赵宗豪[1]2003年在《NF-κB在大鼠肝纤维化中的作用及褪黑素影响的研究》文中研究说明目的 初步探讨核转录因子-κB(NF-κB)／一氧化氮(NO)通路在大鼠肝纤维化形成过程中所起的作用，同时对褪黑素(MT)保护四氯化碳(CCl_4)诱导大鼠肝损伤的时效关系及其保护机制进行初步研究。 方法 将99只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对照组和MT给药组。用CCl_4制造大鼠慢性肝损伤模型，同时予MT(5mg·kg~(-1))、NAC(100mg·kg~(-1))腹腔注射。在造模的第1、2、3月末处死大鼠，分别测定大鼠体重、肝脏湿重和血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和白蛋白水平及白球比值的变化；分别采用高效液相色谱法和Griess法检测大鼠血清和肝脏匀浆中NO的含量，并作肝脏炎症和纤维化指数评分，同时用免疫组化法观察肝脏NF-κB亚单位P65、P50及iNOS、α-SMA的表达。 结果 模型组大鼠血清ALT、AST水平和肝脏病理学评分显着高于正常对照大鼠，NF-κB P65、NF-κB P50、α-SMA表达明显强于正常组(P＜0.01)。在第1月末，肝脏枯否氏细胞(KC)中强烈表达NF-κB，第3月末则在肝星状细胞(HSC)中强烈表达。相关分析表明，大鼠肝脏α-SMA在第3月末的表达与NF-κB P50、P65呈显着正相关(r=0.884，p=0.08；r=0.73，p=0.062)。用NAC抑制肝脏NF-κB激活，大鼠肝功能、肝脏病理损伤显着改善，肝脏α-SMA表达也随之降低。 MT明显抑制了肝脏NF-κB P65、NF-κB P50的表达，降低转氨酶水平，提高白蛋白含量和白球比值，肝脏α-SMA的表达也显着下降。同时，肝脏病理损伤征象得到改善，在第1月末以改善肝脏炎症为主，在第2、3月末以改善肝脏纤维化为主。 同期实验结果亦表明，模型组大鼠肝脏表达iNOS显着强于正常对照组，血清和肝脏匀浆中NO含量也明显增高，且在各时间点上iNOS的表达与肝脏匀浆中NO安徽医科大学硕士学位论文含量均呈显着正相关(r=0.875，P=0.023;r=0.865，P=0.026:二0.752，P=0.08)。MT和NAC在抑制NF一妞激活的同时，可使肝脏iNOS表达减少，显着降低了肝脏匀浆中NO含量，但血清中NO含量无显着下降。结论(1)在肝纤维化形成过程的早期炎症阶段，NF一出主要调节KC释放炎症介质，具有重要的促炎作用;在纤维化阶段，则NF一沼主要调控HSC的活性，具有促纤维化作用。(2)在CC14诱导的大鼠慢性肝损伤早期，MT可以抑制枯否氏细胞的NF一沼激活，减少炎性细胞因子的表达，发挥抗炎作用，在慢性肝损伤中晚期，MT抑制HSC中NF一妞激活，抑制了其表型转变，起着减轻或延迟肝纤维化的作用。 (3)由iNOS催化产生NO的过程受NF一沼调控，主要参与肝脏炎症反应;MT抑制NF一已激活，减少了肝脏iNOS的表达，N0生成受抑制，改善了肝脏炎症反应。
李瑞[2]2017年在《药物性肝损伤的临床特点、预后评估及内质网应激在利福平合用异烟肼致大鼠肝损伤中的作用》文中提出目的:(1)总结药物性肝损伤(DILI)的临床特点,探讨评估DILI预后的因素。(2)探讨内质网应激(ERS)在利福平(RFP)合用异烟肼(INH)致大鼠肝损伤中的作用及可能机制。方法:(1)回顾性分析近5年我院DILI的临床资料,运用Logistic回归分析筛选影响预后的指标。(2)将32只SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成4组,每组8只。正常对照组(N组):予以等量的生理盐水每日定时空腹灌胃一次;RFP组(R组):给予RFP 50mg·kg-1·d-1定时空腹灌胃一次;模型组(M组):INH和RFP各50mg·kg-1·d-1定时空腹灌胃一次;PBA组:INH和RFP同M组,再给予4-苯基丁酸(PBA)160mg·kg-1·d-1腹腔注射一次;R组和M组给予等量溶剂腹腔注射。连续14d后处死大鼠。留取大鼠血液和肝脏组织标本。全自动生化分析仪检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆汁酸(TBA)水平。HE染色观察大鼠肝脏病理学改变。免疫印迹法检测大鼠肝脏葡萄糖调节蛋白(GRP78)、P65、IκB及胆盐输出泵(Bsep)蛋白的表达变化。免疫组化法检测Bsep蛋白在大鼠肝细胞中的表达及定位变化。结果:DILI患者女性较多(57.5%),平均年龄52岁,用药以中药、抗菌类及解热镇痛类为主。肝细胞型DILl多见(81.1%),严重程度分级中以中度居多(54.7%),91.5%患者预后良好。不同严重程度肝细胞型DILI间Hy's法则符合率不同(P<0.05),符合此法则的肝细胞型DILI患者肝衰竭的发生率为22.9%(11/48)。多因素回归分析显示:影响DILI预后的指标有ALT(OR=1.672,P=0.026)、国际标准化比值(INR)(OR=8.852,P=0.015)。(2)与N组相比,R组、M组大鼠血清TBIL、DBIL、TBA及ALP均升高(P<0.05),ALT及AST升高不明显(P>0.05);R组大鼠肝脏病理学检查可见肝细胞脂肪变性,M组可见肝细胞脂肪变性程度加重、部分可见炎细胞浸润和点灶状坏死;R组、M组大鼠肝脏中GRP78和P65蛋白的表达量明显上升(P<0.05),IκB及Bsep蛋白的表达明显下降(P<0.05)。R组、M组肝胞膜上Bsep的平均积分光密度(IOD)分别为3.56±1.18和2.35±1.18,较正常组(9.63±1.59)下降(P<0.05),M组肝胞膜上Bsep分布不规则。与M组相比,PBA组大鼠TBIL、DBIL、ALP及TBA均降低(P<0.05);肝脏病理学变化亦明显改善;GRP78、P65明显下调,IκB及Bsep明显上调(P<0.05);肝胞膜上Bsep的平均IOD值为4.66±1.75,较M组上升(P<0.05),肝胞膜上Bsep分布较M组规则。结论:(1)DILI患者大部分预后较好。发病时ALT及INR是预测DILI预后的独立指标。(2)RFP可导致胆汁淤积和肝细胞脂肪变性,上调GRP78、P65及下调Bsep、IκB蛋白的表达,减少肝细胞膜上的Bsep并改变其定位。(3)PBA可改善RFP合用INH所致的肝损伤,下调GRP78、P65及上调Bsep、IκB蛋白的表达,改善肝细胞膜上Bsep的表达和定位,提示ERS在RFP合用INH诱导的大鼠肝损伤中发挥重要作用,其可能机制是通过激活NF-κB,抑制Bsep表达和改变Bsep的定位。
参考文献：
[1]. NF-κB在大鼠肝纤维化中的作用及褪黑素影响的研究[D]. 赵宗豪. 安徽医科大学. 2003
[2]. 药物性肝损伤的临床特点、预后评估及内质网应激在利福平合用异烟肼致大鼠肝损伤中的作用[D]. 李瑞. 安徽医科大学. 2017
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