导读:本文包含了时间分辨荧光免疫分析方法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:产志贺毒素大肠杆菌,志贺毒素I型,时间分辨荧光技术
时间分辨荧光免疫分析方法论文文献综述
温恬,黄超,曾晓燕,史凤娟,郭喜玲[1]（2019）在《I型志贺毒素时间分辨荧光免疫分析方法的建立》一文中研究指出目的构建基于时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)的高灵敏性、高特异性的I型志贺毒素(StxI)双抗体夹心免疫检测法,用于产志贺毒素大肠杆菌(STEC)感染的临床快速诊断。方法采用两株针对StxI不同表位的单克隆抗体2F6-F8和8E7-E6,构建双抗体夹心TRFIA,并评价该方法的灵敏度、特异性以及稳定性;以PCR检测stxI基因结果为金标准,以TRFIA、ELISA、Duopath~?Verotoxins免疫胶体金检测试剂盒,检测54例StxI毒素粗提物,比较灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和与PCR法的一致性。结果建立的以StxI为靶向分子的TRFIA,可以在2h内完成对StxI检测,检测最大稀释倍数为1:1 000的StxI阳性菌株毒素粗提物样本,灵敏度比ELISA提高了约2个数量级。Stx I的TRFIA与StxII型无交叉反应,检测结果在1个月内仍保持较高稳定性。与PCR方法相比,TRFIA灵敏度(93.8%)高于ELISA(82.4%)和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(57.1%),差异有统计学意义(P<0.05);其特异性(100.0%)、阳性预测值(100.0%)、阴性预测值(97.4%)均大于等于ELISA(分别为97.2%、93.3%、92.1%)和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(分别为100.0%、100.0%、87.0%);TRFIA检测结果与PCR一致性(Kappa=0.955)高于ELISA(Kappa=0.809)法和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(Kappa=0.664)。结论成功构建StxI-TRFIA快速检测方法检测样品中StxI毒素,为TRFIA在毒素检测方面的推广应用提供了依据。(本文来源于《江苏预防医学》期刊2019年04期）
陈华鑫[2]（2019）在《均相时间分辨荧光免疫分析检测降钙素原方法的建立》一文中研究指出本研究成功合成出两种稀土荧光螯合剂并对通过核磁氢谱与质谱对结构进行确认,对它们的荧光性质的研究结果显示两种稀土荧光螯合剂均保持有叁价铕离子的特征激发峰与发射峰,其中Eu~(3+)?bpy.bpy.py(CO_2H)_2的最大激发波长为312nm,最大发射波长为598nm和615nm,Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2的最大激发波长为311nm,最大发射波长为597nm和616nm。两种稀土螯合剂的荧光强度均与浓度呈线性相关,线性方程分别为Eu~(3+)?bpy.bpy.py(CO_2H)_2:y=310x-565.98,R~2=0.999;Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2:y=310x-1930,R~2=0.999。荧光寿命分别为1064μs与398μs;量子产率分别为10.1%与12.1%。两种稀土螯合剂的荧光性质满足时间分辨荧光免疫分析的需求。以Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2为基础进行修饰,合成并通过质谱确认得到Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NHCOCH_2OCH_2COOH_2]_2。最大激发波长为312nm,最大发射波长为598nm和615nm,荧光强度与浓度线性方程为y=310x-1041.4,R~2=0.999。利用DCC/NHS作为脱水剂,在DMAP的催化作用下使螯合剂与抗降钙素原检测抗体(anti-PCT detection antibody)相结合。优化标记条件后通过发现Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NHCOCH_2OCH_2COOH_2]_2与抗体最佳标记条件为:螯合剂与DCC/NHS的摩尔比为1:4:6,室温反应6h,与抗体蛋白以20:1的摩尔比反应10h,可以得到标记比为10的稀土荧光螯合剂标记抗体。ELISA检测结果确认标记后抗体蛋白效价为1:800。利用标记的抗降钙素原检测抗体(anti-PCT detection antibody)与抗降钙素原包被抗体(anti-PCT coating antibody)构建检测降钙素原的时间分辨免疫荧光分析方法,实验结果表明,anti-PCT coating antibody的最佳稀释比例为1:200,anti-PCT detection antibody的最佳稀释比例为1:400,最佳孵育时间为60min,在0.5~50ng/mL浓度范围内,检测荧光信号强度与抗原浓度呈线性相关,线性方程为y=2552.6x+4.8222,R~2=0.9928,灵敏度为0.5ng/mL,CV<10%,重复性良好,与常见临床标志物AFP,CEA,CRP无交叉反应。(本文来源于《长春理工大学》期刊2019-06-01）
王旭,孙雨,王睿男,肖颖,蒋菲[3]（2019）在《牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立》一文中研究指出为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。(本文来源于《中国草食动物科学》期刊2019年03期）
孙雨,宋晓晖,肖颖,毕一鸣,王睿男[4]（2019）在《口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立》一文中研究指出为建立快速定量检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,本研究通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。该方法能够检测羊血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的羊类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率为98%,阴性样品符合率为92%,总符合率为95%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法同传统的ELISA方法相比,特异性相当、敏感性更高,操作简单、快速,具有较高的应用推广价值。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年07期）
黄睿,贾海英,王昌敏[5]（2018）在《全自动时间分辨荧光免疫分析系统EASYCUTA分析方法性能验证》一文中研究指出目的建立时间分辨荧光免疫的方法学性能验证方案和实验方法。方法参考CNAS-CL02:《医学实验室质量和能力认可准则》(ISO 15189:2012)对医学实验室检测系统性能评价的相关要求,结合实际工作需求,设计实验验证方案,并对全自动时间分辨荧光检测仪EASYCUTA测定乙肝五项,TP-Ab,HCV-Ab,HIV-Ab的精密度、正确度、线性分析测量范围、可检测极限、参考区间、分析灵敏度,抗干扰能力,交叉污染,方法学对比等进行验证和评价,并将检测结果与厂商(苏州新波公司)提供的性能指标进行比较。结果 EASYCUTA全自动时间分辨荧光检测系统检测HBV-M,TP,HCV,HIV项目的精密度、正确度、分析测量范围、可报告范围、参考区间、分析灵敏度、抗干扰能力、交叉污染,等均符合国际公认质量要求。方法学比对中,乙肝五项与Rochee601的阴阳性符合率>95%、K值评级为"优"。术前四项(HBsAg、TP、HCV、HIV)与Abbott i2000的阴阳性符合率>95%、K值评级为"优"。方法学对比合格。结论 EASYCUTA全自动时间分辨荧光检测仪测定乙肝五项,TP-Ab,HCV-Ab,HIV-Ab的主要分析性能验证结果与厂商说明书提供的分析性能一致,能够满足临床要求。本研究对规范医学实验室建设以及提供仪器检测质量具有重要的意义。(本文来源于《标记免疫分析与临床》期刊2018年11期）
李梅,刘洁,叶燕,俞蕾,王婷婷[6]（2018）在《时间分辨荧光免疫分析法和酶联免疫吸附实验法测定乙型肝炎病毒大蛋白的方法学比较》一文中研究指出目的对时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测乙型肝炎患者血清中病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,HBV-LP)进行方法学比较。方法收集30例正常体检血清标本作为阴性对照和150例慢性乙型肝炎患者血清标本,利用ELISA法检测HBV-LP,将其中70例阳性标本作为阳性样本,70例阴性标本作为阴性样本,再分别采用TRFIA法检测HBV-LP,对二者的灵敏度、特异度、一致性、检测线性范围、精密度、相关性及两种试剂盒的稳定性进行比较。其中TRFIA与ELISA结果不一致的12例标本采用PCR法进行验证。结果TRFIA检测HBV-LP的最小测定值为0.1 ng/ml,ELISA检测HBV-LP的最小测定值为2.5 ng/ml,二者的特异度均为100%。TRFIA和ELISA检测HBV-LP的Kappa值为0.83。12例ELISA和TRFIA检测不一致的标本,经PCR验证后有10例HBV DNA>103拷贝数。TRFIA试剂检测的线性范围在0.625~10 252 ng/ml之间,ELISA试剂盒检测的线性范围在5~1 281.6 ng/ml。TRFIA法检测高、中、低3个浓度水平的批内CV平均为6.10%,ELISA法的批内CV平均为8.98%。TRFIA批间CV平均为6.91%,ELISA的批间CV平均为10.45%。TRFIA试剂盒的结合下降率为6.61%,ELISA试剂盒的结合下降率为23.59%。结论 TRFIA与ELISA具有高度的一致性,但是两者相比,前者有更高的灵敏度和精密度,且TRFIA试剂盒的稳定性更好。(本文来源于《中国临床新医学》期刊2018年02期）
[7]（2017）在《一种均相时间分辨荧光免疫分析中间体、螯合剂及制备方法》一文中研究指出申请公布号:CN107266472A申请公布日:2017.10.20申请人:叶水盛摘要本发明提供了一种均相时间分辨荧光免疫分析中间体、螯合剂及制备方法,属于荧光免疫分析、有机合成技术领域。该结构利用含氮杂冠醚具有良好的水溶性,且能与联吡啶经过取代反应形成穴状化合物,所述的穴状结构的化合物既能吸收激发光并传递能量给Eu~(3+),又能对Eu~(3+)有较强的螯合作用;既可增加螯合剂的稳定性和抗干扰性,又可提高螯合剂的水溶性;本发明还提供了一种时间分辨荧光免疫(本文来源于《化学分析计量》期刊2017年06期）
吴灿军,律清宇,郝淮杰,赵成娜,郑玉玲[8]（2017）在《基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法》一文中研究指出目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法。用该法检测PCT重组抗原,通过Sigma Plot分析该法的最低检测限。结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml。结论铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度。(本文来源于《军事医学》期刊2017年08期）
李贞[9]（2017）在《莱克多巴胺钐标记时间分辨荧光免疫分析方法的建立》一文中研究指出基于抗莱克多巴胺(SAL)的单克隆抗体,初步建立了检测SAL的高灵敏度时间分辨直接竞争免疫分析法(CD-TRFIA)。采用辛酸-硫酸铵纯化抗SAL杂交瘤细胞株腹水单克隆抗体,用稀土离子Sm~(3+)偶联物进行标记,制备钐标抗体;通过合成SAL-SUC半抗原并与卵清蛋白偶联获得SAL-OVA包被抗原;采用直接竞争的方式,游离SAL和固相SAL-OVA包被原共同竞争有限的钐标SAL单抗,初步建立SAL时间分辨免疫分析方法。研究发现,优化的TRFIA半抑制量IC_(50)为1.6 ng/m L,检测范围为0.39~12.77 ng/m L,最低检测限为0.136 ng/m L。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2017年03期）
刘媛,林曼曼,张霄,徐重新,仲建锋[10]（2016）在《基于基因工程抗体的磺胺二甲嘧啶时间分辨荧光免疫分析方法的建立》一文中研究指出采用从合成抗体库中筛选得到的磺胺二甲嘧啶Fab抗体,建立了磺胺二甲嘧啶一步竞争时间分辨荧光免疫分析方法。实验用羊抗鼠IgG预包被酶标板,加入镧系元素Eu标记的磺胺二甲嘧啶与磺胺二甲嘧啶标准品共同竞争结合Fab抗体,建立了用于磺胺二甲嘧啶检测的时间分辨荧光免疫分析方法。该方法检测灵敏度(I10)为0.4μM,抑制终浓度(I50)为13.5μM,线性检测范围在10.6~173.7μM之间。方法用于多种基质样本中的磺胺二甲嘧啶的快速筛查检测。(本文来源于《分析仪器》期刊2016年S1期）
时间分辨荧光免疫分析方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究成功合成出两种稀土荧光螯合剂并对通过核磁氢谱与质谱对结构进行确认,对它们的荧光性质的研究结果显示两种稀土荧光螯合剂均保持有叁价铕离子的特征激发峰与发射峰,其中Eu~(3+)?bpy.bpy.py(CO_2H)_2的最大激发波长为312nm,最大发射波长为598nm和615nm,Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2的最大激发波长为311nm,最大发射波长为597nm和616nm。两种稀土螯合剂的荧光强度均与浓度呈线性相关,线性方程分别为Eu~(3+)?bpy.bpy.py(CO_2H)_2:y=310x-565.98,R~2=0.999;Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2:y=310x-1930,R~2=0.999。荧光寿命分别为1064μs与398μs;量子产率分别为10.1%与12.1%。两种稀土螯合剂的荧光性质满足时间分辨荧光免疫分析的需求。以Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2为基础进行修饰,合成并通过质谱确认得到Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NHCOCH_2OCH_2COOH_2]_2。最大激发波长为312nm,最大发射波长为598nm和615nm,荧光强度与浓度线性方程为y=310x-1041.4,R~2=0.999。利用DCC/NHS作为脱水剂,在DMAP的催化作用下使螯合剂与抗降钙素原检测抗体(anti-PCT detection antibody)相结合。优化标记条件后通过发现Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NHCOCH_2OCH_2COOH_2]_2与抗体最佳标记条件为:螯合剂与DCC/NHS的摩尔比为1:4:6,室温反应6h,与抗体蛋白以20:1的摩尔比反应10h,可以得到标记比为10的稀土荧光螯合剂标记抗体。ELISA检测结果确认标记后抗体蛋白效价为1:800。利用标记的抗降钙素原检测抗体(anti-PCT detection antibody)与抗降钙素原包被抗体(anti-PCT coating antibody)构建检测降钙素原的时间分辨免疫荧光分析方法,实验结果表明,anti-PCT coating antibody的最佳稀释比例为1:200,anti-PCT detection antibody的最佳稀释比例为1:400,最佳孵育时间为60min,在0.5~50ng/mL浓度范围内,检测荧光信号强度与抗原浓度呈线性相关,线性方程为y=2552.6x+4.8222,R~2=0.9928,灵敏度为0.5ng/mL,CV<10%,重复性良好,与常见临床标志物AFP,CEA,CRP无交叉反应。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
时间分辨荧光免疫分析方法论文参考文献
[1].温恬,黄超,曾晓燕,史凤娟,郭喜玲.I型志贺毒素时间分辨荧光免疫分析方法的建立[J].江苏预防医学.2019
[2].陈华鑫.均相时间分辨荧光免疫分析检测降钙素原方法的建立[D].长春理工大学.2019
[3].王旭,孙雨,王睿男,肖颖,蒋菲.牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立[J].中国草食动物科学.2019
[4].孙雨,宋晓晖,肖颖,毕一鸣,王睿男.口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立[J].中国兽医科学.2019
[5].黄睿,贾海英,王昌敏.全自动时间分辨荧光免疫分析系统EASYCUTA分析方法性能验证[J].标记免疫分析与临床.2018
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[7]..一种均相时间分辨荧光免疫分析中间体、螯合剂及制备方法[J].化学分析计量.2017
[8].吴灿军,律清宇,郝淮杰,赵成娜,郑玉玲.基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法[J].军事医学.2017
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[10].刘媛,林曼曼,张霄,徐重新,仲建锋.基于基因工程抗体的磺胺二甲嘧啶时间分辨荧光免疫分析方法的建立[J].分析仪器.2016