导读:本文包含了脱卤酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:丙醇,光谱,突变,基因,丙氨酸,烷烃,丙烷。
脱卤酶论文文献综述
亚香菊,王于齐,朱鑫海,经玉洁,林茜[1]（2019）在《卤醇脱卤酶催化合成(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的工艺优化》一文中研究指出以卤醇脱卤酶重组湿菌体E. coli BL21(pET28a-HHDH)为催化剂,催化外消旋的1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的动力学拆分可以获得光学纯的(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇。本文系统地研究了卤醇脱卤酶催化合成光学纯(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的影响因素,对反应pH、反应温度、菌体浓度、亲核试剂N3-浓度和底物浓度进行了探究。结果表明,卤醇脱卤酶催化合成(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的最佳工艺条件为:pH为7.0,反应温度为28℃,菌体浓度为22.5g/L,亲核试剂NaN3的浓度为50mmol/L,底物外消旋1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的浓度为10mmol/L。在此工艺条件下,(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的ee值和收率分别为100%和16.97%。(本文来源于《化工进展》期刊2019年08期）
亚香菊[2]（2019）在《卤醇脱卤酶的基因挖掘、催化性能及其分子改造研究》一文中研究指出卤醇脱卤酶能够在温和条件下催化邻卤醇脱卤和环氧化物的开环,在手性环氧化物和β-取代醇的合成方面具有极大的应用潜力。但是到目前为止立体选择性优异的卤醇脱卤酶仅有HheC,为了满足应用的需求,开发新型高效、选择性好、活性高的生物催化剂,已经成为卤醇脱卤酶工业应用基础研究的重点研究方向。本文首先以HheC和HheB为基因探针,通过基因挖掘法获得了10种潜在的卤醇脱卤酶基因,其中9种在大肠杆菌中成功表达。以苯基缩水甘油醚((R,S)-PGE)为模式底物,通过显色反应和高效液相色谱检测比较,筛选获得3种高活性且具有不同选择性的卤醇脱卤酶;经引入组氨酸标签后,确定了一种来源于菌株Pseudomonas pohangensis的HHDH_(His)10作为后续研究对象,其与HheB的同源性为44%,与HheC的同源性为31%,并对(R,S)-PGE表现出R选择性。通过Ni-NTA柱纯化目标蛋白,并对其酶学性质进行研究。其最适脱卤反应温度为40℃,最适脱卤反应pH为10.0,最适开环反应pH为7.5,该酶在pH6.0-7.5范围内和温度低于50℃时具有较好的稳定性。HHDH_(His)10具有较广的底物谱,对多种卤代醇和环氧化物表现出较好的活性及对映选择性。该酶对底物(R,S)-PGE的K_m为31.75 mM,V_(max)为32.79μmol·min~(-1)·mg~(-1)。HHDH_(His)10对(R,S)-PGE表现出较好的对映选择性,在20 mM的底物浓度下,获得的(S)-PGE的ee值和收率分别为>99%和16.35%;在pH 7.5和pH 8.0条件下,HHDH_(His)10催化拆分1-氯-3-苯氧基-2-丙醇(7)的单酶串联反应中,获得的(R)-7的ee值均可达>99%,收率约为25%。为提高酶的立体选择性,尝试对酶进行半理性设计改造,利用同源建模和分子对接技术,选定底物结合口袋附近的6个氨基酸残基(Gln159、Asn160、Phe161、Tyr167、Phe168和Pro169)进行定点饱和突变和组合突变。以(R,S)-PGE为模式底物,通过高效液相色谱检测,获得3个立体选择性提高的突变体,分别是Q159L、N160L和P169Q,其对映体选择率分别约从9.85提高到21.80,21.10和10.84,其中突变体N160L的选择性和原始酶是相反的。我们还尝试对突变体进行迭加突变,但是并未检测到选择性提高的阳性突变体。利用亲和层析分离纯化突变体N160L和Q159L,结果发现突变后的酶活相比较于原始HHDH_(His)10明显降低,分别为原始酶的56.75%和47.45%。通过对突变体N160L与Q159L的环氧化物底物谱进行研究,两突变体除了对底物邻乙基苯基缩水甘油醚(12)和苯基环氧乙烷(16)选择性没有提高以外,对于其它底物的选择性均有一定程度的提高,尤其是突变体N160L对底物对甲基苯基缩水甘油醚(11)的E值提高到了25.77,是原始HHDH_(His)10的13.93倍。对突变体N160L与原始HHDH_(His)10对映选择性相反的机理进行分析,结果表明:通过将突变体N160L与(R)-PGE和(S)-PGE分子对接发现,两个氨基酸残基Ser116和Tyr129与(R)-PGE和(S)-PGE底物的氧原子之间形成的氢键的距离不同,导致发生作用的作用力存在差异,从而出现了构型逆转的现象。利用突变体N160L动力学拆分(R,S)-PGE(20-200 mM),获得(R)-PGE的最大ee值可达>99%,收率最高达到30.92%。(本文来源于《江苏科技大学》期刊2019-05-29）
霍姣[3]（2019）在《卤醇脱卤酶的酶学性质及其进化的研究》一文中研究指出卤醇脱卤酶通过分子内亲核取代机制催化邻卤醇脱卤生成手性环氧化物,并可以在不同非自然亲核试剂介导下催化环氧化物开环生成手性?-取代醇。因此卤醇脱卤酶可用于手性环氧化物和手性?-取代醇等一类高价值手性药物中间体的合成。此外,卤醇脱卤酶也可以降解异生质卤化物,在环境治理方面也有着较高的应用价值。在本研究中主要是对新发现的卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)高效表达、酶学特性、分子改造及其应用方面进行研究,具体成果如下:(1)通过实验研究发现卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)的最佳表达条件为:当OD_(600)=1.0时加入终浓度为0.05 mmol/L的IPTG并在24℃,150 rpm的诱导条件下诱导10 h,卤醇脱卤酶所表达出的酶活最高可达1438.25 U/mL。(2)研究卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)以1,3-二氯-2-丙醇为底物时的酶学特性,通过研究发现其最适反应温度为47℃,最适反应pH为8.67,且该酶在35-40℃范围内较稳定,且当Zn~(2+)的浓度为0.8 mmol/L时对催化反应具有较好的促进作用,该酶对1,3-二氯-2-丙醇的动力学参数K_m=0.035 mmol/L,最大反应速率V_(max)=0.0025mol/min。(3)对卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)采用易错PCR进行定向进化构建突变文库,并采用比色法对突变文库进行筛选,最终筛选到一株立体选择性提高6.6倍的阳性突变体。(4)在研究卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)催化1,3-二氯-2-丙醇生成环氧氯丙烷时,发现最佳催化条件为:最适pH=8.34,最适温度为45℃,底物浓度为30 mmol/L,在此条件下转化2 h后,1,3-二氯-2-丙醇的最高转化率可达89.4%。通过实验研究发现卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)对高效氯氰菊酯具有降解作用,当降解温度为45℃时降解2 h后高效氯氰菊酯的降解率可以达到41.2%。(本文来源于《武汉科技大学》期刊2019-05-01）
孙鹏,杜宇,吕燕,孙雪,徐年军[4]（2019）在《龙须菜卤代烷烃脱卤酶基因的转录及原核表达》一文中研究指出卤代烷烃脱卤酶(HLD)是一类能降解卤代脂肪化合物的酶,为今后将藻类HLD用于环境中卤素化合物的降解提供资料,本实验利用生物信息学、荧光定量PCR和pET28a表达系统对大型红藻龙须菜中HLD的酶学特性、转录表达和原核表达进行了研究。生物信息学分析结果显示,龙须菜中HLD基因(记为GlHLD)开放阅读框长969 bp,理论分子量约为36.33 ku,等电点约为5.53;该Gl HLD序列与绳状龙须菜的一条HLD序列(PXF45553.1)完全一致,与绳状龙须菜和皱波角叉菜等红藻优先聚类。荧光定量PCR结果表明,高温下底物1,2-二氯乙烷和植物激素水杨酸可促进GlHLD基因的表达,其表达量分别为常温组的3.64、2.64和2.43倍。GlHLD与pET28a质粒构建的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出具有脱卤酶活性的蛋白;该蛋白的最佳诱导条件为16°C、0.1 mmol/L IPTG诱导12 h,最后用镍柱对GlHLD蛋白进行了初步纯化。本研究为进一步了解藻类HLD家族及获得高纯度HLD酶奠定了基础。(本文来源于《水产学报》期刊2019年12期）
赵智鹏[5]（2019）在《探究卤醇脱卤酶HheC催化过程中四个Loop环的协同构象变化》一文中研究指出卤醇脱卤酶(HHDHs)通过分子内亲核取代机制催化邻卤醇水解转化为环氧化物,也可以接受不同的亲核试剂如CN~-、N_3~-、NO_2~-等催化环氧化物的开环反应,在处理有机卤化物污染物和合成手性药物中间体方面有着极高的研究价值。其中卤醇脱卤酶HheC的活性中心包埋在酶分子内部,由四个Loop片段环绕而成,包括底物结合口袋和卤离子结合位点。先前的研究表明:1.卤离子的释放是催化脱卤反应中的限速步骤;2.Loop3片段为卤离子结合位点区域,在催化过程中对卤离子的结合和释放起到了关键作用,且该过程伴随有构象变化的发生;3.Loop4片段也被证明对催化活性和热稳定性有着显着调控作用。目前对Loop1和Loop2区域并没有进行深入探索,且对整个酶活性中心的构象变化的结构基础也没有具体阐述。本文通过实验手段与计算机技术相结合对酶催化过程中的构象变化和卤离子通道结构动力学进行较为系统研究,从蛋白质柔性变化的角度对上述关键问题进行了阐述。通过丙氨酸扫描找到Loop1和Loop2上对活性影响较大的关键位点D80,I81,F82,P84,F86,T134,W139和L142,其中D80A,I81A,F82A叁个突变体无明显活性;其余五个位点突变为丙氨酸后活性均有2倍以上的显着提升。构建关键位点的饱和突变文库并进行活性筛选,结果表明D80,I81,F82叁个位点未检测到有明显活性的突变体,表明这叁个氨基酸对酶发挥催化功能的重要性;其余五个位点的饱和突变文库中筛选到了活性有不同程度提升的突变体。为了进一步探究构象变化对酶活性的影响,将位于同一Loop环上的关键位点优势突变体进行迭加,得到了一系列酶活性提高6-15倍的迭加优势突变体。通过分子动力学(MD)模拟技术对上述优势突变体的叁维结构进行优化,同时对氨基酸之间的相互作用力进行分析。结果表明:关键位点的丙氨酸突变体P84A,F86A,T134A,W139A和L142A以及W139的一系列优势突变体的活性中心柔性增加,推测可能是通过减小残基侧链,使得活性空间变大,且与周围氨基酸的相互作用减弱,有利于蛋白质构象发生改变,进而导致酶的催化活性大大升高。该推断在多个活性提高的迭加突变体中(如P84A-F86A)也得到进一步证明。综上所述,底物结合口袋或者卤离子结合位点处Loop的柔性改变是酶活性升高的主要原因。通过对分子动力学模拟得到卤离子从活性中心释放到溶剂中的运动轨迹进行分析得到了处于不同时刻的Br-位置,得到其周围可能相互作用的氨基酸,并对卤离子的释放通道进行预测。结果发现Loop1区域上的F82-P84位点,Loop3区域上的P175-L178和Y185-Y187位点,Loop4的W249以及F12位点,对卤离子释放起到了关键作用。叁维结构的比对也表明,这些位点在卤离子释放前后构象发生了较大改变。由此得出,这些氨基酸可能参与卤离子释放过程中所伴随的构象变化,相关研究可以对后续的卤醇脱卤酶改造奠定了理论基础。(本文来源于《电子科技大学》期刊2019-04-01）
堵瑄[6]（2019）在《卤醇脱卤酶红外及荧光探针标记及其结构动力学研究初探》一文中研究指出卤醇脱卤酶不仅能够降解环境中存在的有机卤化物,还能合成具有手性的环氧化物和β-取代醇,其催化机理和广泛的应用前景近年来备受关注。卤醇脱卤酶的动态结构变化与其生物功能紧密相连,是卤醇脱卤酶发挥功能的重要结构基础,对其结构动力学的研究有助于揭示卤醇脱卤酶的催化反应机理,以及提升酶的改造效率。众所周知,光谱技术在研究酶蛋白结构的动态性方面具有广泛应用,相关研究需要在酶蛋白中嵌入合适的光谱探针,因此探针对酶蛋白的标记就显得尤为重要。本研究结合了生物学技术和光谱技术,将红外、荧光探针位点特异性的嵌入卤醇脱卤酶中,探针标记卤醇脱卤酶的位点不受局限,对所处的微环境非常敏感,且能精准地反映出酶蛋白动态结构的微小变化,在蛋白质结构动力学研究中具有显着优势。本研究应用密码子扩展法将非天然氨基酸Naek引入HheC的K140,K161,P184叁个位点,通过优化表达体系和亲和层析得到了迭氮基团修饰的酶蛋白,并进行了酶催化特性及红外光谱检测。实验结果表明:(1)184~+突变体的酶活最佳,并且具有与野生型相当的热稳定性、最适反应温度;(2)由于探针所处微环境的极性不同,K140,K161,P184叁个突变体的红外特征峰分别位于2131 cm~(-1),2137 cm~(-1),2183 cm~(-1)波数处,并且迭氮的峰位会随着溶液极性的强弱而变化;(3)高浓度盐酸胍溶液使酶蛋白结构趋向统一,其红外特征峰变窄,分布更为集中。然而,红外光谱检测氯离子结合后酶的构象变化不够灵敏,因此在后续实验中尝试用荧光手段探究卤离子对卤醇脱卤酶构象的影响在上述研究基础上,通过SPAAC环加成点击反应,将含有炔烃的化学荧光染料DBCO-CY_5位点特异性的连在卤醇脱卤酶上,进行了酶活力和荧光光谱检测;研究还通过定点突变构建了卤醇脱卤酶的单色氨酸突变体。实验结果表明:(1)卤醇脱卤酶的外源荧光嵌入效率可以达到49.03%,突变体在670 nm处有最大荧光发射峰,最大荧光强度为1469,并且点击反应过程不会损失酶活力;(2)在卤离子结合实验中,Cl~-和Br~-与卤醇脱卤酶的结合能够影响其外源相对荧光强度,而F~-却不能影响酶蛋白的外源荧光强度,这也说明184位点参与了酶蛋白在行使催化功能时的构象变化。综上所述,本研究成功构建了卤醇脱卤酶的红外和荧光探针,为后续研究卤醇脱卤酶的结构动力学奠定了基础。(本文来源于《电子科技大学》期刊2019-04-01）
亚香菊,王于齐,朱鑫海,经玉洁,林茜[7]（2019）在《来源于Xylophilus ampelinus的卤醇脱卤酶的克隆表达及应用》一文中研究指出卤醇脱卤酶可以高对映选择性地催化环氧化物和邻卤醇之间的相互转化,用于合成各种光学纯的卤代醇、环氧化物和β-取代醇。利用数据库挖掘技术,从Xylophilus ampelinus中获得一种新型卤醇脱卤酶HHDH-Xa基因,对其进行了克隆,以pET-28a(+)作为表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效重组表达。序列分析结果表明,该片段包含681个核苷酸,编码226个氨基酸。SDS-PAGE分析结果表明,该酶的分子量约为25kDa。底物特异性研究发现,该酶具有较宽的底物谱,分别对苯基缩水甘油醚和1,3-二溴-2-丙醇表现出了较高的活性。卤醇脱卤酶HHDH-Xa催化1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的生物级联反应可以获得光学纯的(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇及相应的1-迭氮-3-苯氧基-2-丙醇。(本文来源于《化学与生物工程》期刊2019年02期）
王露,徐刚,杨立荣,吴坚平[8]（2018）在《迭代饱和突变提高卤醇脱卤酶HheA_(AM)催化制备6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的酶活》一文中研究指出(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯(A7)是合成降血脂药物阿托伐他汀钙的关键手性中间体,利用卤醇脱卤酶催化(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯(D3)的脱卤氰化反应制备A7是很有潜力的合成方法。现有研究存在的主要问题是卤醇脱卤酶种类少,对底物D3的催化活性很低,且鲜见有关脱卤酶分子改造提高其对D3催化活性的报道。本研究利用基因挖掘技术获得了一个对D3表现出较高催化活力的卤醇脱卤酶HheA_(AM) (来源于Agromycesmediolanus sp.),运用定向进化和半理性设计方法确定了4个影响酶活的关键位点(84、88、136、144位),然后使用迭代饱和突变(ISM)策略对这4个位点进行组合突变,突变株M4-HheA_(AM)(84S-88L-136T-144C)的比酶活为0.89U·mg-1,是野生型HheA_(AM)(Wt-HheA_(AM))的13倍,对D3的催化活性得到了显着的提高。(本文来源于《高校化学工程学报》期刊2018年05期）
童超迪,吴坚平,杨立荣,徐刚[9]（2018）在《X射线衍射晶体法解析脱卤酶DehDIV-R结构的研究》一文中研究指出R-2-卤代酸脱卤酶能立体选择性水解R-2-卤代酸。解析酶的单晶结构对提高酶的选择性和活性提供了直接的结构指导,是目前酶结构领域研究的前沿。以实验室前期得到的来自假单胞菌ZJU26的R-2-氯丙酸脱卤酶(Deh DIV-R)为研究对象,采用X射线衍射晶体法进行结构解析。采用pp SUMO载体融合表达Deh DIV-R蛋白,依次通过Ni-NTA亲和层析、透析酶切、二次NiNTA亲和层析以及凝胶过滤层析纯化得到单一条带,且均一性好的蛋白。接着对结晶条件进行初筛与优化,得到的最佳结晶条件为0.1mol/L HEPES p H 7,12%PEG 6 000,0.2mol/L Mg Cl2,8mmol/L CHAPS。晶体在上海同步辐射光源BL18U1线站上收集衍射数据,采用分子置换法成功解析获得了分辨率为2.35的Deh DIV-R的晶体结构。Ramachandran图表明98.02%的氨基酸位于最适区,证明了该结构的合理性。Deh DIV-R的纯化、结晶以及结构解析为进一步深入了解其结构和功能奠定了基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2018年08期）
王露[10]（2018）在《分子改造提高卤醇脱卤酶HheA_(AM)催化制备(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的酶活》一文中研究指出(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯(A7)是降血脂药物阿托伐他汀钙的关键手性中间体,利用卤醇脱卤酶催化(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯(D3)的脱卤氰化反应制备A7是很有潜力的合成方法。现有研究存在的主要问题是适用的卤醇脱卤酶种类少,对底物D3的催化活性很低,且鲜见有关卤醇脱卤酶分子改造提高其对D3催化活性的报道。本研究以D3为目标底物,对卤醇脱卤酶进行了筛选和分子改造,主要结果如下:(1)利用基因挖掘技术建立了 一个卤醇脱卤酶酶库,筛选获得了 一个对D3具有较高催化活力的卤醇脱卤酶HheAAM(来源于Agromyces mediolanus sp.),其全细胞催化反应酶活为13 U.L-1,比酶活为69.06 U·g-1,高于现有报道的HheC类卤醇脱卤酶HHDH和Mut-HheC2360;(2)分别利用定向进化和半理性设计方法对HheAAM进行改造:通过易错PCR方法筛选得到6个阳性突变体,均在84/88位发生突变,对84位和88位进行定点饱和突变得到另外9个阳性突变体,突变体酶活分别为Wt-HheAAM的1.32-3.46倍;根据分子对接结果对底物结合区域附近的位点进行定点饱和突变,得到4个在136/144位发生突变的阳性突变体,酶活分别为Wt-HheAAM的1.78-3.13 倍;(3)分别利用迭代饱和突变(ISM)和CASTing策略对4个关键位点(84,88,136,144位)进行组合突变:前者筛选得到14个阳性突变体,酶活分别为Wt-HheAAM的1.78-15.19倍;后者筛选得到19个阳性突变体,酶活分别为Wt-HheAAM的 1.03-11.98 倍。其中最优突变体 M4-1(84S-88L-136T-144C)的比酶活为887.80 U.g-1,是Wt-HheAAM的13倍,对D3的催化活性得到了显着的提高。同时,M4-1的最适反应pH由7.5变为8.0,最适反应温度由55℃变为60℃,50℃下的半衰期(t1/2,50℃)由 0.87h变为 2.38h。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-05-04）
脱卤酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
卤醇脱卤酶能够在温和条件下催化邻卤醇脱卤和环氧化物的开环,在手性环氧化物和β-取代醇的合成方面具有极大的应用潜力。但是到目前为止立体选择性优异的卤醇脱卤酶仅有HheC,为了满足应用的需求,开发新型高效、选择性好、活性高的生物催化剂,已经成为卤醇脱卤酶工业应用基础研究的重点研究方向。本文首先以HheC和HheB为基因探针,通过基因挖掘法获得了10种潜在的卤醇脱卤酶基因,其中9种在大肠杆菌中成功表达。以苯基缩水甘油醚((R,S)-PGE)为模式底物,通过显色反应和高效液相色谱检测比较,筛选获得3种高活性且具有不同选择性的卤醇脱卤酶;经引入组氨酸标签后,确定了一种来源于菌株Pseudomonas pohangensis的HHDH_(His)10作为后续研究对象,其与HheB的同源性为44%,与HheC的同源性为31%,并对(R,S)-PGE表现出R选择性。通过Ni-NTA柱纯化目标蛋白,并对其酶学性质进行研究。其最适脱卤反应温度为40℃,最适脱卤反应pH为10.0,最适开环反应pH为7.5,该酶在pH6.0-7.5范围内和温度低于50℃时具有较好的稳定性。HHDH_(His)10具有较广的底物谱,对多种卤代醇和环氧化物表现出较好的活性及对映选择性。该酶对底物(R,S)-PGE的K_m为31.75 mM,V_(max)为32.79μmol·min~(-1)·mg~(-1)。HHDH_(His)10对(R,S)-PGE表现出较好的对映选择性,在20 mM的底物浓度下,获得的(S)-PGE的ee值和收率分别为>99%和16.35%;在pH 7.5和pH 8.0条件下,HHDH_(His)10催化拆分1-氯-3-苯氧基-2-丙醇(7)的单酶串联反应中,获得的(R)-7的ee值均可达>99%,收率约为25%。为提高酶的立体选择性,尝试对酶进行半理性设计改造,利用同源建模和分子对接技术,选定底物结合口袋附近的6个氨基酸残基(Gln159、Asn160、Phe161、Tyr167、Phe168和Pro169)进行定点饱和突变和组合突变。以(R,S)-PGE为模式底物,通过高效液相色谱检测,获得3个立体选择性提高的突变体,分别是Q159L、N160L和P169Q,其对映体选择率分别约从9.85提高到21.80,21.10和10.84,其中突变体N160L的选择性和原始酶是相反的。我们还尝试对突变体进行迭加突变,但是并未检测到选择性提高的阳性突变体。利用亲和层析分离纯化突变体N160L和Q159L,结果发现突变后的酶活相比较于原始HHDH_(His)10明显降低,分别为原始酶的56.75%和47.45%。通过对突变体N160L与Q159L的环氧化物底物谱进行研究,两突变体除了对底物邻乙基苯基缩水甘油醚(12)和苯基环氧乙烷(16)选择性没有提高以外,对于其它底物的选择性均有一定程度的提高,尤其是突变体N160L对底物对甲基苯基缩水甘油醚(11)的E值提高到了25.77,是原始HHDH_(His)10的13.93倍。对突变体N160L与原始HHDH_(His)10对映选择性相反的机理进行分析,结果表明:通过将突变体N160L与(R)-PGE和(S)-PGE分子对接发现,两个氨基酸残基Ser116和Tyr129与(R)-PGE和(S)-PGE底物的氧原子之间形成的氢键的距离不同,导致发生作用的作用力存在差异,从而出现了构型逆转的现象。利用突变体N160L动力学拆分(R,S)-PGE(20-200 mM),获得(R)-PGE的最大ee值可达>99%,收率最高达到30.92%。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脱卤酶论文参考文献
[1].亚香菊,王于齐,朱鑫海,经玉洁,林茜.卤醇脱卤酶催化合成(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的工艺优化[J].化工进展.2019
[2].亚香菊.卤醇脱卤酶的基因挖掘、催化性能及其分子改造研究[D].江苏科技大学.2019
[3].霍姣.卤醇脱卤酶的酶学性质及其进化的研究[D].武汉科技大学.2019
[4].孙鹏,杜宇,吕燕,孙雪,徐年军.龙须菜卤代烷烃脱卤酶基因的转录及原核表达[J].水产学报.2019
[5].赵智鹏.探究卤醇脱卤酶HheC催化过程中四个Loop环的协同构象变化[D].电子科技大学.2019
[6].堵瑄.卤醇脱卤酶红外及荧光探针标记及其结构动力学研究初探[D].电子科技大学.2019
[7].亚香菊,王于齐,朱鑫海,经玉洁,林茜.来源于Xylophilusampelinus的卤醇脱卤酶的克隆表达及应用[J].化学与生物工程.2019
[8].王露,徐刚,杨立荣,吴坚平.迭代饱和突变提高卤醇脱卤酶HheA_(AM)催化制备6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的酶活[J].高校化学工程学报.2018
[9].童超迪,吴坚平,杨立荣,徐刚.X射线衍射晶体法解析脱卤酶DehDIV-R结构的研究[J].中国生物工程杂志.2018
[10].王露.分子改造提高卤醇脱卤酶HheA_(AM)催化制备(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的酶活[D].浙江大学.2018
论文知识图
