淫羊藿苷对脂多糖诱导成骨细胞凋亡及GRP78/PERK/CHOP通路的影响

淫羊藿苷对脂多糖诱导成骨细胞凋亡及GRP78/PERK/CHOP通路的影响

论文摘要

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对脂多糖(LPS)诱导成骨细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78/蛋白激酶R样内质网激酶/C/EBP同源蛋白(GRP78/PERK/CHOP)通路的影响。方法:采用大鼠骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞的方法,将成骨细胞随机分成5组:对照组(只含成骨细胞)、LPS组(成骨细胞中加入终浓度为500 ng·ml-1LPS)、ICA低、中、高剂量组(分别在LPS组基础上加入终浓度为1,10,100μmol·L-1ICA)。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用对硝基苯棕榈酸酯(PNPP)法检测成骨细胞碱性磷酸酶(AKP)活性的变化情况,采用ELISA法检测成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白表达情况,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测凋亡及GRP78/PERK/CHOP通路相关蛋白表达情况。结果:骨髓基质干细胞经定向诱导后,符合成骨细胞形态学表现,AKP染色呈阳性反应,Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色结果显示:细胞质染色呈棕黄色;与对照组相比,LPS组细胞48 h时的吸光度(A)值、AKP活性、Ⅰ型胶原蛋白和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)、Bax、GRP78、磷酸化的PERK(p-PERK)、磷酸化α亚基的真核起始因子2(p-eIF2α)、CHOP蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,ICA各剂量组细胞48 h时的A值、AKP活性、Ⅰ型胶原蛋白和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved-caspase-3、Bax、GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可能通过抑制GRP78/PERK/CHOP信号通路活化,抑制LPS诱导的成骨细胞凋亡。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 仪器与试药
  •   1.2 动物
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及向成骨细胞诱导分化实验
  •     1.3.2 成骨细胞显微结构观察
  •     1.3.3 成骨细胞分组
  •     1.3.4 CCK-8法检测成骨细胞增殖情况
  •     1.3.5 AKP活性检测
  •     1.3.6 酶联免疫吸附法检测成骨细胞I型胶原蛋白表达
  •     1.3.7 Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡
  •     1.3.8 Western blot检测凋亡及GRP78/PERK/CHOP通路相关蛋白表达变化
  •   1.4 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 成骨细胞显微结构观察
  •   2.2 淫羊藿苷对成骨细胞增殖的影响
  •   2.3 淫羊藿苷对成骨细胞分化的影响
  •   2.4 淫羊藿苷对成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
  •   2.5 淫羊藿苷对成骨细胞凋亡的影响
  •   2.6 淫羊藿苷对成骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响
  •   2.7 淫羊藿苷对成骨细胞GRP78/PERK/CHOP通路相关蛋白表达的影响
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 唐晓悦,朱浩,曹灿

    关键词: 淫羊藿苷,脂多糖,成骨细胞,细胞凋亡,葡萄糖调节蛋白,蛋白激酶样内质网激酶,同源蛋白通路

    来源: 中国药师 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 中药学

    单位: 中国人民解放军北部战区总医院和平分院口腔科,中国人民解放军北部战区总医院口腔颌面外科,中国人民解放军北部战区总医院口腔科

    基金: 辽宁省科学技术计划项目(编号:201601404)

    分类号: R285.5

    页码: 2177-2182

    总页数: 6

    文件大小: 1360K

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