导读:本文包含了粘附受体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:粘附类,G蛋白偶联受体,GPR64,功能
粘附受体论文文献综述
孙玉静[1]（2019）在《粘附类G蛋白偶联受体GPR64的功能与信号转导研究》一文中研究指出粘附类G蛋白偶联受体(Adhesion GPCRs)是仅在最近才被研究关注较多的一类GPCR结构。由于粘附类G蛋白偶联受体具有复杂的结构,其在生物体内的功能研究较少。此外,大多数粘附类G蛋白偶联受体仍是孤儿受体,没有明确已知的的配体,所以,粘附类G蛋白偶联受体的功能、信号转导研究和配体发现具有重要的意义。目前,据有关文献报道数据统计,全球范围内大约15%的夫妇受到不孕症的困扰,其中男性因素占50%以上,男性不育越来越成为大家关注的问题。粘附类GPR64(又称Adgrg2或HE6)主要在附睾组织表达,对男性生育起着重要的功能,这一重要功能引起了我们对这种受体的极大兴趣,因为它是男性生育能力提高或男性避孕的潜在目标。在小鼠的研究中GPR64可以导致睾丸积水,导致精子在输出小管中积聚,但是具体诱因却不清楚。最近,人类已知的内源性GPR64突变是人类阻塞性无精子症的原因之一,但是其信号转导途径并不清楚。此外,目前GPR64是孤儿受体,没有配体,目前已知的仅有Stachel序列衍生的激动肽,但是其活性并不是太好,不能为其功能研究提供有效的工具。因此,本文主要探究GPR64在生殖系统中的功能、信号转导、激动肽配体优化以及其与GPR64受体的结合模式。一、研究目的1:GPR64是否在生殖系统中发挥重要的功能。2:GPR64是通过那些下游目标蛋白调节输出小管水分重吸收功能。3:与人类疾病相关的已知GPR64内源性突变K990E对于下游G蛋白调控的影响。4:GPR64已知的Stachel序列衍生的激动肽配体优化以及该配体与GPR64受体结合模式研究。二、主要方法论文采用实时定量PCR(Real-time PCR)技术检测31个粘附类GPCRs(adhesion GPCRs)在附睾中的表达情况;应用实时定量PCR(Real-time PCR)技术检测输出小管与GPR64-promoter腺病毒标记输出小管单细胞中与水分调节相关的重要离子通道及Gs、Gq蛋白的表达情况;选用普通PCR、cDNA测序技术在基因层面检测GPR64移码突变敲除鼠构建是否成功;采用western blot等实验方法验证GPR64在附睾和HEK-293细胞系中的表达情况;应用HE染色技术检测WT鼠与GPR64-/Y敲除鼠在附睾和输出小管中精子淤积情况;使用GPR64-promoter腺病毒标记输出小管单细胞用于后期实验;用各种离子通道的抑制剂,研究在输出小管中水分重新收中重要的离子通道;利用免疫荧光染色技术检测了 GPR64、CFTR、Gs、Gq在附睾或者输出小管中表达位置;采用氯离子MQAE探针检测了WT鼠与GPR64-/Y敲除鼠输出小管结扎后细胞内Cl-浓度;应用氢离子BCECF-AM探针检测了WT鼠与GPR64-/Y敲除鼠输出小管结扎后细胞内pH值;采用膜片钳方式记录GPR64-promoter腺病毒标记输出小管单细胞及其HEK-293细胞重组系统中全细胞电流;使用Quick change的方法构建了GPR64已知的人类内源性疾病突变质粒K990E及其他GPR64相关的突变质粒;采用GloSensor cAMP技术在HEK-293细胞中检测GPR64对于Gs信号通路激活情况;采用NFAT-Luciferase双荧光素酶检测系统检测在HEK-293细胞中GPR64对于Gq信号通路激活情况;利用膜受体ELISA方法检测GPR64不同突变体的表达情况;使用丙氨酸扫描技术检测GPR64激动肽关键的氨基酸位点;应用改良的Bret方法检测GPR64不同突变体对其Stachel序列衍生的优化激动肽[FITC]V13FMe结合情况。叁、主要结果1.在正常情况下和脂多糖(LPS)诱导附睾炎症情况下GPR64均表达较高通过Real-time PCR技术分析了31个adhesion GPCRs在附睾中的表达情况,发现大部分adhesion GPCRs在附睾中大量表达,其中,我们发现表达较高的3种adhesion GPCRs包括CD87、CELSR1和GPR64;同时在LPS造模诱导附睾炎症情况下,上述3种表达较高的adhesion GPCRs中只有GPR64大量表达。根据本文研究结果和已知的GPR64功能相关文献总结共同说明GPR64生殖系统中具有重要功能。2.GPR64移码突变敲除鼠的构建是成功的采用CRISPR-cas9技术在GPR64第1个外显子区域删去2bp后加入10bp核苷酸,导致移码突变。GPR64的翻译在信号肽区域停止,并且所有剪接变体均适合。通过普通的PCR及基因组DNA测序在基因层面共同验证了GPR64移码突变敲除鼠的构建是成功的,但基因水平有时并不代表蛋白水平的变化。我们后面检测了GPR64敲除鼠蛋白表达情况,GPR64在细胞膜表达,通过分离附睾头部膜蛋白检测在敲除鼠和WT鼠中的GPR64表达情况,最终验证GPR64敲除鼠的构建是成功的。3.GPR64敲除鼠生育能力降低并伴随输出小管精子淤积通过统计WT与GPR64-/Y敲除鼠胚胎数目,结果表明GPR64敲除后生育能力降低;通过统计WT与GPR64-/Y敲除鼠附睾尾部精子数目检测和附睾HE染色并进行精子面积统计发现GPR64-/Y敲除鼠在附睾中的精子数目减少;通过WT与GPR64-/Y敲除鼠输出小管的HE染色并统计精子面积发现GPR64-/Y敲除鼠精子在输出小管大量淤积。4.GPR64敲除后影响睾丸水分重吸收功能通过检测WT与GPR64-/Y敲除鼠正常情况下睾丸的重量发现GPR64-Y睾丸的重量明显比WT的重,预示GPR64可能在水分重新收中起到重要的功能,另外我们通过附睾头部结扎实验,发现附睾头部结扎后导致GPR64-Y睾丸水分增加明显,共同说明了GPR64在睾丸水分重吸收中起到重要的功能。5.GPR64敲除鼠并未影响附睾发育,但影响输出小管水分重吸收功能由于GPR64在附睾头部表达,我们猜测是否GPR64敲除鼠的附睾发育受到影响从而影响水分重吸收,结果表明GPR64敲除后并未影响附睾的发育。另外由于睾丸中80%水分经由输出小管重新吸收,我们分离输出小管,测定正常情况下输出小管宽度,结果其宽度并未发生变化,GPR64并未影响正常情况下输出小管宽度。我们参照文献,采用输出小管两端结扎的方式,观察不同结扎时间点输出小管宽度的变化。结果表明:随着结扎时间的延长GPR64敲除鼠输出小管鼓胀明显,表明GPR64在输出小管水分重吸收中起到重要的功能。6.GPR64敲除鼠输出小管水分重吸收功能障碍可能与CFTR离子通道调控相关我们选取了输出小管重要的离子调节通道例如CFTR(囊性纤维性变转移酶传导调节蛋白)、Anoctamin-1(ANO1)、钠-氢反向转运蛋白1(NHE1)、钠-氢反向转运蛋白3(NHE3)、碳酸酐酶ⅡI(CAⅡ)、腺瘤下调蛋白(DRA)、溶质载体家族26成员9(SLC26A9)、氯离子通道配件1(CLCA1)等,通过Real-time PCR筛选了输出小管及GPR64-promoter标记的细胞相对表达较高的离子通道CFTR、ANO1、NHE1、DRA、NKCC、SLC26a9、CAⅡ,对正常输出小管结扎后采用上述通道的抑制剂,观察输出小管在各个抑制剂作用下不同时间点的鼓胀情况,结果表明:采用CFTR抑制剂CFTRinh-172可以模拟GPR64敲除鼠的表型,说明GPR64敲除鼠输出小管水分重吸收功能障碍可能与CFTR离子通道调控相关。7.GPR64敲除后影响CFTR离子通道功能为了研究GPR64敲除鼠输出小管水分重吸收功能障碍是否与CFTR离子通道调控相关,首先我们采用免疫荧光技术证实GPR64与CFTR表达位置相同,均表达在输出小管非纤毛细胞,我们测定了 WT鼠与GPR64-/Y敲除鼠输出小管结扎48h后的氯离子浓度和pH值,发现GPR64-/Y敲除鼠氯离子浓度较高和pH值较高,氯离子和氢离子稳态失衡;通过全细胞电流实验进一步证实,GPR64-/Y敲除鼠影响CFTR调控的氯离子电流,但是GPR64敲除后并未影响CFTR的表达。总之,GPR64敲除会影响CFTR离子通道的功能,但是并未影响其表达。8.GPR64调控CFTR的功能与下游Gq蛋白相关,并且β-arrestin1在GPR64与CFTR复合物的形成中起着重要的作用本论文通过检测了下游G蛋白在输出小管中的表达情况,发现Gq与GPR64表达在相同的细胞,即非纤毛细胞;并进一步通过验证Gq+/-敲除鼠输出小管结扎48h后其细胞中氯离子和氢离子浓度,发现Gq蛋白在敲除后细胞氯离子浓度和pH值偏高,间接反应Gq蛋白影响CFTR功能(我们在elife文章中验证了Gq+/-敲除鼠的电流,并且在正常GPR64-promoter标记的原代细胞采用Gs和Gq的抑制剂均证实Gq蛋白在介导GPR64调控CFTR的功能中起着重要的作用(该部分工作我均有参与,前面合作者张道来毕业论文已用该部分数据,所以该部分数据未在毕业论文中体现);后期实验通过检测证β-arrestin1-/-和β-arrestin2-/-敲除鼠输出小管结扎48h后组织细胞中氯离子和氢离子浓度,发现β-arrestin1敲除鼠氯离子和pH值偏高,β-arrestin1蛋白影响CFTR的功能。(同时我们在elife文章中通过体内输出小管和体外293细胞系系统,采用CO-IP实验验证了GPR64与CFTR蛋白可以形成复合物,并且β-arrestin1在复合物形成中起着促进作用,免疫荧光的结果证实β-arrestin1敲除后,影响CFTR与GPR64的共定位(该部分工作我均有参与,前面合作者张毕业论文已用该部分数据,所以该部分数据未在毕业论文中体现)。9.HEK-293细胞系证实GPR64可以组成性激活Gs、Gq通路信号在HEK-293细胞中采用GloSensor cAMP检测技术检测到GPR64FL与GPR64beta可以组成性激活内源性cAMP水平,表明GPR64可以组成性激活Gs信号通路;在HEK-293细胞中采用NFAT-Luciferase双荧光素酶的报告系统检测到GPR64FL与GPR64beta可以激活NFAT的转录水平,表明GPR64可以组成性激活Gq信号通路。10.GPR64已知与人类生殖相关的疾病突变K990E可以降低Gs与Gq通路信号通过Quick change构建了GPR64与人类生殖疾病相关的GPR64FL-K990E、GPR64Beta-K990E突变质粒。采用GloSensor cAMP技术在HEK-293细胞中检测GPR64FL-K990E突变对于Gs信号通路影响,研究结果表明K990E突变可以降低GPR64的组成性激活内源性cAMP水平,降低Gs通路信号;在HEK-293细胞中采用NFAT-Luciferase双荧光素酶检测系统检测NFAT转录水平,表明GPR64FL-K990E可以降低GPR64的组成性激活NFAT转录水平,降低Gq通路信号。11.GPR64已知与人类生殖相关的疾病突变K990E导致GPR64调控CFTR通道电流降低在HEK-293细胞重组系统,采用全细胞膜片钳技术检测GPR64FL-K990E突变对CFTR电流的调控能力,结果表明GPR64FL-K990E突变对于CFTR电流的调节能力降低,CFTR电流下降。1 2.GPR64已知的Stachel序列衍生的多肽P15第1、3位对其活性较为关键通常用丙氨酸扫描技术将第一个到最后一个氨基酸依次突变为丙氨酸。通过实验发现,peptide p15的关键氨基酸为红色标记的TSFGILLDLSRTSLP,这些氨基酸的突变能够完全破坏peptide的激活GPR64的cAMP的作用。并且通过peptide p15两端氨基酸截短,发现两端的氨基酸对于p15的活力至关重要,并通过序列比对第1位,第3、5、6、7位是Adhesion GPCR中的较保守的氨基酸,采用不同氨基酸突变和非天然氨基酸修饰,结果表明第1位T变为输水氨基酸V和第3位F变为非天然氨基酸Phe(4Me)活性较好。13.GPR64已知的Stachel序列衍生的优化短肽V13FMe与p15相比对于GS、Gq、β-arrestin1、β-arrestin2信号转导增强GPR64已知的Stache1序列衍生的激动肽优化短肽V13FMe与p15相比对GPR64的激活效果更好,并使GPR64产生的Gs、Gq、、β-arrestin1和β-arrestin2信号通路激活更强,激活Gs信号通路半激活浓度约为471.5nmol/L,P15的半激活浓度约为81.4μmol/L,V13FMe半激活浓度是P15的172倍。同时与P15相比可以产生激活Gq、、β-arrestin1、β-arrestin2信号通路的现象,同时激活Gq的半激活浓度EC50约为214.5μmol/L,激活β-arrestin1信号通路的半激活浓度EC50约为20μmol/L,激活β-arrestin2信号通路的半激活浓度EC50约为30μmol/L。14.GPR64突变体W757A、1758A、V768A、F824A、F826A对GPR64已知的Stachel序列衍生的优化短肽V13FMe亲和力显着降低采用不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、2×10-6、5×10-6、10-5mol/L)的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的GPR64激活多肽V13FMe,采用改良Bret实验方法,研究其对GPR64不同突变体的结合能力,通过对其EC50结果分析表明其突变体W757A、I758A、V768A、F824A,F826A突变后,与其结合能力完全丧失,说明这五个氨基酸位点与GPR64结合[FITC]V13FMe短肽密切相关。15.GPR64不同突变体对于激活多肽V13FMe结合能力,影响下游cAMP水平采用GloSensor cAMP技术在HEK-293细胞中检测GPR64不同突变体对于下游Gs信号通路影响。结果表明:与WT(GPR64△-GPS-beta)相比,不同GPR64突变体对V13FMe结合能力下降,导致其下游cAMP激活水平降低,例如W757A、I758A、N759A、V762A、V768A、W824A、F826A。但是 V13FMe对于S760A、F772A、F828A、V836A、I844A、F845A结合能力没有发生明显变化,但是其cAMP水平降低,可能是结合下游Gs蛋白能力发生变化导致的。四、主要结论:1.GPR64在附睾组织和附睾炎症诱导下表达水平较高。2.GPR64移码突变敲除鼠构建是成功的。3.GPR64敲除后生育能力降低并伴随附睾精子数目降低而精子主要在输出小管淤积的现象。4.GPR64敲除后影响睾丸和输出小管水分重吸收功能。5.GPR64主要通过调控CFTR离子通道影响输出小管水分重吸收功能。6.GPR64主要通过调控Gq蛋白影响CFTR离子通道对输出小管水分重吸收功能。7.β-arrestin1蛋白在GPR64和CFTR复合物形成中起着重要作用。8.已知的GPR64与人类生殖相关的疾病突变K990E影响Gs与Gq信号通路。9.已知的GPR64与人类生殖相关的疾病突变K990E影响CFTR电流。10.GPR64已知的Stachel序列衍生的激动肽P15第1、3位对其提供其活性较为关键。11.GPR64已知的Stachel序列衍生的短肽V13FMe与p15相比对于GS、Gq、β-arrestin1、β-arrestin2信号转导增强。12.GPR64突变体W757A、1758A、V768A、F824A、F826A后对于GPR64激活多肽[FITC]V13FMe结合能力消失。13.GPR64不同突变体对于激活多肽V13FMe结合能力影响影响下游cAMP水平变化。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-24）
赵军,张静,丁浩,陈银雪,尹建凯[2]（2018）在《光动力联合电灼、干扰素治疗对尖锐湿疣患者粘附分子、Toll样受体及细胞因子表达的影响》一文中研究指出目的:探究光动力联合电灼、干扰素治疗对尖锐湿疣患者粘附分子、Toll样受体及细胞因子表达的影响。方法:选取2015年12月至2016年11月期间常熟市第一人民医院诊治的90例尖锐湿疣患者为研究对象,将其随机分为A组(电灼联合干扰素治疗组)30例、B组(电灼联合光动力治疗组)30例和C组(光动力联合电灼、干扰素治疗组)30例。比较叁组的临床效果、治疗前后的粘附分子、Toll样受体及细胞因子表达情况。结果:C组的临床总有效率高于A组和B组(P<0.05),治疗后粘附分子、Toll样受体和细胞因子表达水平均低于A组与B组(P<0.05);而A组与B组间的检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:光动力联合电灼、干扰素治疗对尖锐湿疣患者粘附分子、Toll样受体和细胞因子表达的影响更好,在尖锐湿疣患者中的应用价值较高。(本文来源于《中国性科学》期刊2018年07期）
John,R.Couchman[3]（2017）在《Syndecan受体:细胞粘附表型的门卫（英文）》一文中研究指出Over 30 years ago,evidence accumulated that cell surface proteoglycans,some with hydrophobic properties,were involved in cell adhesion to extracellular matrix.Eventually,four members of the syndecan family of transmembrane proteoglycans were characterized,but their modes of action remained elusive.We have utilized a combination of imaging,immunochemistry,molecular and structural biology to address this question.Ligands for the syndecans can bind either their heparan sulphate polysaccharide chains,or the external portion of the core(本文来源于《中国生理学会基质生物学专业委员会第二次全国基质生物学学术会议会议手册》期刊2017-06-07）
尹伟[4]（2017）在《猪红细胞免疫粘附及其受体》一文中研究指出兽医学研究表明哺乳动物的红细胞具有免疫粘附功能。然而,目前仅对灵长类动物的红细胞CR1的研究较为清楚,关于其他非灵长类动物红细胞的免疫粘附受体的蛋白质特性、红细胞膜上的分布状态、编码基因结构及其染色体定位、免疫功能机制等方面的研究缺乏数据。课题组前期研究分离鉴定了猪红细胞免疫粘附分子CR1-like,但是猪红细胞免疫相关分子机制还有一系列基础性问题需要进一步探讨。例如:影响CR1-like免疫活性的生理性因素有哪些?分布于红细胞表面的锚合特点如何?CR1-like序列在物种水平是否具有同源保守性?猪红细胞CR1-like是否具有分子多态性?鉴于上述背景及依据,本研究以猪红细胞CR1-like为研究靶点,制备猪CR1-like多克隆抗体,深入分析猪红细胞CR1-like连接膜骨架蛋白的脚手架区域类别,解析CR1-like与猪红细胞膜相互作用的分子基础;从ATP与猪红细胞CR1-like相关性为研究靶向,利用流式细胞检测技术、荧光免疫细胞化学技术、免疫阻断技术等探讨ATP调节CR1-like免疫粘附功能的作用;为进一步阐明CR1-like介导猪红细胞发挥免疫功能的分子机制提供理论数据;应用基因文库构建技术、SNP筛查技术等研究方法初步建立猪红细胞CR1-like免疫粘附功能的遗传学基础,以期为进一步开发猪红细胞CR1-like基因多态性应用于临床生产奠定理论基础,提供科学数据。研究结果如下:1、应用家兔血清免疫法获得具有免疫学活性的猪CR1-like膜结合肽段的抗血清,为猪红细胞CR1-like分布研究提供了研究工具;利用真核表达技术获得了能够稳定遗传表达猪红细胞CR1-like活性片段重组CCP片段的重组毕赤酵母菌株,表达出重组蛋白CCP,表达量0.945mg/mL;体外活性研究发现重组蛋白CCP具有补体结合活性及类免疫粘附功能。2、免疫荧光细胞化学染色结果可以看出CR1-like与猪红细胞膜骨架中的FAP-1分子两者的特异性荧光位点分布相同;对253个典型的阳性红细胞进行位点距离的差平方求和,结果为0.2224,表明每组CR1-like、FAP-1的位点距离之差近似为0,即CR1-like、FAP-1分布符合共位关系的特征;通过免疫共沉淀技术检测,被检测的凝胶中清楚地观测到FAP-1分子。3、CR1-like与稀释度为1:1600的CR1-McAb作用时ATP消耗也因此明显低于其它稀释度组。CR1-like在与抗体结合时消耗了猪红细胞内的ATP,而且根据不同稀释度因素下的ATP浓度水平的差异也可以初步推断出CR1-like免疫活性越强,ATP消耗越多,两者之间存在显着相关性。当ATP介入浓度由10-14mol/mL、10-13mol/mL、10-12 mol/mL、10-10mol/mL、10-8 mol/mL依次升高时,CR1-like膜表达水平在各组中无统计差异;当 ATP 介入浓度由 10-14mol/mL、10-13 mol/mL、10-12mol/mL、10-10 mol/mL、10-8mol/mL依次升高时,CR1-like免疫粘附荧光颗粒数量也随之增高,粘附细菌的效率也随之增强,当ATP介入浓度为10-10mol/mL时,CR1-like粘附颗粒数量达最高,此后继续提高ATP介入浓度至10-8mol/mL时,CR1-like粘附颗粒数量不再变化。4、在上述研究结果的基础上,本实验进一步构建CR1-like基因文库并对其候选SNP进行了筛查。本研究构建了 41例长白猪CR1-like基因文库,文库序列覆盖率均在95%以上,98%的文库序列reads覆盖率达97%以上;通过与参考基因组比较,实验在CR1-like基因组水平共筛出159个SNP位点。此外,根据本实验结果参考基因中74513501、74515069两位置的碱基类型应为A、T。综上所述,本文得出以下结论:1、猪红细胞CR1-like并不是直接与红细胞膜骨架蛋白进行结合,而是通过FAP-1蛋白分子铆合结构分布于猪红细胞膜表面。2、CR1-like在与抗体结合时消耗了猪红细胞内的ATP,两者之间存在显着相关性;猪红细胞表面CR1-like的表达水平是天然恒定的,不因ATP浓度变化而改变;在一定浓度范围内ATP相对CR1-like免疫粘附活性具有剂量调节活性,当粘附体系中ATP剂量越大,CR1-like免疫活性越强。3、构建了 41例长白猪CR1-like基因文库,筛查获得159个候选SNP位点(本文来源于《山西农业大学》期刊2017-06-01）
侯婕[5]（2016）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒受体唾液酸粘附素V-set结构域的真核细胞表达及结构预测》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的高度接触性传染性疾病,其主要特征是妊娠母猪的繁殖障碍和各年龄阶段猪的呼吸系统疾病,给养猪业带来了巨大的经济损失。PRRSV的入侵机制一直是研究热点,包括许多对其宿主和受体的研究。猪是PRRSV唯一的天然宿主。分化的单核细胞、尤其是肺泡巨噬细胞,是其主要的宿主细胞。大量研究已证实,PRRSV是通过宿主细胞表面的受体分子介导入侵的。目前国内外已鉴定多种与PRRSV入侵相关受体,如唾液酸粘附素(Sialoadhesin,Sn)、CD163(Cluster of differentiation163)和硫酸乙酰肝素(Heparin sulphate,HS)等,它们共同协助完成PRRSV的入侵和复制增殖过程。其中,唾液酸粘附素(Sn),也被称作CD169或Siglec-1(sialic acid binding immunoglobulin-type lectin-1),是在巨噬细胞表面特异表达的凝集素并在PRRSV感染靶细胞的吸附和内吞过程中发挥着重要作用。进一步研究发现,Sn的V-set Ig-like结构域在PRRSV入侵过程中起主要作用,但目前其结构生物学机制尚不清楚。为了探究PRRSV受体Sn的结构信息及其在病毒入侵过程中所发挥的作用,本试验首先采用毕氏酵母表达系统,成功克隆及表达了猪源Sn V-set Ig-like结构域重组蛋白。但因其表达量过低,不利于其结构生物学研究,因此继续采用昆虫表达系统(果蝇胚胎Drosophila Schneider-2,S2细胞)克隆表达了猪源Sn V-set Ig-like结构域重组蛋白,并对其进行了western blotting检测、质谱检测及镍柱纯化等试验,结晶并预测了其空间结构。最终得到的重组蛋白序列与Sn V-set Ig-like结构域目的蛋白序列100%匹配,具有生物学活性,纯度高达99%。这些结果为研究Sn V-set Ig-like结构域结构,揭示其参与病毒相互作用的重要作用位点和关键氨基酸,促进理解其在PRRSV入侵过程中的作用,并为深入探究PRRSV入侵机制奠定了分子基础,同时为PRRSV疫苗及临床药物的研发提供了结构生物学理论依据。(本文来源于《河南农业大学》期刊2016-06-01）
郭芮伶[6]（2015）在《粘附受体GPR56与肿瘤》一文中研究指出细胞在持续不断地与周围的环境进行接触,这些主要通过细胞粘连完成的联系对细胞的分化成长至关重要,如果出错可能会导致机体的疾病状态,比如癌症[1-2]。事实上,在癌症的发展过程中,细胞粘连的变化可以在肿瘤发生及转移的每一步被观察到[3]。细胞粘连包括细胞间(cell-cell)粘连和细胞-基质(cell-extracellular matrix,cell-ECM)粘连,前者涉及到细胞间直接接触,而后者指的是细胞与细胞外基质之间(本文来源于《中华肺部疾病杂志(电子版)》期刊2015年04期）
崔姣艳[7]（2015）在《猪红细胞免疫粘附受体的鉴定与检测》一文中研究指出目的：为深入研究动物红细胞免疫粘附功能的分子基础,本试验以猪红细胞为研究对象设计实验,对猪红细胞免疫粘附受体进行鉴定分析,以期为课题组后期试验提供理论数据。方法：运用荧光细胞化学法检测猪CR1-like分子；运用猪细胞免疫粘附新鲜血清或EDTA血清致敏的GFP-E.coli和乳胶颗粒复合物,及抗猪CR1-like单抗阻断免疫粘附的方法验证猪红细胞免疫粘附分子CR1-Like的存在；采用免疫共沉淀的方法纯化猪CR1-like抗原,利用还原和非还原SDS-PAGE电泳及WB实验,得出猪红细胞CR1-Like的分子大小及二硫键数量。结果：荧光细胞化学法检测猪CR1-like分子实验可观察到猪红细胞与抗猪CR1-like McAb及Goat anti-mouse IgG-FITC发生免疫反应；在荧光显微镜下观察到,猪红细胞可以粘附新鲜血清致敏的GFP-E.coli;猪红细胞不粘附EDTA血清致敏和未致敏的GFP-E.coli;抗猪CR1-like单抗预孵育猪红细胞不粘附致敏的GFP-E. coli;同型抗体预孵育猪红细胞粘附致敏的GFP-E.coli。猪红细胞免疫粘附致敏乳胶颗粒及单抗阻断免疫粘附结果同GFP-E.coli实验结果一致。免疫共沉淀洗脱目的蛋白SDS-PAGE电泳及WB实验结果表明,猪红细胞CR1-like以135KD和200KD两种形式存在,CR1-like分子内部含有2或3个二硫键,二硫键断裂后裂解为70KD、50KD、15KD叁种支链蛋白,其中以50KD和15KD的支链蛋白发挥免疫反应。结论：猪红细胞表面存在起免疫粘附作用的CR1-like分子；猪红细胞表面CR1-like以135KD和200KD两种形式存在,在还原条件下,CR1-like裂解为70KD、50KD、15KD叁种小分子蛋白,CRl-like分子内部含有2或3个二硫键,在免疫反应中主要以50KD和15KD两个支链蛋白发挥作用。(本文来源于《山西农业大学》期刊2015-06-01）
李志量[8]（2015）在《胆碱能受体途径在HaCaT细胞粘附及天疱疮发病中的作用及机制研究》一文中研究指出天疱疮是一种以血清中存在抗表皮蛋白抗体为特征的自身免疫性皮肤病,桥粒芯蛋白抗体在本病的发生中具有重要作用。近年的研究发现,除了桥粒芯蛋白途径之外,还有其它因素在该病发生中发挥一定作用,其中胆碱能受体与天疱疮关系较为密切。本研究将以胆碱能受体为研究对象,利用HaCaT细胞构建天疱疮细胞模型,研究胆碱能受体途径在细胞粘附和天疱疮发病中的作用,从而进一步完善天疱疮的发病机制理论。第1部分胆碱能途径药物对HaCaT细胞粘附功能的影响及机制研究目的研究胆碱能途径药物对HaCaT细胞粘附功能的影响及其机制。方法培养HaCaT细胞至融合状态后,分别加入适当浓度的胆碱能途径药物,通过细胞解离实验检测细胞粘附的变化情况,结果以细胞碎片数表示：分别用RIPA和Triton X-100裂解细胞,得到总蛋白和胞浆蛋白,用Western Blot测定细胞表面与粘附相关的蛋白Dsg1、Dsg3、PG、E-钙粘素的变化；用qPCR检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化。结果对照组、阿托品、筒箭毒碱、卡巴胆碱作用后细胞碎片数目分别为6.33±1.15、35.00±2.65、6.33±1.53、6.00±1.00；阿托品在蛋白质和mRNA水平减少Dsg3表达,并使Dsg3从胞膜脱离,卡巴胆碱可增加Dsg1、Dsg3、PG表达,并促使Dsg1、PG粘附于胞膜。筒箭毒碱对各种细胞表面蛋白均无明显影响。结论胆碱能途径药物可以调节细胞间粘附分子,尤其是桥粒分子的表达,并影响这些分子在细胞膜上的稳定性,从而介导细胞间粘附。第2部分利用HaCaT细胞构建天疱疮细胞模型目的利用HaCaT细胞与PV-IgG共培养构建天疱疮细胞模型。方法收集典型寻常型天疱疮患者,从血清中纯化IgG,以1mg/ml的浓度与HaCaT细胞共培养,通过细胞解离实验观察PV-IgG对HaCaT细胞粘附功能的影响；通过免疫荧光观察桥粒蛋白的染色模式；通过Western Blot观察桥粒分子蛋白质水平的变化；通过qPCR观察桥粒分子mRNA水平的变化；通过免疫共沉淀研究Dsg3与PG的相互作用情况；通过磷酸化测定观察p38 MAPK、EGFR磷酸化水平。结果PV-IgG与HaCaT细胞共培养后,可以使HaCaT细胞碎片数目增多,桥粒分子内化降解,桥粒稳定性下降,Dsg3与PG相互作用减弱,但对桥粒分子mRNA水平的表达没有影响；也可出现p38 MAPK与EGFR的磷酸化,且p38 MAPK的磷酸化发生于EGFR磷酸化之前。结论利用HaCaT细胞和PV-IgG可以构建天疱疮的细胞模型,桥粒分子出现了与体内棘层松解过程一致的变化。第3部分 胆碱能受体激动剂卡巴胆碱缓解天疱疮棘层松解的机制研究目的研究胆碱能受体激动剂对天疱疮棘层松解的缓解作用及其机制。方法将HaCaT细胞与PV-IgG和胆碱能受体激动剂卡巴胆碱共培养,以PV-IgG诱导的天疱疮细胞模型作为对照,通过细胞解离实验定量分析卡巴胆碱对棘层松解的缓解情况,用免疫荧光方法定性观察桥粒蛋白变化；分别用RIPA和Triton X-100裂解细胞,得到总蛋白和胞浆蛋白,用Western Blot观察细胞表面与粘附相关的Dsg3、PG的变化,以及不同时间点p38 MAPK, EGFR的磷酸化水平；用qPCR检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化；通过免疫共沉淀方法定性分析Dsg3与PG相互作用的变化情况。结果在HaCaT细胞与PV-IgG、卡巴胆碱共培养,发现与PV-IgG组相比细胞碎片数明显减少(18.67±2.52 vs 46.67±2.03, t=11.22, p<0.01);免疫荧光实验发现卡巴胆碱可以缓解PV-IgG所致的桥粒分子内化。在天疱疮细胞模型中,细胞总的Dsg3和PG含量下降,非桥粒部分的Dsg3下降,非桥粒PG含量增加,且Dsg3与PG的相互作用减弱,加入卡巴胆碱后可缓解上述变化。卡巴胆碱也可使Dsg3 mRNA的相对表达量由1.428±0.215增加至4.974±0.948(t=3.65,p=0.01),PG mRNA的相对表达量由1.563±0.247增加至13.420±1.715(t=6.85,p<0.01)。磷酸化实验中,卡巴胆碱可以抑制EGFR磷酸化,而对p38 MAPK磷酸化无明显影响。结论胆碱能受体激动剂卡巴胆碱具有缓解棘层松解的作用,这种缓解作用的机制可能包括：抑制Dsg3和PG内化并增加其表达,增强Dsg3与PG的相互作用,抑制棘层松解关键信号EGFR的磷酸化。第4部分干扰m3、α9 AChR对HaCaT细胞粘附功能的影响目的研究m3、α9 AChR干扰后HaCaT细胞粘附功能和桥粒分子的变化情况。方法利用RNA干扰技术分别干扰m3、α9 AChR的表达,检测干扰效率及最佳的干扰时间；利用细胞解离实验观察m3或α9 AChR表达抑制后HaCaT粘附功能的变化情况：利用Western Blot观察m3或α9 AChR表达抑制后骨架相关和非骨架相关桥粒连接蛋白的变化；利用qPCR观察桥粒蛋白mRNA水平的变化。结果在HaCaT细胞中加入m3或α9AChR干扰序列后,在48h对相应基因的表达均有较好的抑制效果；m3 AChR表达抑制后细胞粘附力下降而α9 AChR的低表达对细胞粘附功能没有明显影响；n3 AChR表达抑制后使桥粒稳定性下降,α9 AChR表达抑制使桥粒稳定性提高；m3 AChR表达抑制后,Dsg1 mRNA表达水平下降、PG表达增多,α9 AChR表达抑制后,Dsg1、PG mRNA的表达增多,Dsg3表达下降。结论干扰m3 AChR的表达后HaCaT细胞的粘附力下降,桥粒稳定性下降；干扰α9 AChR并不影响细胞粘附功能,但可使桥粒稳定性上升。第5部分干扰m3、a9 AChR对天疱疮细胞模型棘层松解的影响目的探索m3或a9 AChR低表达时HaCaT细胞在PV-IgG作用下棘层松解的变化情况。方法通过RNA干扰技术抑制HaCaT细胞m3或a9 AChR的表达,在此基础上与PV-IgG共培养,通过细胞解离实验观察细胞粘附功能的变化；通过免疫荧光观察桥粒分子染色模式的变化；利用Western Blot观察m3或a9 AChR表达抑制后骨架相关和非骨架相关桥粒连接蛋白的变化；通过免疫共沉淀研究Dsg3与PG的相互作用情况；通过磷酸化测定观察p38 MAPK、EGFR磷酸化水平。结果在m3 AChR干扰时,HaCaT在PV-IgG作用下更容易发生棘层松解,骨架相关的Dsg3和PG明显下降,且EGFR的活化程度增强,而a9 AChR干扰对棘层松解有保护作用,在PV-IgG作用下,桥粒分子不发生内化,骨架相关Dsg3和PG不减少,Dsg3与PG的相互作用更紧密,p38 MAPK和EGFR均不发生磷酸化。结论m3和α9AChR在天疱疮的发病中发挥一定作用,且二者在棘层松解某些环节上的作用是相反的。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2015-05-01）
邓艳凤[9]（2015）在《粘附分子、IL-8及其受体在哮喘豚鼠的表达变化及其对中性粒细胞粘附迁移能力的影响研究》一文中研究指出目的:研究哮喘豚鼠中P-selectin与其受体L-selectin、IL-8与其受体CXCR1/CXCR2、CD11a与其受体ICAM-1的表达改变是否影响中性粒细胞的粘附迁移。方法:沿用我室前期实验方法构建哮喘豚鼠模型,购买30只8-10周龄健康雄性豚鼠,随机分为3组:对照组、哮喘组、哮喘治疗组(治疗组)。收集各组豚鼠BALF、腹主动脉血进行白细胞分类计数。ELISA检测BALF与血清中IL-8浓度。提取各组豚鼠肺组织,通过免疫组织化学方法检测各组豚鼠肺血管内皮细胞上P-selectin、ICAM-1表达及定位。分离各组豚鼠腹主动脉血中性粒细胞,进行后续血中性粒细胞上相关蛋白检测:通过Western blot方法检测CXCR1、CXCR2、L-selectin蛋白表达水平,采用Realtime-PCR方法检测CXCR1、CXCR2、L-selectin的m RNA水平,利用Transwell小室检测中性粒细胞的迁移能力,粘附实验检测中性粒细胞的粘附能力,流式细胞术检测CD11a的表达。结果:1.各组豚鼠在雾化激发过程中的不同反应:对照组豚鼠显得安然无恙,无任何异常症状。哮喘组及治疗组豚鼠出现典型的哮喘症状,如:咳嗽、抓鼻、点头呼吸、呼吸急促等,且哮喘组症状更明显。2.各组豚鼠BALF及血中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例结果显示:哮喘组较对照组、治疗组的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例及数目均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。3.各组豚鼠血中性粒细胞CXCR1、CXCR2、L-selectin的蛋白表达结果显示:哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多,差异均有统计学意义(P<0.01)。4.各组豚鼠血清及BALF中IL-8表达结果显示:哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多,差异均有统计学意义(P<0.01)。5.各组豚鼠血中性粒细胞CXCR1、CXCR2、L-selectin的m RNA表达结果显示:哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多,差异均有统计学意义(P<0.01)。6.各组豚鼠肺组织P-selectin、ICAM-1免疫组化结果显示:哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多,差异均有统计学意义(P<0.01)。7.各组豚鼠血中性粒细胞的迁移能力结果显示:哮喘组较对照组、治疗组迁移能力均明显增强,差异均有统计学意义(P<0.01)。8.各组豚鼠血中性粒细胞粘附能力结果显示:哮喘组较对照组、治疗组粘附能力均明显增强,差异均有统计学意义(P<0.01)。9.各组豚鼠血中性粒细胞上CD11a的表达结果显示:哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:1.哮喘豚鼠P-selectin与其受体L-selectin、IL-8与其受体CXCR1/CXCR2、CD11a与其受体ICAM-1的表达均明显增多。2.L-selectin、P-selectin、ICAM-1、CD11a、CXCR1、CXCR2、IL-8的表达上调可增强中性粒细胞的粘附迁移能力。3.哮喘豚鼠气道中性粒细胞的增多可能是通过以上粘附分子、趋化因子及其受体表达增多所致。(本文来源于《南华大学》期刊2015-05-01）
马怡茗,赵新华,包韩,乌云,韩文晓[10]（2015）在《蛋白酶活化受体2促进结肠癌细胞与基质粘附》一文中研究指出目的:蛋白酶活化受体2激活对结肠癌细胞HT29粘附能力的影响。方法:通过激活多肽活化细胞膜表面的蛋白酶活化受体2,检测对结肠癌细胞与FN和Matrigel粘附能力的影响。建立蛋白酶活化受2敲降的结肠癌细胞,检测对结肠癌细胞与基质粘附能力的影响。结果:蛋白酶活化受体2激活,能够促进结肠癌细胞与基质的粘附能力;而蛋白酶活化受体敲降则抑制粘附。结论:蛋白酶活化受体2参与对结肠癌细胞粘附能力的调控,其激活能够促进结肠癌细胞与基质的粘附能力。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2015年05期）
粘附受体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探究光动力联合电灼、干扰素治疗对尖锐湿疣患者粘附分子、Toll样受体及细胞因子表达的影响。方法:选取2015年12月至2016年11月期间常熟市第一人民医院诊治的90例尖锐湿疣患者为研究对象,将其随机分为A组(电灼联合干扰素治疗组)30例、B组(电灼联合光动力治疗组)30例和C组(光动力联合电灼、干扰素治疗组)30例。比较叁组的临床效果、治疗前后的粘附分子、Toll样受体及细胞因子表达情况。结果:C组的临床总有效率高于A组和B组(P<0.05),治疗后粘附分子、Toll样受体和细胞因子表达水平均低于A组与B组(P<0.05);而A组与B组间的检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:光动力联合电灼、干扰素治疗对尖锐湿疣患者粘附分子、Toll样受体和细胞因子表达的影响更好,在尖锐湿疣患者中的应用价值较高。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
粘附受体论文参考文献
[1].孙玉静.粘附类G蛋白偶联受体GPR64的功能与信号转导研究[D].山东大学.2019
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[3].John,R.Couchman.Syndecan受体:细胞粘附表型的门卫（英文）[C].中国生理学会基质生物学专业委员会第二次全国基质生物学学术会议会议手册.2017
[4].尹伟.猪红细胞免疫粘附及其受体[D].山西农业大学.2017
[5].侯婕.猪繁殖与呼吸综合征病毒受体唾液酸粘附素V-set结构域的真核细胞表达及结构预测[D].河南农业大学.2016
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[10].马怡茗,赵新华,包韩,乌云,韩文晓.蛋白酶活化受体2促进结肠癌细胞与基质粘附[J].现代生物医学进展.2015