. pneumoniae中的醛脱氢酶基因puuC，连接至表达载体pET-PK构建重组质粒pET-PK-puuC，电击转化至宿主K.pneumoniae DSM2026，得到重组菌K.p（pET-PK-puuC）。微氧摇瓶发酵结果表明：重组菌3-HP产量为0.86g/L，较对照菌K.p(pET-PK)提高了0.21g/L，甘油转化率和单位菌体产量分别提高了87.5%和61.9%。2、采用反义RNA技术，克隆了K. pneumoniae中乳酸产生的关键酶乳酸脱氢酶基因lldD片段，构建了重组质粒pET-PK-lldD，转化得到重组菌K.p（pET-PK-lldD）。微氧摇瓶发酵结果表明：重组菌中乳酸产量为0.27g/L，与野生型及携带空质粒的菌株相比，乳酸的产量分别降低了69%、71%。3、克隆了K. pneumoniae中乙酸产生的催化酶磷酸乙酰转移酶基因pta及丙酮酸脱氢酶基因poxB，构建了重组质粒pET-PK-pta，pET-PK-poxB，转化得到重组菌株K.p （pET-PK-pta）、 K.p（pET-PK-poxB）。重组菌微氧摇瓶发酵结果表明：K.p（pET-PK-pta）乙酸产量为0.18g/L，K.p（pET-PK-poxB）为0.25g/L，两株重组菌比野生菌乙酸产量2.25g/L分别降低了92%、89%。4、在pET-PK-lldD质粒上分别连入了pta、poxB片段基因，构建重组质粒pET-PK-lldD-pta和pET-PK-lldD-poxB（简称pET-La、pET-LB），转化得到重组菌株K.p（pET-La）、K.p（pET-LB）。微氧摇瓶发酵结果表明：K.p(pET-La)中乳酸产量为0.32g/L，K.p(pET-LB)乳酸产量0.18g/L，较野生菌分别降低了约65%和80%，K.p(pET-La)、K.p(pET-LB)中乙酸产量均为0.23g/L，与野生菌相比，分别降低了91%和79%。5、克隆了来自大肠杆菌Escherichia coli中的醛脱氢酶基因aldH，连接至已构建好的pET-La、pET-LB质粒，构建重组质粒pET-La-aldH、pET-LB-aldH，转化得到重组菌K.p(pET-La-aldH)和K.p(pET-LB-aldH)。微氧摇瓶发酵结果表明： K.p(pET-La-aldH)产3-HP1.14g/L，乳酸0.26g/L，乙酸0.42g/L，K.p(pET-LB-aldH)产3-HP1.23g/L，乳酸0.29g/L，乙酸0.36g/L。与野生菌相比，3-HP产量分别提高了44.3%和55.7%，乳酸均降低了约70%，乙酸分别降低了83.1%和85.5%。(本文来源于《北京化工大学》期刊2013-04-30）
吴琼,黄文涛,黄怡,徐恒[10]（2013）在《反义RNA技术对抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因表达的研究》一文中研究指出目的:应用反义RNA技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索采用该技术干预肝癌的可行性。方法:制备人POLD1基因的反义RNA表达质粒,同时建立空白对照组与阴性对照组,由此将实验分为阴性对照组(转染空载体的SMMC-7721细胞)、空白对照组(肝癌细胞SMMC-7721)和实验组(转染人POLD1基因反义RNA表达质粒的肝癌SMMC-7721细胞)3组。MTT实验分析细胞增殖变化,并在转染SMMC-7721细胞48h后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测POLD1基因的表达。结果:MTT实验显示,与空白对照和阴性对照组相比,转染了反义RNA的实验组细胞增殖受到明显抑制。在转染后24～72h,实验组吸光度24h为0.306 7±0.015 4,48h为0.459 2±0.033 2,72h为0.567 1±0.061 1,与空白和阴性对照组相比,P值均<0.05。实时荧光定量PCR实验显示,实验组POLD1的mRNA表达明显下调为0.142 5±0.020 5,阴性对照组为1.017±0.188,空白对照组为1.00±0.00(F=26.5,P<0.05),说明POLD1基因表达受抑制。蛋白质印迹实验显示,POLD1基因蛋白水平(p125)变化趋势与mRNA相同,均为下调,其中实验组为0.222 3±0.009 7,阴性对照组为0.237 9±0.005 9,空白对照组为0.235 4±0.003 4(F=1 365.754,P值均<0.05),说明反义RNA可抑制p125蛋白表达,结论与基因水平趋势一致。结论:针对POLD1基因设计的反义RNA体外抑制了肝癌细胞SMMC-7721的增殖,这与POLD1在基因和蛋白水平的表达下调有关。(本文来源于《中华肿瘤防治杂志》期刊2013年04期）
反义技术论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
反义寡核苷酸治疗在许多疾病的治疗中具有巨大的潜力。同时,反义寡核苷酸治疗药物在生物体内转运至靶点发挥作用过程中也面临许多障碍,并存在一些不可预期的不良反应。分子影像技术可以对反义寡核苷酸治疗的生物进程进行成像,并对治疗效果进行监测,对于优化反义寡核苷酸治疗至关重要。目前,多种分子影像模式已经应用在反义寡核苷酸治疗相关的研究上,每一个成像方式都有其独特的优势,但同样也有其固有的缺陷,多模态成像成为未来发展的趋势。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反义技术论文参考文献
[1].张春颖,乔燕楠,李南羿.利用反义RNA技术创制抗褐变双孢蘑菇材料[C].多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会论文摘要.2019
[2].孔繁磊,刘思耘,张宝平,石喻,赵相轩.反义寡核苷酸治疗的分子影像技术进展[J].医学综述.2019
[3].潘辉龙,张国如,王晋,吴兴源.DNAzymes针对EzrinmRNA的反义技术靶点筛选及验证[J].中国医药导报.2018
[4].张玉峰,叶坤英,钟丹.小干扰RNA与反义寡核苷酸技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果比较[J].山东医药.2017
[5].王庆华,高丽丽,梁会超,杜国华,巩婷.利用反义RNA技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达[J].药学学报.2015
[6].冯丽.小分子干扰RNA和反义寡核苷酸技术的比较及其应用意义[J].生物技术世界.2014
[7].刘潜,孙云娟,付洁,宋海峰.基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片技术同时定量反义寡核苷酸药物原型及其代谢物方法的初步建立[J].国际药学研究杂志.2014
[8].高丽丽,杨金玲,朱平.采用基因敲除和反义技术抑制酿酒酵母ERG7基因表达[J].菌物研究.2013
[9].李莎.基于反义RNA技术降低发酵生产3-羟基丙酸中的副产物[D].北京化工大学.2013
[10].吴琼,黄文涛,黄怡,徐恒.反义RNA技术对抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因表达的研究[J].中华肿瘤防治杂志.2013
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