口蹄疫O型重组病毒的构建及其生物学特性分析

论文摘要

传统灭活疫苗的免疫接种是预防和控制口蹄疫的重要手段,但口蹄疫病毒极易发生变异而常导致新突变株的产生,从而使现有疫苗不能有效防控当前流行的口蹄疫,经常需要筛选与当前流行毒株抗原匹配性好、免疫原性和复制特性优良的疫苗候选毒株。在比对分析Cathay和Pan-Asia谱系不同时间经典疫苗毒株和我国当前主要流行毒株（SEA-Mya98谱系）VP1结构蛋白的基础上,借助反向遗传操作技术,在已构建含当前流行毒株VP1基因全长感染性克隆的骨架上,引入2个氨基酸的替换（VP1 H28Q+S47Q）,构建重组全长质粒,并通过转染表达T7RNA聚合酶的BSR/T7细胞成功拯救到活的重组病毒。重组病毒具有和亲本病毒相似的噬斑表型和一步生长曲线,却降低热稳定性,增强了对乳鼠的致病力。研究结果为进一步开发与当前流行毒株抗原匹配性好、免疫原性和复制特性优良的FMD疫苗候选毒株奠定了基础。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞、质粒、病毒及抗体

1.1.2 主要试剂

1.2 方法

1.2.1 不同谱系FMD疫苗毒株VP1蛋白的序列分析

1.2.2 含突变氨基酸全长质粒的构建

1.2.3 重组病毒的拯救

1.2.4 重组病毒的鉴定

1.2.4.1 RT-PCR鉴定

1.2.4.2 间接免疫荧光检测抗原

1.2.4.3 电镜观察重组病毒粒子形态

1.2.5 重组病毒的生物学特性分析

1.2.5.1 病毒的增殖培养和遗传稳定性检测

1.2.5.2 噬斑表型和一步生长曲线

1.2.5.3 热失活试验

1.2.5.4 重组病毒乳鼠致病力的检测

2 结果

2.1 FMDV VP1氨基酸序列比对

2.2 含突变氨基酸全长质粒的构建

2.3 重组病毒的拯救

2.4 重组病毒的鉴定

2.4.1 RT-PCR鉴定

2.4.2 间接免疫荧光鉴定结果

2.4.3 电镜观察病毒粒子结果

2.5 重组病毒的生物学特性分析

2.5.1 拯救病毒的增殖培养和遗传稳定性分析

2.5.2 噬斑表型和一步生长曲线分析

2.5.3 热失活试验

2.5.4 重组病毒对乳鼠的致病力

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 龚婷,李平花,孙普,马雪青,白兴文,杨孝朴,卢曾军,曾巧英,刘在新

关键词: 型口蹄疫,突变,重组病毒,生物学特性

来源: 动物医学进展 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 甘肃农业大学,河南牧业经济学院,中国农业科学院兰州兽医研究所

基金: “十三五”国家重点研发计划项目(2017YFD0500902)

分类号: S852.659.5

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.11.004

页码: 18-23

总页数: 6

文件大小: 6703K

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口蹄疫O型重组病毒的构建及其生物学特性分析

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