PEDV分离株S1基因的重组杆状病毒真核表达

论文摘要

为了研究猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）分离株（PEDV/LA/2014/02）纤突蛋白（S1）的真核表达及其反应原性,本研究利用杆状病毒真核表达系统表达出重组His-PEDV-S1蛋白。利用在线软件分析PEDV S1基因在sf9细胞内的稀有密码子,经优化密码子后的基因进行人工合成,合成后的PEDV S1基因被克隆至杆状病毒的穿梭载体（pFastBac HT A）中,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行重组,PCR方法验证后将重组成功的杆状病毒基因组转染sf9细胞,获得包装成功的杆状病毒,该病毒进一步接种sf9细胞,显微镜观察重组病毒引起的细胞病变,RT-PCR方法验证PEDV S1基因的mRNA表达水平,SDS-PAGE、Western blotting方法验证重组PEDV S1蛋白的表达及其反应原性。结果显示,试验成功构建了重组穿梭质粒pFastBac HT A-PEDV-S1（pSL598）,成功包装表达了PEDV S1的重组杆状病毒,重组杆状病毒能使sf9细胞出现细胞变大、胞内有空泡等典型病变,PEDV S1基因的mRNA获得表达,重组蛋白His-PEDV-S1在sf9细胞中得到表达,蛋白质大小为83 ku左右,主要存在于细胞沉淀中,表达的重组蛋白能与小鼠抗His抗体和猪抗PEDV阳性血清反应,说明该蛋白具有较好的反应原性。本研究为研制PEDV新流行毒株新型亚单位疫苗和防控该毒株的流行提供了材料。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 何海健,吴瑗,王鲁彦,李群景,巴少波,石林,邵春艳,孙静,姜胜,王晓杜

关键词: 猪流行性腹泻病毒,纤突蛋白,杆状病毒表达系统,真核表达

来源: 中国畜牧兽医 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 金华职业技术学院农业与生物工程学院,浙江农林大学动物科技学院

基金: 浙江省科技重点研发计划项目(2018C02028),浙江省自然科学基金(LY16C180001),金华市农业类重点研发项目(2016-2-013,2018-2-004)

分类号: S852.651

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.03.023

页码: 832-839

总页数: 8

文件大小: 1495K

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