论文摘要
为了探究日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）的复制机理和研制以JEV复制复合体为靶标的药物,试验以GenBank中收录的JEV HW1株基因序列为模板,设计针对NS5rdrp的特异性引物,提取JEV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板使用PCR方法克隆得到NS5rdrp基因片段;利用T4DNA连接酶构建重组质粒pcDNA3.1-NS5rdrp,并对产物测序;提取去除内毒素的重组质粒,用转染试剂X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent转染BHK21细胞,转染24 h后观察结果;最后利用Western-blot技术检测NS5rarp蛋白的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小约为920 bp的NS5rdrp基因片段;测序结果经NCBI上BLAST比对分析,克隆得到的NS5rdrp基因与HW1株的同源性为100%;转染时细胞的最佳密度区间为70%～80%,转染试剂与转染质粒的比例为3∶1;经过Western-blot检测,重组质粒在细胞内正常表达,NS5rdrp蛋白的分子质量约为37 ku。说明试验通过真核表达成功获得NS5rdrp蛋白。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 耿超,赵红梅,周丹娜,蔡行,王双双
关键词: 日本乙型脑炎病毒,蛋白,真核表达,聚合酶链式反应,细胞,免疫印迹分析
来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年15期
年度: 2019
分类: 农业科技,基础科学
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 长江大学动物科学学院,湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
分类号: S852.65
DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.09.0479
页码: 98-100
总页数: 3
文件大小: 149K
下载量: 68