导读:本文包含了大肠杆菌与嗜热杆菌论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:大肠杆菌,脂肪,杆菌,突变,密码子,高密度,己酸。
大肠杆菌与嗜热杆菌论文文献综述
戚伟,区海蕴,周亚兰,高蕊,刘星雨[1]（2019）在《猪大肠杆菌与嗜水气单胞杆菌混合感染病例的诊断及其体外抑菌试验》一文中研究指出南昌某猪场仔猪大量死亡,为了查明病因,找到防控的有效办法,对死亡仔猪病变部位进行细菌分离培养,得到分离菌Z-d-1、Q-d-1、Q-d-2,用常规法对3株分离菌进行生化鉴定、药敏试验、致病性试验、体外抑菌试验。结果:Z-d-1与大肠杆菌的生化特性一致;Q-d-1、Q-d-2与气单胞杆菌生化特性一致;3株分离菌对大部分抗生素耐药,对丁胺卡那、呋喃唑酮均高敏;攻毒小白鼠24 h均死亡;乳酸菌对其均有较好的抑制作用。结论:分离菌Z-d-1为大肠杆菌,Q-d-1、Q-d-2为嗜水气单胞杆菌;该病为大肠杆菌与嗜水气单胞杆菌混合感染所致;乳酸菌可取代或部分取代抗生素对该病的防治。(本文来源于《江西畜牧兽医杂志》期刊2019年02期）
邓巧平[2]（2018）在《嗜热木聚糖酶基因Umxyn10A在大肠杆菌中的重组表达及其热稳定性的改造》一文中研究指出木聚糖是一种非均相聚合物,是半纤维素的主要成分之一。在过去的几十年里,作为生物质降解酶系中主要成员的木聚糖酶成为研究的热点,其在纺织品、食品、饲料、造纸以及医药等多个工业领域中都得到了广泛的应用。木聚糖酶主要作用于木聚糖的β-1,4-糖苷键,水解产生不同分子量的低聚木糖和木糖。目前,国内外已报道的克隆表达的木聚糖酶基因中大多数在高温下的热稳定性都比较差,不能满足工业生产需求,这也使木聚糖酶的应用受到了极大的限制。因此,对木聚糖酶的热稳定性的研究具有十分重要的意义。木聚糖酶Umxyn10A(Gen Bank序列号ABL73-883.1)是由本实验室前期从堆肥未培养微生物中筛选得到,属于GH 10家族。将木聚糖酶基因Umxyn10A去掉跨膜结构域的编码序列并进行密码子优化后,将其在大肠杆菌中进行表达,结果发现,木聚糖酶Umxyn10A最适反应温度为80℃,但热稳定性较差,当温度超过60℃时酶活力大幅度下降,其在65℃下的半衰期为15 min,在75℃下保温4 min就几乎失活。木聚糖酶 Umxyn 10A的最适pH为6.0,在pH 4.5～10.0范围能保持80%以上的酶活。该酶除了对木聚糖有较强的水解能力外,对其它底物羧甲基纤维素钠(CMC)、微晶纤维素(Avicel)、淀粉(Starch)、几丁质(Chitin)、地衣多糖(Lichenan)、2-羟乙基纤维素(2-Hydroxyethyl cellulose)和甲基纤维素(Methylcellulose)均没有酶活力。CuCl2、AL2(SO4)3、AgNO3和十二烷基硫酸钠(SDS)对木聚糖酶Umxyn1OA的酶活力都有很强的抑制作用,其它金属离子对其酶活力影响不大。木聚糖酶Umxyn1OA对木寡糖的水解产物主要以木二糖为主,其具有潜在的商业应用价值。以不同浓度的木聚糖为底物,测得其Km和Vmax值分别为3.14 mg/mL和为370.37μmol/(min·mg)。结果表明,重组酶Umxyn1OA具有优良的酶学特性,但热稳定性较差,因此利用定点突变技术对该酶进行突变,以期提高其热稳定性。将木聚糖酶Umxyn1OA与已报道的GH10家族的4种耐热木聚糖酶的氨基酸序列进行多重序列对比以及叁维结构的同源建模分析,选定10个氨基酸位点进行定点突变。分别构建该酶的10个突变基因的重组表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达以及蛋白纯化。测定突变后的10个重组酶的酶学性质,最终得到两个热稳定性显着提高的突变酶Umxyn10AA31F和Umxyn1OAL307V。突变酶Umxyn10AA31F最适反应温度为85℃,比野生酶提高了5℃,其在65℃和70℃下的半衰期分别为105min和15min,与野生酶相比分别提高了 6倍和2倍。突变酶Umxyn10AL307V的最适反应温度为80℃,与野生酶保持一致,在65℃的半衰期为40min,与野生酶相比提高了 1.5倍。而且,突变酶Umxyn10AA31F和Umxyn10AL307V在热稳定性提高的同时,其pH耐受性、金属离子对酶活力的影响以及水解产物等都保留了野生酶优良性质。为了使木聚糖酶Umxyn1OA的热稳定性得到进一步的提高,将该酶的31位点氨基酸和307位点氨基酸进行双点突变,并在大肠杆菌中进行表达和蛋白纯化。结果发现,突变酶Umxyn1OAA31F/L307V的最适温度为85℃,较野生酶提高了5℃,在65℃下半衰期为35 min,较野生酶提高了 1.3倍,但对热稳定性的影响并没有表现出迭加效应。(本文来源于《广西大学》期刊2018-11-01）
全金香[3]（2018）在《嗜热菌Thermaerobacter subterraneun磷酸叁酯酶在大肠杆菌BL21中的异源表达与性质表征》一文中研究指出有机磷农药因环境污染和食药残留问题严重威胁着人们的身心健康,这使有机磷农药降解酶的研发迫在眉睫。降解有机磷农药的主要酶类是磷酸叁酯酶,因其成本低、快速解毒而引起人们的广泛关注,而来源于嗜热菌中的酶类以其稳定性好、活力高而备受青睐。本试验从嗜热菌Thermaerobacter subterranean BAA137中调取磷酸叁酯酶基因(PTE),构建重组质粒pET-28a-PTE,经转化诱导在大肠杆菌BL21中高效表达。通过组氨酸镍柱分离纯化、SDS-PAGE和Western-blot鉴定,得到目标蛋白,并进行酶学性质表征。(1)对嗜热菌Thermaerobacter subterranean BAA137进行复壮培养,结果表明:2%接种量、60℃静置培养24h为嗜热菌最适生长条件,这极大缩短了嗜热菌的生长周期。(2)以嗜热菌TS基因为模板,PCR扩增出磷酸叁酯酶基因,构建重组质粒pET-28a(+),测序结果表明磷酸叁酯酶基因克隆成功。(3)对重组酶进行性质表征,结果显示:重组磷酸叁酯酶是别构酶,V_(max)为101.81U/mg,Hill系数n为0.8,显示负协同效应;其最适温度是70℃,最适pH是8,半衰期是4h;金属离子对重组磷酸叁酯酶的影响中,Ba~(2+)、Ni~(2+)和Mg~(2+)随着离子浓度的增加酶活力随之降低,显示出明显的抑制作用。其中Co~(2+)和Zn~(2+)的激活作用最明显;大多数有机溶剂对重组磷酸叁酯酶有激活作用(除丙叁醇外),并且随着浓度的增加,酶活力也增高,其中二甲基亚砜的作用最明显。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2018-06-30）
邓辉,朱富成,陈存武,孙传伯,韦传宝[4]（2018）在《以两阶段流加策略在大肠杆菌中生产褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶》一文中研究指出为达到褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的过量表达,褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶的编码基因被植入含有T7强启动子的表达载体p ET-24a(+)中,并转入重组大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,于3L发酵罐中采用两阶段补料策略进行高密度发酵产酶。在诱导前阶段,设定比生长速率μset=0.25,补料流加速率以指数方式增长;在诱导阶段,根据诱导后培养基中甘油残留量和乙酸的积累量,补料流加速率以梯度方式下降。在此流加策略下进一步考察影响发酵产酶的诱导强度、诱导节点、诱导温度和复合氮源的添加量等因素。最终根据两阶段流加策略,在乳糖流加速率0.2 g/(L·h),诱导时菌浓(DCW)30 g/L,诱导温度25℃和适量添加复合氮源的条件下,1 m L发酵液的菌体细胞内重组GIase产量达到124 U,这是通过菌体发酵产GIase获得的最高产量。(本文来源于《中国食品学报》期刊2018年02期）
魏涛,迟雷,余轩,张建华,刘坤[5]（2016）在《嗜热细菌莱廷格热袍菌TMO普鲁兰酶TMP在大肠杆菌中的原核表达与酶学性质》一文中研究指出利用PCR技术从嗜热细菌莱廷格热袍菌TMO中扩增得到普鲁兰酶TMP的基因(Tlet_1262),将该基因克隆至表达载体p ET15b,并经IPTG诱导在大肠杆菌BL21-Coden Plus(DE3)-RIL中实现可溶性表达。通过80℃热处理和镍柱亲和层析两步纯化,得到纯化重组酶。SDS-PAGE分析表明:该酶分子质量为97.0 ku。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度90℃,最适p H 5.4。在最适反应温度90℃处理150 min,酶活力稳定在80%以上。普鲁兰酶TMP具有较强的耐酸性,在90℃高温和p H 5.0的酸性条件处理20 h,仍保持50%以上的活性。该酶对金属离子和变性剂SDS、尿素、Tween80和Trtion-X100具有一定抗性。还原剂DTT(0.5,5 mmol/L)对该酶活性具有明显激活作用,分别提高酶活18%和28%。在此基础上,利用重迭PCR构建普鲁兰酶TMP点突变体C501S、C649S和C704S。通过动力学分析,点突变体C649S催化普鲁兰糖和可溶性淀粉底物的效率(kcat/Km)相对于野生型分别提高37.8%和40.8%。由此推测C649位点可能与普鲁兰酶TMP催化功能密切相关。(本文来源于《中国食品学报》期刊2016年08期）
李剑龙,杨媛,吴昊,汤宏赤,韦宇拓[6]（2016）在《大肠杆菌嗜盐α-淀粉酶基因的分子改造及其酶学特性》一文中研究指出【目的】对大肠杆菌Escherichia coli嗜盐α-淀粉酶基因进行改造,并探索嗜盐α-淀粉酶的嗜盐特性。【方法】从非嗜盐的大肠杆菌JM109中克隆到一个嗜盐α-淀粉酶基因k6并进行重组表达。通过同源建模,确定Na+结合位点上的氨基酸残基,并对相应位点进行定点突变。最后对突变酶的酶学性质进行研究。【结果】相对于野生酶,突变酶更加嗜盐,其最适NaCl浓度由2mol/L增加到3mol/L,最适pH值为7,最适温度为50℃,酶活力为4 831U/mg,提高近4倍。经HPLC检测,突变酶与2%(W/V)可溶性淀粉反应后的产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽叁糖的混合物。【结论】嗜盐α-淀粉酶基因k6的嗜盐特性与Na+结合位点具有直接联系。(本文来源于《广西科学》期刊2016年01期）
马红叶,郑仁朝,赵川东,郑裕国[7]（2015）在《重组大肠杆菌产疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶分批补料发酵工艺》一文中研究指出为了获得低成本的疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL),在5L发酵罐发酵中对工程菌E.coliBL21(DE3)/pET28b-TLL的分批补料发酵工艺进行研究。结果表明:以葡萄糖为碳源的补料培养基,采用溶氧(DO)反馈补料策略进行补料,当OD600=60时降温至28℃,分2次加入终质量浓度为30g/L乳糖进行诱导表达。优化后TLL的表达量提高到798.5U/L,是优化前的2.4倍。本研究为规模化发酵重组菌生产TLL奠定了基础。(本文来源于《生物加工过程》期刊2015年02期）
王烃,郭国光,时健,郝兵,王慧[8]（2014）在《疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在大肠杆菌中的表达与纯化》一文中研究指出目的:实现疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus Lipase,TLL)在大肠杆菌中的可溶性表达,并建立有效的纯化方法。方法:根据疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶序列和大肠杆菌密码子的偏爱性,合成了疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶DNA序列,克隆至大肠杆菌表达载体PET-32a(+)中,通过筛选得到阳性重组载体,并转化入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并利用SDS-PAGE电泳检测重组脂肪酶表达情况,并通过Ni柱亲和层析对目的蛋白TLL进行纯化,透析脱盐后,TEV酶切重组融合蛋白,再利用亲和层析纯化得到酶切后的脂肪酶,检测其酶活。结果:得到了可溶性表达的TLL,检测酶切前后脂肪酶的比活性:酶切前达5.7×106U/mg,酶切后达8.9×105U/mg。结论:实现了疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的可溶性表达,并得到有效纯化,同时证明TEV酶切目的蛋白对其活性影响微小,为之后对其进行环化打下基础。(本文来源于《生物技术》期刊2014年04期）
李群[9]（2014）在《重组大肠杆菌产疏绵状嗜热丝胞菌脂肪酶发酵工艺及交联酶聚集体的制备》一文中研究指出普瑞巴林(Pregabalin,PGB)商品名为乐瑞卡,作为一种γ-氨基丁酸(GABA)类似物,主要用于治疗癫痫疾病,应用前景广阔。本论文旨在建立重组大肠杆菌产疏绵状嗜热丝胞菌脂肪酶的高密度、高表达发酵工艺,并制备该脂肪酶交联酶聚集体。以下是具体研究内容:论文对产Thermomyces lanugnosa脂肪酶(TLL)的基因工程菌J.coli BL21(DE3)/pET28b-TLL进行了 5 L发酵罐水平发酵产酶工艺研究,通过单因素实验分别考察分批发酵工艺中培养条件、诱导方式对菌体生长和产酶的影响并进行了优化。结果表明,较佳的工艺为:菌体生长温度37℃,诱导温度28℃,搅拌转速500 rpm,通气量2.0 L/min,在OD600达到8左右用15g/L乳糖诱导,发酵时间20h。在优化的条件下,最终得到菌体干重为20.2g/L,体积酶活800.3 U/L。在分批发酵工艺的基础上进一步建立了补料发酵工艺:菌体生长温度37℃,搅拌转速500 rpm,通气量2.0 L/min,12 h后溶氧维持在最低点时开始补料,溶氧联动转速,控制溶氧在30%。补料策略:溶氧反馈控制,当溶氧高于30%时补加培养基,补料速率为20 mL/min,补料周期为2s/30s;氨水与盐酸将pH控制在7.0;在OD600达到60左右开始诱导,诱导温度28℃,诱导剂为30 g/L乳糖,发酵42 h。在优化的工艺下,最终得到菌体干重为71.8 g/L,体积酶活达到 4030.2 U/L。对发酵所得菌体进行超声破碎,利用获得的粗酶液制备的交联酶聚集体活力是游离酶的1.59倍。制备条件为:冰浴下,添加60%饱和硫酸铵,酶聚集沉淀1h;加入2%(v/v)戊二醛,交联2 h;添加剂为SDS,浓度为7.5 mg/mL;6000 r/min离心6 min,去上清,选择100 mmol/LpH= 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗2次。对制备的疏绵状嗜热丝胞菌脂肪酶交联聚集体的性质进行研究:最适反应温度为45℃,最适反应pH为8.0,在pH=9.0的Tris-HCl缓冲液(100mmol/L)中保存26天后,活力剩余60%,35℃下,7天内活力无损失,15天后活力仍保持70%以上,35℃半衰期为19天,重复使用8次后,酶活仅损失10%,4℃条件保存,60天后活力保持在89%以上。(本文来源于《浙江工业大学》期刊2014-04-01）
郑志强,李华钟,邵蔚蓝[10]（2013）在《嗜热栖热菌热稳漆酶在大肠杆菌中的高效表达》一文中研究指出通过对漆酶成熟肽编码序列的N端(G1n~2-Val~(84))及中部一富含GC碱基区域(Gly~(278)-Pro~(303)进行密码子优化,成功实现嗜热细菌嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB27胞内产极耐热漆酶在大肠杆菌宿主内的超量表达,热激诱导表达后细胞提取液中漆酶活性从(20.7±1.5)U/L升高到(1790.2±81.6)U/L,重组蛋白表达水平提高了86倍。利用全蛋白的极端耐热性,采用两步纯化方法(85℃热预处理和疏水柱层析),获得电泳纯的重组酶蛋白,比酶活为14 U/mg,最终收率为62%。这是首次报道采用pHsh热激表达系统实现该极耐热性细菌漆酶在大肠杆菌宿主体内的高效表达。(本文来源于《工业微生物》期刊2013年04期）
大肠杆菌与嗜热杆菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
木聚糖是一种非均相聚合物,是半纤维素的主要成分之一。在过去的几十年里,作为生物质降解酶系中主要成员的木聚糖酶成为研究的热点,其在纺织品、食品、饲料、造纸以及医药等多个工业领域中都得到了广泛的应用。木聚糖酶主要作用于木聚糖的β-1,4-糖苷键,水解产生不同分子量的低聚木糖和木糖。目前,国内外已报道的克隆表达的木聚糖酶基因中大多数在高温下的热稳定性都比较差,不能满足工业生产需求,这也使木聚糖酶的应用受到了极大的限制。因此,对木聚糖酶的热稳定性的研究具有十分重要的意义。木聚糖酶Umxyn10A(Gen Bank序列号ABL73-883.1)是由本实验室前期从堆肥未培养微生物中筛选得到,属于GH 10家族。将木聚糖酶基因Umxyn10A去掉跨膜结构域的编码序列并进行密码子优化后,将其在大肠杆菌中进行表达,结果发现,木聚糖酶Umxyn10A最适反应温度为80℃,但热稳定性较差,当温度超过60℃时酶活力大幅度下降,其在65℃下的半衰期为15 min,在75℃下保温4 min就几乎失活。木聚糖酶 Umxyn 10A的最适pH为6.0,在pH 4.5～10.0范围能保持80%以上的酶活。该酶除了对木聚糖有较强的水解能力外,对其它底物羧甲基纤维素钠(CMC)、微晶纤维素(Avicel)、淀粉(Starch)、几丁质(Chitin)、地衣多糖(Lichenan)、2-羟乙基纤维素(2-Hydroxyethyl cellulose)和甲基纤维素(Methylcellulose)均没有酶活力。CuCl2、AL2(SO4)3、AgNO3和十二烷基硫酸钠(SDS)对木聚糖酶Umxyn1OA的酶活力都有很强的抑制作用,其它金属离子对其酶活力影响不大。木聚糖酶Umxyn1OA对木寡糖的水解产物主要以木二糖为主,其具有潜在的商业应用价值。以不同浓度的木聚糖为底物,测得其Km和Vmax值分别为3.14 mg/mL和为370.37μmol/(min·mg)。结果表明,重组酶Umxyn1OA具有优良的酶学特性,但热稳定性较差,因此利用定点突变技术对该酶进行突变,以期提高其热稳定性。将木聚糖酶Umxyn1OA与已报道的GH10家族的4种耐热木聚糖酶的氨基酸序列进行多重序列对比以及叁维结构的同源建模分析,选定10个氨基酸位点进行定点突变。分别构建该酶的10个突变基因的重组表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达以及蛋白纯化。测定突变后的10个重组酶的酶学性质,最终得到两个热稳定性显着提高的突变酶Umxyn10AA31F和Umxyn1OAL307V。突变酶Umxyn10AA31F最适反应温度为85℃,比野生酶提高了5℃,其在65℃和70℃下的半衰期分别为105min和15min,与野生酶相比分别提高了 6倍和2倍。突变酶Umxyn10AL307V的最适反应温度为80℃,与野生酶保持一致,在65℃的半衰期为40min,与野生酶相比提高了 1.5倍。而且,突变酶Umxyn10AA31F和Umxyn10AL307V在热稳定性提高的同时,其pH耐受性、金属离子对酶活力的影响以及水解产物等都保留了野生酶优良性质。为了使木聚糖酶Umxyn1OA的热稳定性得到进一步的提高,将该酶的31位点氨基酸和307位点氨基酸进行双点突变,并在大肠杆菌中进行表达和蛋白纯化。结果发现,突变酶Umxyn1OAA31F/L307V的最适温度为85℃,较野生酶提高了5℃,在65℃下半衰期为35 min,较野生酶提高了 1.3倍,但对热稳定性的影响并没有表现出迭加效应。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大肠杆菌与嗜热杆菌论文参考文献
[1].戚伟,区海蕴,周亚兰,高蕊,刘星雨.猪大肠杆菌与嗜水气单胞杆菌混合感染病例的诊断及其体外抑菌试验[J].江西畜牧兽医杂志.2019
[2].邓巧平.嗜热木聚糖酶基因Umxyn10A在大肠杆菌中的重组表达及其热稳定性的改造[D].广西大学.2018
[3].全金香.嗜热菌Thermaerobactersubterraneun磷酸叁酯酶在大肠杆菌BL21中的异源表达与性质表征[D].吉林农业大学.2018
[4].邓辉,朱富成,陈存武,孙传伯,韦传宝.以两阶段流加策略在大肠杆菌中生产褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶[J].中国食品学报.2018
[5].魏涛,迟雷,余轩,张建华,刘坤.嗜热细菌莱廷格热袍菌TMO普鲁兰酶TMP在大肠杆菌中的原核表达与酶学性质[J].中国食品学报.2016
[6].李剑龙,杨媛,吴昊,汤宏赤,韦宇拓.大肠杆菌嗜盐α-淀粉酶基因的分子改造及其酶学特性[J].广西科学.2016
[7].马红叶,郑仁朝,赵川东,郑裕国.重组大肠杆菌产疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶分批补料发酵工艺[J].生物加工过程.2015
[8].王烃,郭国光,时健,郝兵,王慧.疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在大肠杆菌中的表达与纯化[J].生物技术.2014
[9].李群.重组大肠杆菌产疏绵状嗜热丝胞菌脂肪酶发酵工艺及交联酶聚集体的制备[D].浙江工业大学.2014
[10].郑志强,李华钟,邵蔚蓝.嗜热栖热菌热稳漆酶在大肠杆菌中的高效表达[J].工业微生物.2013
论文知识图
