贾雷立[1]2003年在《核酸探针与PCR方法对重组病毒vFV282株的鉴定研究》文中进行了进一步梳理本研究应用核酸探针和PCR方法，对由本室构建的共表达新城疫病毒F和传染性囊病毒VP0蛋白的多价重组鸡痘病毒vFV282进行了鉴定。 以源于含鸡新城疫病毒(NDV)四平株F基因重组质粒(pKSF)的EcoRⅤ及XbaⅠ双酶切片段，制备了地高辛标记的cDNA探针。特异性检测表明，该探针对含NDV F基因的pKSF呈现特异性，而对照载体质粒及鸡痘病毒(FPV 282E4)的核酸提取物呈阴性；敏感性检测表明，该探针对同源DNA的检出限量为4pg。应用该探针对含NDV F基因的vFV282进行杂交检测，结果呈阳性。以上结果表明，该探针可成功用于含NDV F基因的重组鸡痘病毒的鉴定。 分别以NDV四平株F基因序列和传染性法氏囊病毒(IBDV)VP0基因序列为依据，设计并合成了两对引物P1、P2和P3、P4。特异性检测表明，引物P1、P2以pKSF为模板，扩增出一条特异的DNA片段(585bp)，以对照FPV 282E4及CEF的提取核酸为模板扩增结果均呈阴性；引物P3、P4以含IBDV VP0特定基因的重组质粒(pEX IBDV VP0)为模板，扩增出一条特异的DNA片段(837bp)，以对照FPV 282E4及CEF的核酸为模板扩增结果均呈阴性；敏感性检测表明，P3、P4对pEX IBDV VP0的检出限量约为20pg总DNA。应用P1、P2和P3、P4分别对vFV282进行PCR检测，结果均呈阳性。以上结果表明，P1、P2和P3、P4可成功用于含NDV F基因和IBDV VP0基因的重组鸡痘病毒的鉴定。
郭建顺[2]2005年在《鸡痘病毒分子生物学检测方法的建立及其致病机理研究》文中进行了进一步梳理鸡痘是由鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)引起的一种急性接触性传染病。鸡痘发病的新特点以及FPV 以其独特的优越性作为重组病毒载体疫苗株之一使其越来越来受到人们的广泛关注。为了建立FPV 的分子生物学诊断方法,探讨其在鸡体内的分布、消长规律以及长期毒性,特进行了本研究。试验首先根据已发表的FPV 4b 核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了2 对引物,通过对影响PCR 扩增因素的优化,建立了特异、敏感的FPV 的PCR 检测法。同时试验也对环境中rFPV 的浓缩及PCR 检测方法进行了探讨。回收FPV 4b 核心蛋白基因1 361 bp 的片段,与pMD18-T 载体连接(重组质粒pMD18-T-4b)进行测序。Blast 软件分析表明,该序列与模板DNA(AF198100)的碱基序列的同源性为99.5%,只有7 个碱基差异。结果表明,FPV 4b 核心蛋白基因具有很强的保守性,是制备基因探针非常理想的材料。用EcoRⅠ酶切重组质粒pMD18-T-4b 后得到1 个约360 bp 大小的DNA 片段,以其为模板制备了地高辛标记的cDNA 探针。特异性、敏感性检测和初步应用表明,本试验所建立的检测FPV 的基因探针法具有广泛的应用前景。本试验通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和气管内(滴鼻、点眼)的途径给10 日龄商品蛋公鸡接种FPV JL 弱毒疫苗株,利用PCR 的方法检测了其在鸡体内的分布、消长规律以及对其毒性进行了研究。2 种接种方法均能在刺种部位皮肤、心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、脑内检测到病毒DNA,消长规律基本相同,但也存在一定差异。毒性试验表明,FPV JL 弱毒疫苗株通过翅内侧皮肤无血管处刺种存在导致全身皮肤感染出痘的危险,滴鼻、点眼途径接种比翅内侧皮肤无血管处刺种免疫效果更确实,使用更安全。上述结果表明,FPV JL 弱毒疫苗株毒性弱,使用安全,但也存在着一定的潜在的生物安全性问题。
参考文献：
[1]. 核酸探针与PCR方法对重组病毒vFV282株的鉴定研究[D]. 贾雷立. 东北农业大学. 2003
[2]. 鸡痘病毒分子生物学检测方法的建立及其致病机理研究[D]. 郭建顺. 吉林大学. 2005