人类巨细胞病毒感染树鼩原代真皮成纤维细胞诱导凋亡特性

人类巨细胞病毒感染树鼩原代真皮成纤维细胞诱导凋亡特性

论文摘要

人类巨细胞病毒(HCMV)流行广泛,危害严重,由于其严格的物种特异性限制,动物模型缺乏,严重阻碍了对其致病机制的研究及药物、疫苗的研发。本研究对树鼩(Tupaia belangeri)来源的原代真皮成纤维细胞感染HCMV后的细胞死亡现象进行了初步探索。首先,观察了感染后细胞病变和死亡情况,使用细胞增殖检测试剂盒测定了细胞活力;其次,对凋亡相关因子bax、bcl-2和未折叠蛋白反应相关因子chop、atf4、xbp1s转录水平的差异进行了逆转录荧光定量PCR检测与分析;然后利用免疫蛋白印迹技术检测并分析了主要病毒蛋白IE1、UL44和凋亡相关因子Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP的表达水平;最后结合膜联蛋白-V和碘化丙啶双染色法从生物化学角度对细胞死亡类型进行了鉴定。结果显示,细胞病变和死亡情况随着感染进程逐渐严重,细胞活力下降明显(P <0.001)。感染上调bax、bcl-2、chop、atf4、xbp1s转录水平并且使bax与bcl-2转录水平呈明显拮抗趋势;感染同时上调Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达和逐级剪切激活;病毒蛋白IE1、UL44可以上调至一个完整的病毒复制周期结束。综上,本研究指出HCMV跨物种感染树鼩原代真皮成纤维细胞可诱导细胞凋亡,并且与内质网和线粒体密切相关。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 树鼩原代真皮成纤维细胞的分离培养
  •   1.2 细胞感染及活力测定
  •   1.3 凋亡相关因子转录水平差异分析
  •   1.4 免疫蛋白印记检测蛋白表达
  •   1.5 膜联蛋白-V和碘化丙啶双染法鉴定细胞凋亡
  •   1.6 数据统计分析
  • 2 结果
  •   2.1 树鼩原代真皮成纤维细胞感染HCMV后病变观察及活力测定
  •   2.2 树鼩原代真皮成纤维细胞凋亡相关因子转录水平差异分析
  •   2.3 树鼩原代真皮成纤维细胞感染后凋亡相关典型因子及病毒蛋白的免疫印迹检测
  •   2.4 膜联蛋白-V和碘化丙啶 (AV-PI) 双染法鉴定树鼩原代真皮成纤维细胞凋亡
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 焦玲帅,陈一波,杨铭,董书维,代解杰,夏雪山

    关键词: 人类巨细胞病毒,树鼩原代真皮成纤维细胞,细胞凋亡

    来源: 动物学杂志 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 昆明理工大学生命科学与技术学院,中国医学科学院昆明医学生物学研究所树鼩种质资源中心

    基金: 国家自然科学基金项目(No.U1702282)

    分类号: R373

    DOI: 10.13859/j.cjz.201903010

    页码: 404-413

    总页数: 10

    文件大小: 1550K

    下载量: 130

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