导读:本文包含了着床前胚胎论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胚胎,着床,小鼠,囊胚,细胞系,逆转录,纺锤。
着床前胚胎论文文献综述
王东辉[1]（2018）在《Protein Regulating Cytokinesis 1在小鼠卵子减数分裂成熟及着床前胚胎发育中的功能研究》一文中研究指出胞质分裂调控蛋白1(Protein Regulating Cytokinesis 1,PRC1)是微管结合蛋白家族中的重要成员之一,是细胞周期依赖性激酶的底物。在先前针对有丝分裂中的研究发现PRC1对纺锤体组装、细胞增殖、胞质分裂等过程具有重要的调控作用。但迄今为止,关于PRC1在哺乳动物卵子减数分裂成熟及着床前胚胎发育过程中的功能鲜有报道。在卵子成熟过程中染色体精确配对分离和胞质不对称分裂是胚胎正常发育的先决条件。纺锤体是卵子减数分裂过程中的动态结构,其正确的组装和迁移保证了染色体分离和胞质不对称分裂的正常进行。单倍体卵子受精后形成二倍体胚胎,经过连续多次的卵裂形成囊胚,然后在子宫着床发育。着床前胚胎正常的卵裂与发育是健康胎儿出生的前提。因此,在本论文中我们首次系统地探究了PRC1在小鼠卵子减数分裂成熟及着床前胚胎发育过程中的功能与作用机制。研究目的:研究PRC1在小鼠卵子减数分裂成熟和着床前胚胎中的功能及作用机制,为临床筛查异倍性卵子、预防出生缺陷提供依据。研究方法:(1)收集卵子成熟过程中的GV期、GVBD期、MI期、AI-TI期以及MII期卵子,利用蛋白质免疫印迹及免疫荧光染色激光共聚焦扫描技术分析PRC1的蛋白表达及亚细胞定位情况。收集受精后着床前胚胎发育过程中的AII-TII期、PN期、1-细胞分裂期、2-细胞期、4-细胞期、桑椹胚期以及囊胚期胚胎,利用免疫荧光染色激光共聚焦扫描技术对PRC1进行定位分析。(2)使用特异性干扰纺锤体微管组装的药物紫杉醇(Taxol)和诺考达唑(Nocodazole)处理MII期卵子,通过免疫荧光染色激光共聚焦扫描技术检测PRC1与纺锤体微管的定位变化情况。进一步分析PRC1与微管的空间位置关系。(3)对于PRC1在卵子中的功能研究,我们主要采用蛋白功能敲减技术。卵胞质显微注射特异性的Prc1 Morpholino(MO),敲减PRC1蛋白后统计卵子减数分裂成熟中的GVBD比率;第一极体(Polar body 1,PB1)的排放比率,并测量PB1的体积;利用免疫荧光染色激光共聚焦扫描技术检测纺锤体组装与染色体排列情况及纺锤体两极的稳定性;染色体铺片统计染色体异倍性概率;免疫荧光染色检测纺锤体区域动粒微管与动粒间的捕捉情况。(4)卵胞质显微注射Prc1 MO和GFP-Tubulin、mCherry-H2B荧光蛋白的mRNA,实时观察敲减PRC1后的纺锤体迁移过程,并测量迁移距离;免疫荧光染色检测纺锤体区域桥梁微管的组装情况;使用鬼笔环肽探针对微丝蛋白(FActin)进行标记,检测F-Actin的分布情况。(5)卵胞质显微注射体外转录的外源Prc1 mRNA,过表达PRC1后统计卵子减数分裂成熟中的GVBD比率;PB1的排放比率,并测量PB1的体积;显微注射GFP-Tubulin及mCherry-H2B荧光蛋白的mRNA,实时观察过表达PRC1后纺锤体组装与染色体聚集分离情况;染色体铺片统计染色体异倍性概率。(6)为研究PRC1在着床前胚胎中的功能,我们在受精卵启动第一次有丝分裂之前的PN期阶段进行胞质显微注射Prc1 MO,然后在24 h、48 h、72 h、96 h分别统计2-细胞胚胎、4-细胞胚胎、桑椹胚以及囊胚的发育率;通过免疫荧光染色激光共聚焦扫描技术统计72 h胚胎的细胞数目。(7)为进一步探究PRC1在胚胎基因组激活后对胚胎发育的影响,我们选择2-cell期胚胎采用“双卵裂球对照敲减技术”开展实验研究。通过胞质显微注射的方式分别向两个卵裂球注射连有红色荧光基团的Ctrl MO-Lissa和绿色荧光基团的Prc1 MO-Carboxy,通过荧光拍摄观察卵裂球分裂情况;采用免疫荧光染色激光共聚焦扫描技术检测两个卵裂的球纺锤体组装和染色体排列情况;通过显微注射GFP-Tubulin与mCherry-H2B荧光蛋白的mRNA检测不同卵裂球在PRC1敲减后的纺锤体组装与染色体聚集分离情况。研究结果:(1)蛋白质免疫印迹结果显示:在卵子减数分裂的GV和GVBD期,PRC1表达量较少;进入分裂期后,PRC1蛋白表达量显着上升。免疫荧光结果显示,PRC1在卵子与胚胎中的亚细胞定位具有相似性,主要分为叁种模式:当卵子或胚胎核膜保持完整时,PRC1主要分布在细胞核中;当核膜破裂后,PRC1集中分布在胞质中;当细胞进入分裂期,PRC1大量聚集在纺锤体中央区,与中央纺锤体共定位。(2)通过Taxol抑制微管的解聚,发现PRC1异常聚集;通过Nocodazole加速微管的解聚,发现PRC1定位消失。进一步证实PRC1与中央纺锤体微管存在共定位关系。(3)卵子中PRC1的敲减不影响GVBD进程,但显着影响PB1的排放比率(51.4±3.0%),说明PRC1不参与卵子减数分裂恢复的起始阶段,但参与调控减数分裂起始后的进程。PRC1的敲减导致PB1的体积增加,并导致纺锤体组装异常(纺锤体成球期阻滞24.4±1.6%;筒状纺锤体36.1±2.5%)。纺锤体两极稳定性降低,纺锤体两极异常率增至87.2±2.5%,染色体异倍性概率增加(78.7±4.4%)。动粒微管不能精准捕捉动粒,异常概率高达78.6±4.5%。(4)PRC1敲减后桥梁微管发生解聚,纺锤体迁移受阻,皮质区F-Actin的分布出现异常,最终导致卵子发生近似对称分裂。(5)通过过表达实验反向验证PRC1的功能。结果显示过表达PRC1后同样不影响卵子GVBD过程,但显着降低PB1的排放比率(42.4±3.0%)。纺锤体组装与染色体排列异常,染色体异倍性概率显着增加(67.6±4.2%)。(6)PN期敲减PRC1后不影响2-细胞率(90.6±1.7%),但显着降低4-细胞(52.0±8.8%),桑椹胚(31.5±4.7%)以及囊胚(13.7±3.2%)的发育率。PRC1的缺失会导致胚胎细胞分裂失败,胚胎细胞数量减少。(7)2-细胞胚胎双卵裂球对照注射结果显示,PRC1的敲减导致卵裂球的胞质分裂失败,纺锤体组装与染色体排列均出现异常。研究结论:(1)PRC1蛋白表达及其亚细胞定位与小鼠卵子减数分裂及着床前胚胎的发育进程高度相关。(2)卵子中PRC1通过参与纺锤体桥梁微管的组装来维持纺锤体的完整性及稳定性,促使动粒微管准确捕捉动粒,完成染色体的精准分离。(3)卵子中PRC1通过参与纺锤体桥梁微管的组装以及影响皮质区微丝蛋白的分布,进而调控纺锤体迁移过程,最终促使卵子发生胞质不对称分裂。(4)在着床前胚胎中,PRC1主要通过调控纺锤体与染色体复合体的动力学变化过程,调控胚胎胞质分裂过程。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2018-06-05）
刘犇[2]（2018）在《BDNF与TrkB蛋白在小鼠子宫和着床前胚胎中表达规律的研究》一文中研究指出为了研究BDNF与TrkB蛋白在小鼠发情周期和妊娠早期子宫、输卵管及着床前胚胎中的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF与TrkB蛋白在子宫和输卵管中的表达,采用免疫荧光技术检测着床前不同发育阶段胚胎中蛋白的表达,并利用图像分析软件对两种蛋白在着床前胚胎中的表达强度进行定量分析。结果表明:BDNF与TrkB蛋白在发情周期及妊娠3.5天和4天子宫腔上皮、子宫腺上皮和血管内皮细胞中表达,在发情周期子宫内膜固有层基质细胞中不表达,但在妊娠3.5天和4天子宫蜕膜细胞中表达,发情前期、发情期和发情后期BDNF蛋白的表达强度高于发情间期;BDNF与TrkB蛋白在妊娠2天输卵管黏膜上皮和血管内皮细胞中表达;两种蛋白在着床前胚胎各发育阶段都有表达,在囊胚期达到最高水平。说明BDNF和TrkB蛋白通过旁分泌或自分泌途径对子宫、输卵管尤其是着床前胚胎发育发挥调控作用。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年07期）
王涵,赵盼盼,张坤[3]（2018）在《哺乳动物着床前胚胎中细胞系的分化及调控机制》一文中研究指出哺乳动物着床前发育是指精卵结合后胚胎在子宫着床之前的发育。这一阶段的发育时间短(小鼠为4.5 d),但是发生了一系列形态学和发育生物学上的变化。形态上,小鼠在着床前胚胎经历了3个重要变化:8细胞阶段的致密化和极性化、内细胞团和滋养层的分化及原始内胚层和外胚层的分离;在发育生物学方面,受精后会发生染色质重编程、母源因子降解、胚胎基因组激活等事件。本文以小鼠着床前胚胎为例,重点介绍了影响胚胎形态变化的调控机制及参与早期胚胎细胞分化的信号通路。对这些调控机制的理解有助于开发相关技术,从而提高动物繁殖效率或哺乳动物辅助生殖效率。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2018年02期）
刘犇[4]（2018）在《脑源性神经营养因子调控热应激条件下小鼠着床前胚胎发育和凋亡》一文中研究指出目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对正常和热应激条件下小鼠着床前胚胎发育和凋亡的影响。方法 150只雌性昆明小鼠用于实验,2细胞期胚胎添加或不添加10μg/L BDNF进行体外培养,早期囊胚37℃条件下或41℃热处理2 h,观察胚胎发育情况,TUNEL法和Hoechst 33342分析囊胚细胞数量和凋亡情况,荧光技术分析Caspase-9的活力。结果在37℃条件下BDNF能够促进早期囊胚发育,增加囊胚细胞数量,降低凋亡率及Caspase-9的活力,热应激能够降低早期囊胚的发育能力,减少囊胚细胞数量而增加凋亡率,且中等和高Caspase-9活力囊胚的比例热处理后明显增加,当培养基中添加10μg/L BDNF时,能够明显缓解热应激对早期囊胚发育和质量的不利影响。结论 BDNF对37℃或41℃热应激条件下小鼠着床前胚胎发育、细胞数量、凋亡和Caspase-9活力起到一定的调控作用。(本文来源于《解剖学报》期刊2018年01期）
濮黎萍,陈富美,赵秀玲,王焕景,候振[5]（2017）在《牛卵母细胞及着床前胚胎发育的蛋白质组学研究进展》一文中研究指出蛋白质组学作为一种能够全景式展示特定生物学过程的蛋白质表达谱的高通量研究手段,正被应用到越来越多的研究领域。牛的卵子发生以及着床前胚胎的生长发育都离不开蛋白质的一系列变化,通过蛋白质组学的研究手段可对牛卵母细胞成熟以及胚胎发育分子机制进行研究。前人通过构建成熟前后的卵母细胞或不同时期的着床前胚胎等的蛋白质组表达谱,来获得与卵母细胞成熟相关的标志蛋白,并对这些标志物进行验证和分析,将有利于理解牛卵母细胞成熟、体外受精及着床前胚胎发育的分子机制,为提高牛卵母细胞的成熟率以及胚胎的发育率及提高牛繁殖率等奠定基础。主要从双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、色谱技术以及质谱技术等蛋白质组学研究手段为切入点,对蛋白质组学在牛卵母细胞和着床前胚胎发育过程中的研究进展进行综述,为进一步研究牛卵母细胞及附植前胚胎提供参考。(本文来源于《生物技术通报》期刊2017年11期）
吴婧怡[6]（2017）在《哺乳动物着床前胚胎发育的染色质动态调控研究》一文中研究指出在生命起始时期,精子和卵子的结合启动了一系列剧烈的染色质重编程事件。这种重编程能够帮助介导基因组转录的重新启动,塑造崭新的全能性胚胎,并为之后的胚胎发育和组织分化奠定基础。然而在这个过程中受精卵的染色质到底是如何动态变化的,染色质的重编程又是如何协助胚胎特异基因激活的一直是未解之谜。但由于早期胚胎材料的稀缺,目前的技术手段都难以施展该项研究。基因转录的关键调控元件通常坐落在染色质开放区域。在2013年已报道的少量细胞染色质开放区域定位技术(ATAC-seq)的基础上,我们利用CRISPR基因编辑系统,成功克服了早期胚胎中大量母源线粒体基因组DNA对该技术的干扰,呈现了小鼠胚胎早期发育中开放染色质和基因调控元件的精确动态调控图谱。从这一工作中,我们发现胚胎中来源于父母本的两套染色质在2细胞时期已经建立了相似的染色质开放区域。除了在基因启动子,这些区域还特异地集中在基因组的重复序列和基因转录的终止位置。这些发现暗示着在胚胎早期发育过程中存在着更为丰富的调控方式。另外,我们还通过开放染色质鉴定到了可能的基因调控元件和相关的转录因子,并通过基因敲低实验证实了其中两个转录因子对胚胎中最早细胞分化的关键转录程序起重要的调控作用。最后,我们检测了胚胎基因组激活前的染色质状态,发现该时期的染色质不同于基因组激活后的胚胎和体细胞,可能处于一种整体更加松散的状态。综上所述,本研究是首次在DNA水平上对早期胚胎发育的染色质调控进行的研究。这项工作不仅发现了哺乳动物早期发育过程中染色质动态变化的特征以及可能的调控元件和转录因子,还揭示了在这个过程中染色质和转录调控元件不同于体细胞的特殊作用模式。(本文来源于《清华大学》期刊2017-05-01）
丁彪[7]（2017）在《猪着床前胚胎发育过程中WDR5的作用及其机制》一文中研究指出猪早期胚胎体外发育效率低下、质量不佳,制约了猪胚胎工程技术在畜牧业和医学领域的应用。早期胚胎发育受一系列分子事件的调控,其中基因网络调控和表观遗传修饰调控是两个主要调控途径。WD重复蛋白5(WD repeat-containing protein 5,WDR5)是混合系白血病(mixed lineage leukemia,MLL)蛋白家族的核心组分,在人或小鼠细胞的转录调控、表观遗传修饰及干细胞的多能性维持与自我更新等事件中发挥重要的生物学功能。但是,关于WDR5对哺乳动物早期胚胎发育有无影响目前仍未见报道。因此,本研究通过探讨WDR5在猪着床前胚胎发育过程中的作用及其机制,以期为提高猪早期胚胎发育效率提供理论依据。首先,本研究利用TA克隆方法获得了猪WDR5编码区序列,该序列与NCBI提供的猪WDR5的预测序列相似度达99.9%;在WDR5氨基酸序列上,猪与人、小鼠的同源性最高达到99.1%,与牛同源性为98.8%,并且在WD40重复蛋白结构区域高度保守,氨基酸序列完全一致。其次,本研究利用RT-qPCR分析发现WDR5在猪主要组织中均有表达,且在睾丸组织中相对表达量最高;WDR5在猪胎儿成纤维细胞(PEF)、脂肪干细胞和诱导多能性干细胞中也均有表达,且相对表达量与细胞的分化程度呈负相关;WDR5在猪卵母细胞和着床前各期胚胎中呈现动态表达模式,在GV期卵母细胞中相对表达量最高,在8-细胞期胚胎中表达量相对最低;利用间接免疫荧光染色技术分析WDR5蛋白表达,发现WDR5在PEF中定位于细胞核和细胞质,在GV期和MII期卵母细胞中仅表达于细胞质中;WDR5在原核期到囊胚期之间的各时期胚胎的细胞核与细胞质中都有表达,囊胚阶段仅定位在细胞核上。再次,利用显微注射联合RNA干扰技术和添加蛋白抑制剂的方法,在猪孤雌激活或体外受精胚胎中敲低WDR5的表达或抑制WDR5的功能,导致囊胚发育率显着降低和囊胚总细胞数极显着减少。同时,进一步的研究结果显示,敲低WDR5会导致猪囊胚期胚胎的细胞凋亡指数显着升高,多能性相关基因表达紊乱;而且敲低WDR5引起猪着床前表观遗传修饰发生改变,导致4-细胞胚胎中H3K4me3水平显着升高,并且介导MOF引起H4K16ac水平显着降低;敲低WDR5引起猪囊胚期胚胎DNA双链断裂显着增加,并且导致DNA损伤应答的主要调控因子ATR显着上调和HR修复通路上BRCA1和MRE11A显着下调;敲低WDR5引起猪囊胚期胚胎中细胞周期负调控因子P21显着上升,并且干扰P21的表达能够部分挽救由于WDR5敲低引起的囊胚发育异常。综上所述,本研究首次揭示了WDR5对猪着床前胚胎体外发育的影响及机制,发现WDR5可以通过调控表观遗传修饰、多能性基因、细胞凋亡及维持基因组稳定性和细胞周期进程维持猪着床前胚胎的正常发育。研究结果不仅丰富了对猪早期胚胎发育分子调控机制的认识,也为进一步提高猪早期胚胎发育效率提供了理论参考。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2017-05-01）
谭秀文[8]（2016）在《CRH和皮质酮影响小鼠着床前胚胎发育的机制：体外模型研究》一文中研究指出心理应激时机体激活下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴,从不同水平对雌性生殖系统产生多层次的抑制作用。HPA轴的主要中枢调节因子是CRH和精氨酸加压素(AVP),两者协同作用于垂体前叶促进ACTH和其他阿黑皮素原(POMC)衍生肽(如β-内啡肽)分泌,随后ACTH作用于肾上腺皮质促进肾上腺合成并释放糖皮质激素(GCs)。CRH和其诱导产生的β-内啡肽抑制促性腺激素释放激素(GnRH)分泌,肾上腺皮质分泌的GCs则抑制促黄体激素(LH)和卵巢中雌二醇、孕酮的产生,使靶组织或器官对雌二醇产生抗性。因此,应激过程中产生的CRH和GCs对雌性生殖系统的不利影响是非常明显的。本实验室前期研究认为,小鼠合子形成初期束缚应激48 h,可使胚胎发育能力明显降低,进而导致妊娠率降低,然而有关其作用机理并不清楚。因此,本实验选取CRH和GCs,通过体外直接添加或与小鼠输卵管上皮细胞(OECs)共培养或制取条件化培养液(CM)培养小鼠原核胚,探索CRH和GCs对着床前胚胎发育的影响,并对其作用机制进行深入研究。结果表明:(1)培养液中直接添加CRH不会损伤着床前胚胎发育(P>0.05),但与OECs共培养时添加CRH能明显降低原核胚发育至囊胚的比例(P<0.05)。利用WB检测发现小鼠OECs表达CRHR蛋白,且CRH促进其表达(P<0.05);利用激光共聚焦显微镜观察发现早期胚胎(囊胚阶段除外)都不表达CRHR蛋白,这说明CRH通过与OECs中CRHR结合,对小鼠早期胚胎体外发育产生不利作用。对OECs氧化应激指标检测发现,CRH造成细胞内GSH还原能力下降(P<0.05),过氧化物TOS水平以及OSI值升高(P<0.05),清除过氧化物的还原酶如SOD酶水平降低(P<0.05)、但过氧化氢酶水平升高(P<0.05),分泌的促胚胎发育生长因子水平降低(P<0.05),说明CRH诱导OECs发生氧化应激。进一步检测发现,OECs表达Fas水平升高(P<0.05),培养液中Fas L水平升高(P<0.05),说明OECs启动死亡受体途径,进而检测到细胞表达Caspase-3水平升高(P<0.05),细胞发生晚期凋亡的比例明显升高(P<0.05)。(2)培养液中直接添加GCs不会损伤着床前胚胎发育(P>0.05),但与OECs共培养时添加GCs能显着降低原核胚发育至囊胚的比例(P<0.05)。利用WB检测发现小鼠OECs表达GR蛋白,且GCs下调其表达(P<0.05);利用激光共聚焦显微镜观察发现不同发育阶段早期胚胎都表达GR蛋白。接着我们利用荧光定量RT-PCR检测早期胚胎,没检测到11-HSD1 mRNA表达,但GCs上调11-HSD2 mRNA表达水平(P<0.05)。因此,GCs可能通过11-HSD2解除对早期胚胎发育的直接阻碍作用,但可能通过与OECs中GR结合对胚胎发育产生不利作用。对OECs氧化应激指标检测发现,GCs造成细胞内GSH还原能力下降(P<0.05),过氧化物TOS水平以及OSI值升高(P<0.05),清除过氧化物的还原酶如SOD酶水平降低(P<0.05)、过氧化氢酶等水平升高(P<0.05),分泌的促胚胎发育生长因子水平降低(P<0.05),说明GCs诱导OECs发生氧化应激。进一步检测发现,OECs表达Fas水平升高(P<0.05),培养液中FasL水平升高(P<0.05),说明OECs启动死亡受体途径,进而检测到细胞表达Caspase-3水平升高(P<0.05),细胞发生晚期凋亡的比例明显升高(P<0.05)。总之,CRH或GCs通过与OECs中各自的受体结合,导致OECs发生氧化应激,并诱导OECs的凋亡。OECs凋亡进而引起囊胚的GSH还原能力下降(P<0.05),Fas和Caspase-3水平升高(P<0.05),说明对着床前胚胎也造成了氧化应激并发生凋亡,导致原核胚发育至4-细胞和囊胚的比例明显下降以及囊胚细胞数降低。(本文来源于《山东农业大学》期刊2016-04-28）
白海栋[9]（2015）在《SMYD3在牛着床前胚胎发育及胎儿成纤维细胞生长中作用的研究》一文中研究指出哺乳动物体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer, SCNT)和诱导多能性干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells, iPSCs)都证明终末分化的成体细胞可以被重编程为胚胎样多能细胞。但目前SCNT和iPSCs都存在效率低的问题,尤其对于分化状态较高的起始细胞很难重编程为多能性细胞。近来研究表明,在细胞重编程过程中增加转录因子或者表观修饰相关基因的表达可以提高重编程效率。组蛋白甲基化转移酶(Histone Methyltransferase, HMT)包含一大类表观遗传修饰酶,在早期胚胎发育、干细胞多能性维持和分化、细胞重编程等过程具有广泛调控作用。其中SMYD3 (SET and MYND domain-containing protein 3)是组蛋白H3赖氨酸4二甲基化(H3K4me2)和叁甲基化(H3K4me3)转移酶；最早在癌细胞中发现,SMYD3能与RNA聚合酶Ⅱ形成转录复合物,激活下游一些癌基因和细胞周期相关基因的表达,在癌细胞增殖、迁移和侵袭中起作用。但目前关于SMYD3在哺乳动物早期胚胎发育及细胞重编程中作用的研究还鲜有报道。本研究首先检测了SMYD3在牛卵母细胞成熟和植入前胚胎发育过程中的表达,并通过RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术下调SMYD3的表达研究其在胚胎发育过程中的作用；其次通过在体细胞中过表达SMYD3,研究其对细胞增殖和重编程相关基因表达的影响和调控机制,并利用诱导干细胞技术研究细胞过表达SMYD3对重编程效率的影响。主要研究内容如下：1. SMYD3对牛卵母细胞成熟和胚胎发育的影响首先利用定量PCR方法检测了SMYD3在牛卵母细胞成熟和植入前胚胎发育过程中的表达。结果显示,SMYD3 mRNA在牛卵母细胞成熟到植入前胚胎发育的8细胞期的表达虽有上下波动,但变化不显着基本维持一个水平(p>0.05),到桑椹胚期表达显着升高,并达到峰值(p<0.01),之后到囊胚期表达又下降到之前水平。免疫荧光染色结果显示,在MII期SMYD3染色主要集中于染色体上,受精后SMYD3在胚胎胞质和核内都有表达,特别在桑椹胚和囊胚中,SMYD3在胞质中的染色明显强于核内。通过GV期显微注射SMYD3 siRNA的方法下调卵母细胞成熟过程中的SMYD3 mRNA水平,可以显着降低MII期卵母细胞中NANOG mRNA水平(p<0.01),最终导致受精后胚胎发育阻滞在8细胞时期；而在原核期注射SMYD3 siRNA对胚胎发育没有影响。本实验结果表明卵母细胞中存储的SMYD3可调节NANOG基因在卵母细胞中的表达,并对牛早期胚胎发育起重要作用。原核期注射SMYD3 siRNA对胚胎发育没有影响也间接证明SMYD3对胚胎发育的影响是在卵母细胞成熟过程中积累起来的。2. SMYD3对牛胎儿成纤维细胞生长的影响转录因子影响细胞重编程效率通常依赖于两种机制,即细胞周期依赖性机制和细胞周期非依赖性机制。前者主要通过影响细胞增殖实现,而后者主要是通过表观遗传修饰改变基因表达模式从而增强重编程。本研究将从这两方面研究SMYD3对牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast, bEF)重编程的影响。本研究首先设计了过表达SMYD3的质粒SMYD3和下调SMYD3的质粒pRFP-CB-shLenti-SMYD3,并通过脂质体转染或慢病毒感染的方法转入bEF中,研究SMYD3对bEF增殖及基因表达的调节作用。其次利用诱导干细胞技术研究了过表达SMYD3对成纤维细胞重编程效率的影响。结果显示,SMYD3在bEF中过表达后,能够促进bEF的增殖；基因表达检测显示,SMYD3的过表达会显着促进表观修饰相关基因DNMT1、DNMT3a和EZH2,及与全能性和谱系决定相关基因NANOG、c-MYC、GATA6、PAX6、NESTIN的表达,而对细胞周期调控相关基因CCNG1和CDK2的表达影响不显着,但显着提高MAP3K11的表达(p<0.001)；相反,下调SMYD3基因的表达后,以上所检测的基因表达均有显着的下降(p<0.001)。说明SMYD3对这些基因的表达有调控作用。由于SMYD3在胚胎发育过程和bEF中都对NANOG基因的表达有调节作用,为了确定SMYD3与NANOG相互作用关系,分别利用亚硫酸氢盐测序技术(Bisulphite PCR, Bis-PCR)和免疫共沉淀技术(ChIP-PCR)分析了NANOG基因启动子区DNA甲基化程度和与SMYD3的结合情况。DNA甲基化分析发现,SMYD3过表达后NANOG启动子区DNA甲基化增加,ChIP-PCR实验显示SMYD3没有在NANOG启动子区结合,说明SMYD3是通过间接作用的方式协同DNA甲基化和组蛋白修饰影响NANOG基因的表达。由于SMYD3的过表达能够促进bEF细胞的增殖,同时能够影响多能性相关基因、谱系决定基因和表观遗传修饰相关基因的表达,推测SMYD3可能会促进细胞重编程。为此,本研究利用慢病毒介导的方法用鼠源的Oct4、c-Myc、Sox2和Klf4四因子导入过表达SMYD3基因的bEF细胞中,研究SMYD3对细胞重编程效率的影响。结果显示与非转基因细胞相比,过表达SMYD3基因的bEF中有克隆形成,而对照组的非转基因细胞中却没有克隆形成；这些克隆经多能因子OCT4、NANOG和SOX2免疫荧光染色后均显示阳性,这些结果初步说明SMYD3可以促进细胞克隆形成,对细胞重编程有促进作用。以上研究表明,组蛋白甲基化转移酶SMYD3通过影响多能性相关基因和表观遗传修饰相关基因的表达,在牛卵母细胞成熟、植入前胚胎发育和牛胎儿成纤维细胞生长过程中起作用,同时影响细胞的重编程。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2015-10-18）
王加强[10]（2015）在《小鼠着床前胚胎特异ERV相关长非编码RNA的定向筛选及功能研究》一文中研究指出着床前胚胎发育是一个受到精密调控的发育过程。研究着床前胚胎发育机制对于生殖生物学及再生医学都有深远意义,因此着床前胚胎发育一直倍受瞩目。在着床前胚胎发育过程中会发生一系列特异事件,如合子基因激活(zygote genome activation,ZGA)。长非编码RNA(long non-coding RNAs,lnc RNAs)参与调控已经成为新的生物学研究领域。随着测序技术的进步,大量lnc RNA在早期胚胎中被发现,但是,目前还没有研究能够回答有没有一些lnc RNA会参与到着床前胚胎发育调控过程中,如果有,这些lnc RNA以怎样的机制参与调控。内源逆转录病毒(Endogenous retroviruses,ERVs)是进化上内化于高等有颚脊椎动物基因组的逆转录病毒序列元件。内源逆转录病毒序列广泛分布,占人类基因组的8%,占小鼠基因组的10%。内源逆转录病毒序列曾一度被认为是垃圾DNA,但越来越多的证据表明,内源逆转录病毒序列参与了多方面生物学调控。病毒序列编码的蛋白质可参与宿主细胞功能。有些内源逆转录病毒尚保持转座能力,对于生殖细胞内基因重组等进化相关事件起到关键作用。我们早就知道小鼠ERV在着床前胚胎中转录,但具体发挥什么功能尚不清楚。是否存在ERV相关的lnc RNA参与着床前胚胎发育调控值得研究。我们针对ERVs的精心设计了半随机引物,通过半随机扩增,从小鼠早期胚胎各时期筛选m ERV相关未知转录本,经过分子克隆技术(链特异性PCR及RACE等)获得至少一个转录本全长,分析其是否为lnc RNA。对明确是lnc RNA的未知转录本进行亚细胞定位分析、表达模式分析以及功能研究。具体结果如下:通过PCR及测序结果的UCSC比对分析,我们鉴定出了36个新转录本。大部分新转录本(28/36)是ERV相关的,与预期相符。其中23个是GLN相关的,5个是Mu ERVL相关的;通过链特异性逆转录PCR以及RACE技术,我们发现lnc-GET是GLN,MERVL及MERVK相关的、可剪切的、有多聚腺苷酸尾的、含两种剪切突变体的RNA;Dyei是由GLN的LTR转录的、长665 nt的、GLN相关的、含3个外显子的RNA。亚细胞定位分析表明lnc-GET和Dyei定位于核,且主要是染色质定位的,因此lnc-GET和Dyei是非编码的。二级结构预测及mi RNA反义Northern印记实验排除了lnc-GET和Dyei是mi RNA前体的可能性。Taq Man定量PCR实验及RNA-FISH实验表明,lnc-GET是2-至4-细胞胚胎特异表达的,Dyei是4-细胞胚胎特异表达的;干扰lnc-GET导致胚胎发育阻滞于2-细胞时期,而干扰Dyei不影响着床前胚胎发育。干扰lnc-GET的胚胎在培养液中能维持2-细胞状态至少4天而不凋亡。干扰lnc-GET阻滞的胚胎呈Brd U强阳性、CAF1阴性,表明阻滞于G2时期,呈H3第10位精氨酸磷酸化(H3S10ph)染色阳性,表明阻滞于G2晚期。γH2A.X免疫荧光染色呈阴性,表明阻滞不是由于DNA损伤导致的。阻滞胚胎内,G2/M转换相关关键细胞周期蛋白依赖的蛋白酶CDK1以及母源蛋白OCT4和CDX2没有显着变化;主要合子基因激活(major ZGA)起始不受影响。我们还发现臂间卫星序列的正义链及反义链转录本表达水平没有变化,DNA-FISH结果显示臂间环已经变成了染色中心;通过低起始量RNA-seq我们比较了注射对照锁核酸(LNA)的对照晚期2-细胞胚胎(2225枚)与干扰lnc-GET的阻滞2-细胞胚胎(2042枚)在major ZGA时期的基因表达情况。总体上讲,在干扰lnc-GET的阻滞2-细胞胚胎中有723个基因上调,521个基因下调(FDR≤0.0001,RPKM≥1,2倍以上),多达11060个基因发生了异常剪切,表明干扰lnc-GET造成了major ZGA严重异常。KEGG通路分析表明干扰lnc-GET主要影响了MAPK信号通路,表现在ERK1/2-MAPK及LNK/p38-MAPK通路的核心因子表达量显着下降。异常剪切基因的GO-BP分析结果表明发生异常剪切的基因主要聚类于细胞周期相关基因(主要是M周期相关的)。表明干扰lnc-GET造成的阻滞可能是影响了细胞周期相关基因的转录及可变剪切导致的;我们通过pulldown-质谱来检测lnc-GET结合的蛋白,鉴定出了hn RNP U、FUBP1、DAZAP1及ILF2。这4个蛋白定位于晚期2-细胞及早期4-细胞核内,说明是与lnc-GET共定位的。这4个蛋白都是剪切复合体组分,3个是转录因子,表明pulldown-质谱结果与RNA-seq结果相符:lnc-GET可能参与了转录及剪切调控;无论通过Wilcoxon rank sum检验结合Benjamin多重检验,还是Wilcoxon rank single检验(p<2.2×10-16)均发现DEGs倾向于富集在其相关的GLN,Mu ERVL及ERVK的LTR(GLK-LTRs)附近。因此lnc-GET可能是通过介导GLK-LTR的顺式调控元件的活性来实现转录调控的。(本文来源于《东北农业大学》期刊2015-06-01）
着床前胚胎论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了研究BDNF与TrkB蛋白在小鼠发情周期和妊娠早期子宫、输卵管及着床前胚胎中的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF与TrkB蛋白在子宫和输卵管中的表达,采用免疫荧光技术检测着床前不同发育阶段胚胎中蛋白的表达,并利用图像分析软件对两种蛋白在着床前胚胎中的表达强度进行定量分析。结果表明:BDNF与TrkB蛋白在发情周期及妊娠3.5天和4天子宫腔上皮、子宫腺上皮和血管内皮细胞中表达,在发情周期子宫内膜固有层基质细胞中不表达,但在妊娠3.5天和4天子宫蜕膜细胞中表达,发情前期、发情期和发情后期BDNF蛋白的表达强度高于发情间期;BDNF与TrkB蛋白在妊娠2天输卵管黏膜上皮和血管内皮细胞中表达;两种蛋白在着床前胚胎各发育阶段都有表达,在囊胚期达到最高水平。说明BDNF和TrkB蛋白通过旁分泌或自分泌途径对子宫、输卵管尤其是着床前胚胎发育发挥调控作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
着床前胚胎论文参考文献
[1].王东辉.ProteinRegulatingCytokinesis1在小鼠卵子减数分裂成熟及着床前胚胎发育中的功能研究[D].内蒙古大学.2018
[2].刘犇.BDNF与TrkB蛋白在小鼠子宫和着床前胚胎中表达规律的研究[J].黑龙江畜牧兽医.2018
[3].王涵,赵盼盼,张坤.哺乳动物着床前胚胎中细胞系的分化及调控机制[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2018
[4].刘犇.脑源性神经营养因子调控热应激条件下小鼠着床前胚胎发育和凋亡[J].解剖学报.2018
[5].濮黎萍,陈富美,赵秀玲,王焕景,候振.牛卵母细胞及着床前胚胎发育的蛋白质组学研究进展[J].生物技术通报.2017
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[8].谭秀文.CRH和皮质酮影响小鼠着床前胚胎发育的机制：体外模型研究[D].山东农业大学.2016
[9].白海栋.SMYD3在牛着床前胚胎发育及胎儿成纤维细胞生长中作用的研究[D].内蒙古大学.2015
[10].王加强.小鼠着床前胚胎特异ERV相关长非编码RNA的定向筛选及功能研究[D].东北农业大学.2015
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