北部战区总医院和平院区
摘要：目的：研究放疗前宫颈癌组织IER5表达与中子刀疗效的相关性。方法：收集并选择不同照射剂的宫颈癌标本进行研究，共计30例，照射剂量分别为7.5Gy、15Gy、22.5Gy、30Gy，分别实施免疫组化法、逆转录聚合酶链式反应检测IER5mRNA与蛋白表达水平，对比各组低IER5与高IER5蛋白表达宫颈癌患者的临床获益率，同时运用Spearman法对放疗前IER5蛋白表达与中子刀疗效的相关性情况进行分析。结果：观察IER5蛋白表达与IER5mRNA情况，不同照射剂量宫颈癌组IER5蛋白与IER5mRNA的相对表达量对比差异明显P＜0.05，照射剂量越大，IER5蛋白与IER5mRNA相对表达也将越显著。结论：在照射剂量增长的同时，宫颈癌患者的临床获益率也将增长，放疗前，宫颈癌组织IER5蛋白与中子刀疗效以正相关的趋势呈现出来。
关键词：宫颈癌组织；IER5表达；中子刀疗效
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌为45～55岁，近年来其发病逐渐呈现出年轻化趋势。近几十年宫颈细胞学筛查的普遍应用，使宫颈癌和癌前病变得以早期发现和治疗。中子刀治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗手段。它能够利用阴道和子宫这一天然通道，置入中子源直接针对原发灶照射，同时基于近距离治疗的剂量学特点，能够在病灶形成高剂量区，从而最大程度地杀灭癌细胞。
1资料与方法
1.1一般资料
选择我院于2017年2月-2019年7月来我院治疗宫颈癌的30例患者进行研究，所有患者均经病理检查且确诊为宫颈鳞癌，且对中子刀耐受。患者年龄32-57岁，平均年龄（41.36±5.71）岁；患者临床分期有19例Ⅱ期与11例Ⅲ期。对比患者的临床资料情况，差异性较小，P＞0.05，有对比价值。
1.2方法
针对放疗所接受照射剂量分为不同剂量组，即7.5Gy组、15Gy组、22.5Gy组、30Gy组，再以IER5蛋白表达水平来区分四个照射剂量组，即高表达组与低表达组。采集患者的标本，于患者中子刀治疗剂量达到7.5Gy、15Gy、22.5Gy、30Gy后运用活检钳在宫颈病灶处取出标本组织（大小约3-4mm3），将其放置在液氮中加以保存，在5天内转于冰柜中储存备用。
IER5mRNA水平检测：采用RNA试剂盒将样本中RNA提取出来，再经HIFI-MMLVcDNA试剂盒冠状反转录，其反应体系为20μL，并在cDNA的模板基础上实施PCR扩增，参考下方文献资料[1]对IER5mRNA相对表达量加以计算。
IER5蛋白水平检测：参考文献：资料[2]对IER5蛋白水平进行检测，对收集的样本进行脱水、渗透、包埋、切片、贴片、脱蜡、水化与修复抗原等处理，在加入过氧化物酶后将其封闭起来（10分钟），再用PBS缓冲液冲洗干净，于显微镜下观察，细胞浆初染成棕褐色或棕黄色的细胞即判定为IER5蛋白表达阳性细胞，选择五个高倍视野将阳性细胞率不低于70%的记录为IER5蛋白高表达。通过Image-ProPlus6.0软件分析染色结果，以此来得到光密度值，并在此基础上分析出IER5蛋白相对表达情况[3-4]。
1.3指标观察
对比不同照射剂量宫颈癌组织中的蛋白与IER5mRNA表达水平，同时对比其高IER5蛋白表达与低IER5蛋白表达患者的获益率。获益率即为完全缓解率（观察的目标病灶全部消失不见，消失时间不低于30天）、部分缓解率（观察的目标病灶缩小率不低于50%，消失时间不低于30天）以及稳定率（观察的目标病灶均有所改善，然而却未达到完全缓解与部分缓解的标准）之和。
1.4统计学方法
此研究分析的数据全部使用SPSS22.0软件进行处理、统计分析，计量资料以“x±s”来表示，数据检验为“X2”。得出的结果为P＜0.05时，差异对比显著，有统计学对比意义。
2结果
观察IER5蛋白表达与IER5mRNA情况，不同照射剂量宫颈癌组IER5蛋白与IER5mRNA的相对表达量对比差异明显P＜0.05，照射剂量越大，IER5蛋白与IER5mRNA相对表达也将越显著，与此同时，两个样本间的IER5蛋白与IER5mRNA相对表达对比差异也具有一定的统计学意义（P＜0.05），详见表1。
观察IER5蛋白表达水平不同照射剂量中的临床获益率，患者在接受不同照射剂量治疗时，其标本高IER5蛋白表达病患的临床获益率均比低IER5蛋白表达高，差异对比明显，有统计学意义（P＜0.05），详见表2。
观察放疗前IER5蛋白表达与中子刀疗效的相关性情况，放疗前有20例IER5蛋白低表达与10例IER5蛋白高表达，在20例高表达患者中，累积30Gy照射剂量治疗病患的临床获益率为55.00%（11/20），而在10例高表达病患中，累积30Gy照射剂量治疗病患的临床获益率为80.00%（8/10）。经Spearman相关性分析得知，放疗前IER5蛋白表达与中子刀疗效呈现出正相关性P＜0.05。
表1比较IER5蛋白与IER5mRNA在不同照射剂量中的相对表达情况
3讨论
据调查研究显示，宫颈癌的新发病例在全球每年约有五十万的速度增涨着，而发展中国家约占百分之八十，我国占据了全球的28%。治疗宫颈癌的方式有化疗、放疗、手术治疗，有80%的患者需给予放疗，放疗的效果在很大一部分情况下会取决于患者机体的敏感性。IER5（早期快速反应基因5）是一类早期慢反应基因，在受到外界刺激后，IER5会有所变化，宫颈癌患者在辐射下的IER5基因与蛋白表达上调与其预后有着紧密的联系，为分析放疗前宫颈癌组织IER5表达与中子刀疗效问题而在下方展开了相关的研究报告。
从本研究调查结果来看，患者在接受不同照射剂量治疗时，其标本高IER5蛋白表达病患的临床获益率均比低IER5蛋白表达高，差异对比明显，有统计学意义P＜0.05。
参考文献：
[1]王永才，宋伟，张鹏，周凤佳，朱广渊，张爽.放疗前宫颈癌组织IER5表达与中子刀疗效的相关性[J].贵州医科大学学报，2018，43（11）：1344-1347+1352.
[2]吉晨，吴玉梅，李秀楠，周平坤.宫颈癌细胞辐射敏感性与IER5基因的关系[J].肿瘤学杂志，2017，23（4）：305-311.
[3]史海敏，丁库克，周平坤，陈丹，郭冬梅，赵春丽，张新.GCF低表达宫颈癌HeLa细胞系的构建及辐射对其调控IER5基因表达的初步探究[J].医学研究杂志，2015，44（04）：37-41.
[4]吉晨，吴玉梅.早期快速反应基因5在宫颈癌细胞中的作用机制[J].医学综述，2015，21（1）：40-42.