鹅源产NDM-5大肠杆菌的检测与分子特征研究

论文摘要

[目的]本研究2018年从扬州市某鹅场的种鹅场和育雏场共采集样品117份,包括鹅肛拭子、鹅场地表粪便、鹅场饲料、鹅场水样以及周边土壤样品,从中分离耐碳青霉烯的大肠杆菌并进一步对其菌株特征以及耐药分子特征进行研究。[方法]将采集的样品经过前增菌处理后,用含2mg/L美罗培南的麦康凯平板分离耐碳青霉烯的肠杆菌。随后,采用16s rDNA以及测序进一步鉴定菌属,并同时用PCR检测blaNDM基因,采用微量肉汤稀释法测定菌株对9种抗菌药物的最小抑菌浓度,通过接合试验和S1-PFGE分析携带blaNDM基因质粒的可转移性以及质粒分子大小。最后,采用Illumina测序技术对所有blaNDM阳性大肠杆菌进行全基因测序,并根据二代测序结果挑取不同克隆群的菌株进一步进行Oxford Nanopore MinION三代测序,从而对菌株的遗传特征进行深入探究。[结果]117份样品中,成功分离得到12株blaNDM-5阳性大肠杆菌,其中种鹅场分离得到11株,育雏场分离获得1株。MIC结果显示,12株菌对美罗培南、链霉素、氨曲南、阿莫西林、头孢喹肟、氟苯尼考以及多西环素表现为耐药,但大多数菌对恩诺沙星以及多黏菌素仍表现为敏感。通过接合转移试验成功得到12株菌对应的接合子,S1-PFGE结果表明12株菌中～46kb大小的质粒可以成功从供体菌转移到受体菌内。最后,全基因测序结果揭示了在种鹅场分离到的11株blaNDM-5阳性大肠杆菌中有10株属于ST48型,SNP分析发现它们具有高度的亲缘性,说明种鹅场存在blaNDM-5阳性大肠杆菌的克隆传播,同时在该场中还分离到一株属于ST8809的新ST型blaNDM-5阳性大肠杆菌。此外,育雏场中分离的blaNDM-5阳性大肠杆菌属于ST3076型,表明育雏场与种鹅场并不存在blaNDM-5阳性大肠杆菌的克隆传播。进一步分析发现这些菌中blaNDM-5的基因环境为典型的ISAba125-IS5-blaNDM-5-bleMBL-trpF-dsbC-IS26结构,而且均定位在IncX3型可接合质粒上,这与国际上流行的blaNDM-5的基因环境一致。[结论]本研究首次从鹅源分离到blaNDM-5阳性大肠杆菌。研究发现blaNDM-5定位在可接合转移的IncX3型质粒上,表明该种类型的质粒具有在鹅场内引起blaNDM-5水平传播的潜力,同时还发现在种鹅场内存在以ST48型blaNDM-5阳性大肠杆菌为优势株的克隆传播现象,提示应该加强对水禽系统的耐药性监测从而遏制多重耐药菌的传播。

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文章来源

类型: 国内会议

作者: 刘子奕,李瑞超,王志强

关键词: 鹅源,大肠杆菌,测序

来源: 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会 2019-10-13

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

分类号: S852.61

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.034605

页码: 192-193

总页数: 2

文件大小: 160k

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