论文摘要
【背景】大肠杆菌（Escherichia coli） O157:H7是导致肠出血性大肠杆菌食源性疾病暴发的主要血清型,免疫磁珠（Immunomagnetic beads,IMBS）在E. coli O157的检测中发挥着重要作用,而免疫磁珠的稳定性、特异性、广谱性等性能指标关系着在实际应用中的使用效果。【目的】制备高效、稳定且具有广谱性的免疫磁珠,联合分子检测技术如环介导恒温扩增（Loop-mediatedisothermal amplification,LAMP）技术、PCR等,提高目标菌的检出率。【方法】采用新型的磁珠活化剂MIX&GO制备E. coli O157免疫磁珠,并进行广谱性以及特异性检测;针对6种试剂牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）、酪蛋白（Casein）、海藻糖（Trehalose）、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl pyrrolidone,PVP）、抗坏血酸（VitaminC）和防腐剂ProClin300,利用正交试验L18（37）优化免疫磁珠保存液组分;采用IMBS-LAMP、IMBS-PCR、IMBS-生化、菌液-LAMP、菌液-PCR、显色平板-生化鉴定6种方式对20份生猪肉样品进行检测。【结果】利用MIX&GO活化剂制备的免疫磁珠捕获率最高达到81.5%±1.3%;免疫磁珠保存液最优配方为:牛血清白蛋白15.0 g/L,酪蛋白10.0 g/L,海藻糖10.0 g/L,PVP 2.0 g/L,抗坏血酸5.0 g/L,Pro Clin 300 2.5 g/L,保存6个月后免疫磁珠捕获率为75.5%;在20份生猪肉样品的检测中,自制磁珠和商品化磁珠与LAMP联用均检出9例阳性样品;IMBS-LAMP在6种检测方式中具有最高的检测灵敏度,但检出的样品会因磁珠抗体的差异而有所不同。【结论】与商品化磁珠相比,实验制备的免疫磁珠具有良好的特异性和广谱性,免疫磁珠-LAMP联用提高了目标菌的检出率,是一种高灵敏度、具有应用前景的检测方法。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 曲晓莹,吴清平,熊争,蔡芷荷,卢勉飞,万强,周杨
关键词: 大肠杆菌,免疫磁珠,环介导恒温扩增,快速检测
来源: 微生物学通报 2019年10期
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 华南理工大学,广东粤微食用菌技术有限公司,广东环凯微生物科技有限公司,广东省微生物研究所,广东环凯生物科技有限公司
基金: 广州市产学研协同创新重大专项(201604016068),广东省自然科学基金(2017A030310090)~~
分类号: Q93-31
DOI: 10.13344/j.microbiol.china.190076
页码: 2801-2810
总页数: 10
文件大小: 448K
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