罗建文凌显桢（广西宜州市中医院546300）
【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）12-0051-02
【摘要】目的分析血凝仪测定PT、APTT、TT、Fib的最佳因素。方法用德国BE的康派X血凝仪测定20例健康体检者在不同抗凝剂、不同试管、不同操作技术相应的PT、APTT、TT、Fib值。结果血液和枸橼酸钠之比为1：9与1：5存在差异，1：9为好；玻璃管与硅化和塑料试管相比影响检测结果；技术熟练者与技术生疏者操作的实验结果存在一定的差异。结论检测PT、APTT、TT、Fib时要严格控制血液与抗凝剂比例，忌用玻璃管，操作者熟练后在操作。
【关键词】凝血四项血凝仪影响因素
PT、APTT、Fib、TT为凝血四项，反映了血液的内源性凝血系统的各凝血因子的综合情况，此项目是我科常规检查项目，在术前必需做。德国BE的康派X血凝仪性能稳定，操作简单，故障率低，效率高。其原理为运用比浊离心分析法检测样品凝集前后的光散射变化。虽血凝仪具有快速、敏感、检测项目多的优点，在急救、溶栓治疗、抗凝及术前检测等诸方面起到了重要作用，临床科室的诊断水平和诊断鉴别能力也得到了大大的提高。但是，因为受到很多因素的影响，医生对检测的结果反映不一。我们把日常我院工作碰到的一些对凝血四项检测结果有影响的相关因素总结如下。
1标本的采集与处理
1.1血样的采集神经紧张、剧烈运动和情绪激动都会使血小板增多，凝血及纤溶活性增强。标本不能含有凝块，否则自动血凝分析仪对PT、APTT及TT的检测结果会缩短，Fib会降低。最好使用含枸橼酸钠液的专用硅化采血管和大号针头采血；操做者应该熟练做到穿刺一针见血、避免淤血、防止产生气泡和组织液污染；防止组织损伤，进入外源性凝血因子；止血带不宜过紧、时间不应过长（小于3min）；采血时要平稳顺利，防止产生气泡；不能从输液处或伤口侧附近采血。尽可能单独采血，如果和其他项目一起抽血时，应取第一管为好[1]。
1.2样本的抗凝抗凝剂的浓度关系到试验结果的准确性，建议使用血液与枸橼酸钠（0.109mol/L）1∶9抗凝。若两者的比例增大或者减少会影响实验结果，见表1。结果显示：红细胞压积为45%，血液与抗凝剂的比例分别为1∶9和1∶5，则TT检测结果分别为11.6s和18.6s，有显著差异。变质的枸橼酸钠溶液会使PT、APTT的结果缩短，非缓冲枸橼酸钠的pH值>8时，会破坏硅化试管的硅层而影响检测结果，其最佳的pH值为5.7。而EDTA、肝素、草酸盐等抗凝剂不适合用于血凝试验[2]。当红细胞压积>50%或<20%时，抗凝剂、血比例要按下列的公式调整：抗凝剂用量（ml）=0.00185×血液量（ml）×[1-HCT（%)]，RBC增多症的红细胞压会偏高，从而PT、APTT会延长，所以，要依据红细胞的压积值高低而随时改变抗凝剂的比例。
表1抗凝剂对测定结果的影响（n=20,x±s）
1.3样本的处理采集血液标本于硅化或塑料试管中，分离血浆用塑料积液管,分离后要存于硅化或塑料带塞试管中,忌放于玻璃管中,因为玻璃管会激活凝血,影响到检测结果，见表2。血样采集后要尽快送检，运送中要防止剧烈震动。样本保存时间和温度的不同，凝血因子的促凝活性会受影响。若样本不能立刻测试，标本检测前要塞紧盖子，否则CO2会挥发，PH增高，使PT、APTT延长。最好在2h内将血浆分离出来。标本若当前不能做，将血浆分离后分装于塑料管内，保存于2～8℃冰箱，不超过4h；保存-20℃，不超过2周；保存-80℃，不超过30d。样本不能室温中逐渐融化，因遇冷纤维蛋白会沉淀析出，必须37℃下迅速解冻，应避免反复冻融[3]。
表2试管对测定结果的影响（n=20,x±s）
2试剂的应用
2.1试剂的配置严格按试剂说明书进行配制，最好用灭菌蒸流水溶解干粉试剂，轻摇溶解，复溶后的试剂应放5～10min后才可使用，测定时要根据需要，取适量的试剂于37℃预温3min，但不能超过30min，3周之内用完，不用时要保存在4℃冰箱。但禁忌反复冻溶。操作中，发现纤维蛋白原试剂预温后，通过冰箱保存，下次再使用该试剂测定时，会使纤维蛋白原测定的结果偏低，存放的时间越长，结果越低。
2.2建立参考范围采用不同试剂需调整不同正常参考值范围，方法为测试20个正常的标本，计算除X和S，正负2s为正常的参考值范围。在用INR报告PT时，因为不同试剂ISI值不同，换试剂时要修改参数。
3与操作有关的因素
经研究表明，技术熟练者与技术生疏者对同份标本，同样试剂、方法和仪器检测PT、APTT、Fib、TT[4]，两者结果存在一定的差异，见表3，故对操作者应该加强上岗前的培训，熟练后方能上机操作。使用前要仔细阅读仪器的使用说明书[5]。血液凝固主要为酶催化反应，实验中，要严格的控制理想pH、溶液的离子强度和环境。设置足够预温时间，防止血浆样本测定时不能达到37℃，预温试剂同样也要达预温标准。在加样的过程中除了要保证样品和试剂量的准确外，还要保持加样器和反应杯的垂直，加样时动作注意稳、快、准。
因为凝血因子检测受到多种因素的干扰，故凝血四项检测要加强全面质量控制与方法标准化。同时对仪器的保养维护仍要加强，从而才能保证稳定、可靠的实验结果。
参考文献
[1]杨保君,李维红,翟灶欣.静脉采血对凝血四项结果的影响[J].白求恩军医学院学报,2007,5(1):62-63.
[2]俞善丁.临床基础检验学[M].北京:人民卫生出版社,2000:20.
[3]杨齐鸣,吴立生.标本放置不同时间、温度和离心速度对凝血四项测定的影响[J].血栓与止血学,2003,9(2):93.
[4]朱忠勇.凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间测定标准化[J].中华医学检验杂志,1998,21(5):308-312.
[5]BE康派X血凝仪操作手册.