论文摘要
禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属,可引起鸡的病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸道疾病、肠道疾病、免疫抑制等。导致肉鸡饲料转化率低、增重下降、生长不齐,蛋鸡除跛行外还会引起产蛋量下降、孵化率下降等,增加了养殖成本。自1985年我国首次报道禽呼肠孤病毒感染以来,此后多个省市地区均出现了该病的报道,感染情况日益加重,严重危害养禽业的发展。深化该病的研究对于我国养鸡产业的健康和稳定发展具有积极的意义。本研究从疑似ARV感染的免疫肉鸡体内分离得到一株ARV,对该毒株进行了序列分析及理化性质的研究。同时建立了一种快速可消除携带污染的UDG-RT-LAMP检测方法,并对该方法的反应条件进行了优化,为ARV感染的防控及快速检测提供了理论依据和新思路。本研究分别利用SPF鸡胚和鸡胚肝细胞(CEL)对山东潍坊地区疑似ARV感染的免疫肉鸡关节病料进行了病毒病原的分离,将分离株命名为WF株,对分离毒株进行了序列的测定与分析、毒力的测定、动物回归试验、理化性质的测定等试验。鸡胚和CEL细胞接种病料处理液后出现的特征性病变均与报道相符。分别提取RNA,RT-PCR反应扩增产物的条带大小与预期相符。σC基因的遗传进化分析表明,该分离株属于第四分支,与参考株核苷酸同源性为50.3%74.7%,氨基酸同源性为22.7%54.3%,其中与常用疫苗株1733、2408、S1133的同源性均较低。分离株的ELD50为10-5.25/0.2mL,TCID50为10-5.29/0.1mL,对60℃、70℃敏感,对50℃、氯仿不敏感,在pH 3.09.0范围内保持稳定。动物回归试验表明,1日龄健康SPF雏鸡感染该毒株后,临床表现及剖检变化与自然发病病例一致。根据ARV M1基因设计了一套特异性LAMP扩增引物,初步建立了ARV检测的UDG-LAMP体系,并进行了反应条件的优化。优化结果为dNTP浓度为1.2 mM,MgSO4浓度为8 mM,Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶浓度为320 U/mL,65℃扩增60 min。该方法特异性好,仅能对ARV进行扩增;灵敏度高,最低检测限为3×102拷贝/μL,是PCR方法的100倍;防携带污染作用明显。在临床样品检测中,UDG-RT-LAMP法的阳性检出率比RT-PCR法高16.7%,表明建立的UDG-RT-LAMP检测法在临床检测应用中更具有优势。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 李璐瑶
导师: 刁有祥
关键词: 禽呼肠孤病毒,分离鉴定,理化性质,条件优化
来源: 山东农业大学
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 山东农业大学
分类号: S852.65
总页数: 58
文件大小: 2456K
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