重组乳酸乳球菌不同途径发送shRNA抗肿瘤的研究

重组乳酸乳球菌不同途径发送shRNA抗肿瘤的研究

论文摘要

[目的]比较重组乳酸乳球菌不同途径发送HPV16E7 shRNA的抗肿瘤效果。[方法]通过实时定量PCR技术筛选出抑制Si Ha细胞中E7基因表达的shRNA片段并构建至乳酸乳球菌质粒p MG36e-RFP中。PCR鉴定获得重组乳酸乳球菌正确后分别通过滴鼻、静脉注射和瘤内注射途径发送到C57BL/6小鼠体内后,检测荷瘤小鼠的生存周期及体内肿瘤的生长大小。[结果]成功构建针对HPV16E7的shRNA干扰表达的重组乳酸乳球菌,肿瘤注射后32 d,鼻腔发送途径组小鼠肿瘤大小约为6. 49±1. 60 cm3,静脉注射组肿瘤大小为4. 49±1. 16 cm3,瘤内注射组肿瘤大小为1. 89±0. 52 cm3,至肿瘤注射60d时,瘤内注射组有3只存活。[结论]瘤内和静脉注射表达shRNA重组乳酸乳球菌均能抑制小鼠体内肿瘤的生长,其中瘤内途径优于静脉注射。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验材料
  •     1.1.2 试剂
  •     1.1.3 仪器
  •     1.1.4 培养基
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 shRNA目标序列的设计与shRNA真核表达质粒的合成
  •     1.2.2 重组shRNA干扰表达质粒瞬时转染Si Ha细胞
  •     1.2.3 Real-time定量PCR检测HPV16E7/E6基因mRNA的表达
  •     1.2.4 乳酸菌沉默载体pMG36e-RFP-UE713/HK的构建
  •     1.2.5 重组乳酸乳球菌的鉴定
  •     1.2.6 肿瘤细胞的培养及荷瘤小鼠的制备
  •     1.2.7 不同途径下重组乳球菌体内抗肿瘤效果的研究
  •     1.2.8 统计学分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 shRNA真核表达载体的构建与鉴定
  •   2.2 Real-time定量PCR检测HPV16E7/E6基因mRNA的表达
  •   2.3 重组乳酸乳球菌LL-RFP-UE713的构建及鉴定
  •   2.4 重组乳球菌鼻黏膜输送靶向肿瘤细胞定植的检测
  •   2.5 重组乳球菌LL-RFP-UE713不同途径抗肿瘤的结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 得丽扎尔·热合曼,刘丹,孙素荣,李轶杰

    关键词: 乳酸乳球菌,人乳头瘤病毒,干涉技术,抗肿瘤

    来源: 生物技术 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,肿瘤学

    单位: 新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院

    基金: 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2017D01C048)

    分类号: R73-36;Q78

    DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.05.0079

    页码: 478-484

    总页数: 7

    文件大小: 489K

    下载量: 45

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