一种新型抗菌肽Hydramacin-1在毕赤酵母中的重组表达、纯化及其抗菌活性

一种新型抗菌肽Hydramacin-1在毕赤酵母中的重组表达、纯化及其抗菌活性

论文摘要

Hydramacin-1是来源于大乳头水螅(Hydra)的上皮防御组织的具有广谱抗菌特性的新型抗菌肽.本研究构建了外泌型重组酵母表达载体pPICZαA-Hydramacin-1,再将线性化的重组表达载体pPICZαA-Hydramacin-1电转入毕赤酵母宿主菌(Pichiapastoris)GS115中,成功构建了重组毕赤酵母表达菌株.在培养温度为28℃、甲醇体积分数为1.5%、诱导表达时长为120 h时,蛋白表达量达到最高,重组抗菌肽Hydramacin-1的表达量可达83 mg/L.经阳离子交换柱纯化,每升发酵液可得到约9 mg纯度为90%的重组抗菌肽Hydramacin-1.经最小抑菌浓度的测定,制备的重组抗菌肽具有广谱抗菌特性,相比于革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌对此抗菌肽更为敏感.本实验将Hydramacin-1抗菌肽首次成功地在毕赤酵母中高效表达,为以后该抗菌肽的理论研究和应用奠定了基础.

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株和质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 Hydramacin-1重组表达载体的构建
  •     1.2.2 重组抗菌肽Hydramacin-1的诱导表达与鉴定
  •     1.2.3 表达条件的优化
  •     1.2.4 重组抗菌肽Hydramacin-1的纯化
  •     1.2.5 重组抗菌肽Hydramacin-1的抑菌活力测定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 Hydramacin-1重组表达载体的构建
  •   2.2 高表达量转化子的获得
  •   2.3 发酵时间和甲醇体积分数对蛋白表达的影响
  •     2.3.1 诱导表达条件对总蛋白表达量的影响
  •     2.3.2 诱导表达条件对目的蛋白表达量的影响
  •   2.4 重组抗菌肽Hydramacin-1的纯化
  •   2.5 重组抗菌肽Hydramacin-1的抑菌活力测定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 孟德梅,石林玥,李文娟,孙雪晴,郭雅君,贾雪霞,樊振川

    关键词: 抗菌肽,毕赤酵母,抗菌活性

    来源: 天津科技大学学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 省部共建食品营养与安全国家重点实验室食品营养与安全教育部重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院大健康生物技术国际科技合作基地天津市大健康生物技术国际联合研究中心

    基金: 天津市自然科学基金资助项目(17JCQNJC14400,18JCZDJC34100),天津市企业科技特派员资助项目(18JCTPJC54000)

    分类号: Q78

    DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20180101

    页码: 22-29

    总页数: 8

    文件大小: 1159K

    下载量: 550

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