导读:本文包含了共培养系统论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,毒性,系统,凝胶,睾丸,拟南芥,香蒲。
共培养系统论文文献综述
李静静[1]（2018）在《琼脂糖/明胶/透明质酸水凝胶支架复合细胞共培养系统用于修复软骨组织的研究》一文中研究指出由于无血管结构和无神经组织性质,关节软骨缺乏自我再生的内在能力,关节软骨损伤仍然是一个重大挑战。软骨缺损在临床上通常是不规则的,因此可塑性好的支架可以形成任何形状的软骨缺损并与机体软骨紧密结合。目前,许多治疗方法都是为了解决软骨修复问题,如自体移植和同种异体移植。这些方法在软骨修复中起关键作用。但仍存在供体不足,手术操作复杂,手术费用昂贵等显着缺点。(本文来源于《第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会论文集》期刊2018-06-30）
刘雪[2]（2018）在《大肠杆菌共培养系统生产酪醇糖苷》一文中研究指出糖苷是一类重要的次级代谢天然产物,具有多种药理活性,在医药、食品、保健品领域都有广泛应用。糖苷的生物合成需要两种前体,由于苷元和活性糖供给的限制,单菌合成糖苷的效率往往很低。本文以红景天苷和淫羊藿次苷D2为例,采用汇聚线路,由苯丙氨酸缺陷的BMT菌株合成酪醇,酪氨酸缺陷的BMS菌株合成UDP-葡萄糖和糖苷,组成大肠杆菌共培养系统,研究了途径构建和共培养系统的优化控制。我们构建酮基脱羧酶基因kdc4的组成型表达载体,得到菌株BMT21,摇瓶发酵36h,可生产酪醇1.46g/L。在UDP-葡萄糖强化菌株BMS9中,表达拟南芥来源的密码优化的糖基转移酶基因synugt85a1,得到菌株BMS23,摇瓶发酵36h,可将500mg/L酪醇几乎全部转化,生成927.04mg/L红景天苷。BMT21与BMS23共培养后,无需添加苯丙氨酸和酪氨酸,在极限培养基上能形成稳定良好的互养生长关系。为了解除共培养系统中两个菌株对碳源的竞争,在敲除ptsG基因的基础上,敲除manZ基因,构建了优先利用木糖的菌株BMT23;敲除xylA基因,构建了只能利用葡萄糖的菌株BMS24。研究了葡萄糖木糖比例、接种比例对共培养系统和糖苷合成的影响,优化了发酵控制。在最适条件下,共培养系统摇瓶发酵36h可合成红景天苷670.58mg/L,只有少量酪醇积累。在5L发酵罐中补料发酵129h,红景天苷产量达6.03g/L,没有中间产物积累。为了验证共培养系统的灵活性,选用非特异性的糖基转移酶YjiC,同时生产红景天苷和淫羊藿次苷D2。经过对碳源、接种比例等发酵条件优化,在最适条件下摇瓶发酵48h,可生产403.45mg/L红景天苷,409.34mg/L淫羊藿次苷D2。在5L发酵罐中补料发酵84h,红景天苷产量为2.27g/L,淫羊藿次苷D2产量分为2.38g/L。将苷元和活性糖由两种菌株分别合成,组成共培养系统,是一种非常有潜力的生产糖苷策略,而且对其他复杂天然产物的高效合成也有借鉴价值。(本文来源于《天津大学》期刊2018-06-01）
王梅菊,刘晨,杨龙,张静,吴明德[3]（2017）在《基于拟南芥-微生物共培养系统筛选植物促生菌的研究》一文中研究指出植物促生微生物是指能够促进植物生长,增加田间产量,并能够降低植物周围生物和非生物压力的一类有益微生物。关于植物促生菌株的筛选,传统的方法是利用微生物浸种以及直接处理植株的方法进行筛选。这种方法的优点是筛选环境与植物正常的环境接近,缺点是工作量大、效率低。本研究旨在建立一种新的植物促生菌的筛选模式,筛选植物促生微生物菌株。其原理是利用模式植物拟南芥-微生物共培养系统,在室内快速筛选促进拟南芥生长的微生物菌株。采用稀释平板分离法从不同植物表面得到83个菌株,其中细菌29株,酵母54株。经过拟南芥-微生物共培养筛选,69个菌株处理的拟南芥幼苗与对照处理拟南芥(没有接种微生物)幼苗生长状况没有明显差别,10个菌株对拟南芥幼苗生长有不同程度的抑制作用(幼苗死亡或长势差),4个菌株(CanL-30、jh1、mgh1和qcg)对拟南芥幼苗生长有促进作用。采用油菜种子萌发实验对CanL-30、jh1、mgh1和qcg等4个菌株进行复筛。分别用10~7CFU/mL的菌悬液对油菜种子进行1h浸种处理,以水浸种处理为对照。将不同处理种子分别置于垫有潮湿滤纸的培养皿中,放在20℃、16h光照/8h黑暗光照培养箱中培养,一周之后测量油菜种子萌发率以及油菜苗根长和芽长。其中对照组种子萌发率为73.3%。菌株CanL-30、jh1、mgh1和qcg处理组种子萌发率分别为78.9%、72.2%、88.9%和75.6%。菌株CanL-30、mgh1和qcg处理的油菜苗根明显伸长,而菌株jh1却抑制了油菜苗根伸长。各处理油菜苗芽长与对照比没有显着差异(P>0.05)。对菌株CanL-30、mgh1和qcg进行了分子鉴定。通过对16S rDNA序列分析显示,菌株CanL-30与Bacillus subtilis的同源性为99%,菌株qcg与Serratia liquefaciens的同源性为99%。通过ITS序列分析结果显示,菌株mgh1与Cryptococcus magnus的同源性为100%。分别对CanL-30、mgh1和qcg进行促生机制探究,发现菌株CanL-30和qcg能产生挥发性气体促进植物生长。GC-MS分析CanL-30产生的挥发性物质主要为酮类物质,包括2-Undecanone、2-Dodecanone和2-Tetradecanone。qcg产生的挥发性气体主要是烷类物质和醇类物质。此外,菌株mgh1和qcg能够产生IAA,其产量分别为17.531μg/mL和65.22μg/mL。同时还发现菌株qcg具有溶磷能力。上述结果说明:采用拟南芥-微生物共培养系统筛选植物促生菌是可行的。(本文来源于《中国植物病理学会2017年学术年会论文集》期刊2017-07-25）
张晓芳[4]（2017）在《基于大鼠睾丸细胞叁维共培养模型的雄性生殖毒性测试系统建立》一文中研究指出目的生殖和发育功能障碍是当前严重影响人体健康的主要公共卫生问题之一。现行各类化合物的生殖毒性评价主要采用整体动物试验方法,但以整体动物为基础的生殖毒性测试评价方法不符合“3R”原则,不能完全满足安全性或危险性评价发展的需求。建立更好地吸收融合现代生物技术、能提供更多机制信息、能转化应用于人体的体外毒性测试评价方法成为发展趋势。睾丸是外源性化合物雄性生殖毒性最敏感的器官,雄性生殖的主要功能精子发生和性激素的生成也由睾丸完成。因此,睾丸成为建立雄性生殖毒性体外测试方法时优先考虑的器官。目前国内外已建立了多种睾丸细胞体外毒性测试方法,存在的主要问题包括,单个细胞的试验只能对该细胞的特异毒性及其机制进行研究,难以作为睾丸毒性的评价方法;尚不能观察对生精细胞分化即精子生成的影响。因此,建立能涵盖睾丸主要细胞Sertoli细胞、Leydig细胞和生精细胞功能,特别是能观察生精细胞分化的研究模型成为近年来研究努力的方向。近年来,在睾丸细胞生物学领域取得两项重要进展,一是用细胞外基质作为支架成功实现了能更好维持睾丸主要体细胞功能的叁维短期共培养;二是发现血清替代物(knockOut serum replacement,KSR)能够促进胚胎干细胞和精原细胞的增殖及精原细胞向初级精母细胞分化。基于此,我们推测如将两项成果加以综合,加之培养条件的优化,有可能建立稳定的既能观察睾丸主要体细胞功能,又能观察生精细胞分化功能的研究模型。本研究的思路是拟采用细胞外基质作为3D培养支架,以KSR作为血清替代物,对睾丸Sertoli细胞、Leydig细胞和生精细胞进行共培养;再通过选择比较不同的培养方式、延长培养时间、优化培养条件,建立既能观察Sertoli细胞和Leydig细胞功能变化,又可以观察精原细胞分化的大鼠睾丸细胞叁维共培养模型;然后研究其作为睾丸体外毒性测试系统的适用性。目的是为建立既可作为评价各类化学物对大鼠睾丸主要体细胞功能影响,还可观察对精子发生影响、能提供更多毒作用机制信息的大鼠睾丸体外毒性测试系统奠定基础。方法1、大鼠睾丸细胞3D共培养模型的建立:选择6日龄SD大鼠,处死取出睾丸,清洗去白膜,经过系列酶消化获得细胞悬浮液,经100目筛网过滤,用台盼蓝鉴定存活率,以原比例混合共培养方式在37℃、5%CO2培养箱中培养。获取细胞当天为d0。采用细胞外基质(extracellular matrix,ECM)作为叁维支架,KSR作为常规胎牛血清fbs的替代物,以细胞增殖能力、睾酮含量、乳酸盐分泌量和生精细胞减数分裂特异性基因stra8和sycp3作为该模型初步成功与否的判断指标。通过对不同浓度的ecm和hcg、不同密度的细胞、不同日龄的乳鼠,不同时长的共培养周期的比较确定适宜的实验条件。为评价共培养模型的效果,与采用常规胎牛血清的3d共培养方式(fbs+ecm)和未采用ecm的2d共培养方式(ksr-ecm)进行比较。2、大鼠睾丸细胞3d共培养模型作为雄性生殖毒性测试系统适用性的初步验证:选用欧洲替代方法验证中心推荐的双酚a(biphonea,bpa)和邻苯二甲酸二丁酯(dibutylphthalate,dbp)作为阳性物,观察不同作用时间(8、16和24天)和暴露浓度(bpa:0、17.85、37.5和75μm;dbp:0、6.25、12.5和25μm)验证该模型作为毒性测试系统的可行性。3、新药hz1006长期毒性研究和基于大鼠睾丸细胞3d共培养模型的睾丸毒性研究:对新药(代号为hz1006)进行sd大鼠和beagle犬的28天长期毒性试验,大鼠:20、60和120mg/kg,犬:20、40和80mg/kg,经口给药,连续28天,恢复期大鼠2周,犬4周。选择hz1006不同暴露时间(8、16和24天)和暴露浓度(0、3.125、6.25、12.5和25μm),采用所建测试系统对hz1006潜在的体外雄性生殖毒性及其作用机制进行应用研究。结果1、大鼠睾丸细胞3d共培养模型的建立:结果显示睾丸细胞分离存活率在95%以上,叁种主要细胞维持了良好的生长增殖情况,从乳酸盐、睾酮分泌量和生精细胞分化情况来看,睾酮和乳酸盐分泌量30天稳定,生精细胞d24-d26期间内开始检测到了减数分裂特异标志,显示培养物在共培养期间叁种主要细胞不仅生长良好,而且保持了良好的细胞功能。培养条件优化结果显示200μg/ml的细胞外基质浓度、5×105/ml的细胞密度、10iu/mlhcg,出生后6天的乳鼠和26天的培养周期被确定为适宜的实验条件。与fbs+ecm的3d共培养和ksr-ecm的2d共培养方式比较结果显示,本试验培养方式的细胞增殖能力增强,细胞生长良好,细胞之间形成紧密连接;睾酮和乳酸盐分泌量明显提高且分泌较为稳定;在d24-d26期间开始检测到了生精细胞第一次减数分裂特异标志(sycp3和stra8基因和蛋白)。2、大鼠睾丸细胞3d共培养模型作为雄性生殖毒性测试系统适用性的初步验证:结果显示bpa和dbp可抑制睾酮的分泌,bpa和dbp对睾酮分泌量的影响具有明显的时间和剂量依赖性。不同浓度bpa和dbp对类固醇激素合成相关基因star的表达水平也有明显影响,随着浓度增加star基因和蛋白表达量下降,有明显的剂量-效应趋势。bpa和dbp可使乳酸盐分泌量下降,对乳酸盐分泌量的影响具有明显的时间和剂量依赖性。不同浓度的bpa和dbp对雄激素转运蛋白基因(abp)的基因和蛋白表达水平有明显影响,随着浓度增加abp表达量下降,有明显的剂量-效应趋势。不同浓度bpa和dbp作用24天后,可对生精细胞减数分裂特异性基因stra8和sycp3的表达造成不同程度的影响,对stra8和sycp3基因和蛋白表达的抑制作用有明显的剂量-效应趋势。结果还显示,bpa最敏感的靶细胞是sertoli细胞,可能首先引起sertoli细胞功能改变,而dbp最敏感的靶细胞是leydig细胞,可能首先引起leydig细胞功能改变,进而影响其他生殖细胞功能。3、新药hz1006长期毒性研究和基于大鼠睾丸细胞3d共培养模型的睾丸毒性研究:40mg/kg以上剂量的hz1006可引起犬雄性生殖毒性,表现为睾丸、附睾和前列腺的病理改变。其中睾丸的病理改变包括生精小管管腔偏小,数量也较少,生精细胞层次单一,数量明显减少,只能见到精原细胞和部分初级精母细胞,次级精母细胞、各级精细胞、成熟精子罕见。但大鼠未观察到明显的雄性生殖毒性。体外实验结果显示,hz1006对共培养细胞24h、48h和72h的细胞毒性(ic50)分别为325.19、277.17和149.64μm。hz1006抑制细胞增殖,对细胞增殖能力的影响有一定时间和剂量依赖性。hz1006可抑制睾酮的分泌,对睾酮分泌量的影响具有明显的时间和剂量依赖性。不同浓度hz1006作用24天后,可对生精细胞减数分裂特异性基因stra8和sycp3的表达造成不同程度的影响,对stra8和sycp3基因和蛋白表达的抑制作用有明显的剂量-效应趋势。试验还观察到hz1006可致ar蛋白水平及其靶向基因psa表达水平的下降,hdac6表达下降。结论1、成功建立了既能观察sertoli细胞和leydig细胞功能变化,又可以观察生精细胞增殖分化,可作为研究大鼠睾丸主要细胞生物学功能的3d体外共培养模型。目前国内外尚未报道。2、验证结果显示大鼠睾丸细胞3d共培养模型可有效检测出bpa和dbp对雄性睾丸细胞已知的各类毒作用,并可更准确地确定靶细胞等,为机制研究提供更多信息。初步表明该模型可作为雄性生殖毒性的测试系统及其毒作用机制的研究模型。3、新药hz1006在40mg/kg以上剂量经口给药可引起犬雄性生殖毒性,表现为睾丸、附睾和前列腺的病理改变。但对大鼠未观察到明显的雄性生殖毒性。hz1006在体外可导致睾丸毒性,这与长期毒性试验中hz1006犬睾丸毒性结果是一致的,其作用靶细胞可能是leydig细胞,由于影响睾酮分泌,进而影响精子生成。初步的机制研究提示hz1006引起的生殖毒性改变可能与其对hdac6的抑制作用有关,表现为ar蛋白水平的降低及其靶向基因水平的下降。研究结果为hz1006的毒性评价和机制研究提供了新的实验依据;也证实了所建模型作为雄性生殖毒性测试系统适用性。4、本研究初步建立的基于大鼠睾丸细胞3D共培养模型的雄性生殖毒性的测试系统有良好的潜力发展成为新的毒性测试方法,有必要做进一步的完善和验证研究。(本文来源于《第二军医大学》期刊2017-05-01）
贾芳[5]（2017）在《uPA系统在骨髓基质细胞—白血病细胞共培养模型中表达及意义研究》一文中研究指出uPA系统包含尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,uPA)、尿激酶纤溶酶原激活物受体(urokinase type plasminogen activator receptor,uPAR/CD87)以及纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitors,PAI-1and PAI-2)。多种人类恶性肿瘤的局部侵袭和转移与uPA系统密切相关,是目前治疗肿瘤的重要分子靶点。本课题通过实时荧光定量PCR、ELISA等方法研究白血病人骨髓基质细胞-白血病细胞共培养中uPA、uPAR、PAI-1、MMP-9、VEGF的表达情况,从而探究白血病骨髓微环境与uPA系统之间的作用关系。研究结果表明,与骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)单独培养相比,在共培养条件下白血病骨髓基质细胞的uPA、uPAR、PAI-1、VEGF的表达显着升高,而共培养条件下白血病细胞HL60的MMP-9表达升高。co-BMSCs中的uPA、uPAR和PAI-1的表达显着升高可以进一步解释白血病细胞在骨髓微环境的生长、发展、复发以及白血病不良预后与uPA系统有密切的联系。共培养条件下HL60的MMP-9的表达升高,这或许可以解释为骨髓微环境有助于白血病细胞的扩散。(本文来源于《兰州大学》期刊2017-03-01）
介明沙,李海芳,林路遥,张洁,林金明[6]（2016）在《集成微流控细胞共培养系统和模拟药物的代谢》一文中研究指出本研究以微流控芯片为平台,进行前体药物伊立替康(CPT-11)的肠细胞吸收、靶细胞作用和肝细胞代谢协同药物代谢研究:分别以人结肠癌Caco-2细胞群体来模拟小肠对药物吸收,以HepG2肝癌细胞群体模拟肝脏对药物的代谢[1]。CPT-11需要经过Caco2细胞吸收,HepG2细胞代谢形成活性中间产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38),活性药物再进入靶器官U251细胞代谢产生抗癌效果。利用荧光检测、流式细胞仪和液相色谱与串联质谱等技术检测药物代谢过程中的代谢产物[2],构建功能化的药物代谢微流控芯片系统,实现细胞间药物转运与化学信号传递的监控。这一3D装置可推广用于体外药物筛选及个性化癌症治疗的研究。(本文来源于《中国化学会第30届学术年会摘要集-第四十叁分会：质谱分析》期刊2016-07-01）
张晓芳,任丽君,张天宝[7]（2016）在《基于大鼠睾丸细胞3D共培养模型的雄性生殖毒性测试系统建立》一文中研究指出目的:建立一个能用于各类化学物对大鼠睾丸细胞和功能影响进行评价、睾丸毒作用机制研究的新的体外毒性测试系统,以更好满足雄性生殖毒性评价和机制研究的需要。方法:1、通过相关指标的测定(细胞形态、细胞增殖能力、睾酮含量、生精细胞脱落率及脱落细胞存活率、生精细胞分化能力),初步建立3D共培养模型,通过细胞外基质浓度、细胞浓度、乳鼠年龄及共培养周期的选择来确定和优化最适宜的睾丸细胞3D共培养条件。2、选择欧洲替代方法研究中心推荐的多种生殖毒物如双酚A、邻苯二甲酸盐及其代谢物和阴性对照物等验证该睾丸细胞叁维共培养模型能否作为毒性测试系统。根据阳性物和阴性物的作用特点,选择是否需用体外代谢活化系统(S9)、比较受试物作用时间、观察时间,进一步为优化方案提供依据。并对该毒性测试系统进行优化,最后确定几个能用于毒性评价的通用指标,且指标数量尽量少,指标检测方法尽量简单。3、该大鼠睾丸细胞3D共培养模型作为内分泌干扰物雄性生殖毒性研究模型的应用研究,一方面将该模型用于未知雄性生殖毒性化合物的快速筛选,根据化合物的作用特征,选择合适的接触时长,选用已经确定的毒性指标进行检测,比较该毒性筛选系统获得测试结果与动物实验结果的一致性,如毒性测试方法不理想将另外对指标进行优化、调整或随着国内外的研究进展替换更好的检测指标。另一方面将该模型用于已知具有睾丸毒性的内分泌干扰物的机制研究,选择一组已确定有雄性生殖毒性但机制不明确的内分泌干扰物,利用该共培养模型进行测试,通过毒性指标的检测,确定体外结果与体内结果的一致性,然后根据毒作用特征判定可能的毒性通路,如细胞凋亡相关信号通路(Fas/FasL),细胞应激(SAPK/JNK)和存活信号转导通路(ERK1/2,AKT)等进行研究,通过比较毒性通路,揭示可能的机制,为毒性预测和筛选生物标志提供依据。结果:1、成功分离了生精细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞,并用染色法和免疫荧光法进行了鉴定。2、通过相关指标的测定(细胞形态、细胞增殖能力、睾酮含量、生精细胞脱落率及脱落细胞存活率、L-乳酸盐及丙酮酸盐含量),比较了无细胞外基质共培养和有细胞外基质共培养模型的差异,并通过精原细胞分化情况确定3D共培养模型的成功建立。3、通过各指标的检测,对3D共培养系统的条件进行了优化,确定了最适宜的ECM浓度、细胞浓度、乳鼠年龄和共培养周期。4、利用BPA和DBP初步验证了该系统的适用性,结果表明BPA和DBP能够改变该3D培养系统中Leydig细胞、Sertoli细胞和生精细胞的形态和功能,与体内实验结果相符。5、选择的已知有体内生殖毒性作用的化合物HS1006能够改变该3D共培养系统中Leydig细胞、Sertoli细胞和生精细胞的形态和功能,如降低睾酮含量,生精细胞存活率、增加生精细胞脱落数量,阻碍生精细胞生化等。结论:1、初步建立了大鼠睾丸细胞3D共培养模型,并对其共培养条件进行了优化。2、初步验证了该系统的适用性。3、利用该模型对已知有生殖毒性的化合物进行了筛选。(本文来源于《2016年第六届全国药物毒理学年会论文集》期刊2016-06-28）
杨盛,何然,张飞燕,薛强,徐晓玉[8]（2016）在《细胞共培养模型及其在中枢神经系统疾病研究中的应用》一文中研究指出中枢神经系统疾病的深入研究离不开神经组织细胞的体外培养。神经组织细胞的单独培养难以反映在体细胞间的相互影响,而其共培养模型可以最大程度地模拟体内环境,观察细胞与细胞、细胞与胞外环境之间的相互作用,被越来越广泛地用于诸如脑卒中、帕金森病、阿尔茨海默病和肌萎缩侧索硬化症等中枢神经系统疾病的体外研究。"神经血管单元"是由大脑神经元、脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞为主组成的体现大脑结构和功能的基本单位,其体外模型的建立对研究中枢神经系统疾病具有重要意义。本文结合细胞间接触和非接触的培养方式,从二维和叁维培养的技术角度出发,概述中枢神经组织细胞的共培养模型及其在相关疾病研究中的应用,并展望其在未来研究中的发展方向。(本文来源于《药学学报》期刊2016年03期）
陈国元,李青松,谢莆尧,陈燕虹[9]（2015）在《共培养条件下黄菖蒲和狭叶香蒲对铜绿微囊藻光合系统的影响》一文中研究指出采用共培养的实验方法,通过测定铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)叶绿素a含量及叶绿素荧光参数,研究了黄菖蒲(Iris pseudacorus L.)和狭叶香蒲(Typha angustifolia L.)对铜绿微囊藻光合系统的影响。结果表明,共培养条件下,黄菖蒲和狭叶香蒲对铜绿微囊藻的光合系统具有明显的化感作用,表现为,处理组中铜绿微囊藻的叶绿素a含量从第4天开始显着(Paried t-test,p<0.05)低于对照组;培养过程中,YⅡ(光系统Ⅱ有效量子产量)和Fv/Fm(光系统Ⅱ最大量子产量)值也呈现逐渐下降的趋势,说明黄菖蒲和狭叶香蒲对铜绿微囊藻产生了化感抑制,光合效率和光能转化效率下降;而Ik(半饱和光强)和α(光限制斜率)值呈现先增加后逐渐降低的趋势,从第4天开始显着(Paried t-test,p<0.05)低于对照组,表明黄菖蒲和狭叶香蒲的化感作用在短时间内可以激发铜绿微囊藻对光强的耐受能力并能提高藻的光能利用效率,但是随着化感时间的延长,铜绿微囊藻对强光的耐受能力及光能利用效率下降。(本文来源于《环境工程学报》期刊2015年09期）
王建杰[10]（2015）在《共培养系统中血管内皮细胞对乳腺癌细胞影响的研究》一文中研究指出肿瘤组织的发生发展是一个复杂的过程,肿瘤细胞与内皮细胞之间存在一系列的相互作用。肿瘤细胞和内皮细胞共培养的研究焦点在于肿瘤细胞在内皮细胞血管生成过程中的作用,很少有研究关注内皮细胞与肿瘤细胞相互作用过程中,内皮细胞对肿瘤细胞恶性的影响,而且大部分的相互作用研究停留在二维培养水平。共培养体系的构建需要考虑多种因素,为了构建适合于乳腺癌细胞4T1和血管内皮细胞HUVECs共培养的系统,本研究利用海藻酸钠、明胶、壳聚糖、透明质酸等生物材料制备水凝胶,用于包裹4T1和HUVECs。从细胞来源、细胞比例及总数、生存环境、相互作用方式等方面设置不同的共培养组,从肿瘤细胞生长情况进行分析,在叁维环境中构建了适合4T1与HUVECs相互作用的共培养体系。本研究主要对与HUVECs共培养后的4T1基质金属蛋白酶MMP9,多药耐药蛋白MDR1,乳腺癌干细胞标志物CD44和CD24蛋白的表达进行检测,发现共培养后的4T1细胞的MMP9、MDR1、CD44的表达量升高,而CD24的表达降低。相关mRNA的表达结果与蛋白检测结果一致,证明与HUVECs共培养促进4T1恶性相关分子标志物的表达。利用共培养系统将HUVECs与乳腺癌干细胞4T1-CSC共培养,免疫荧光检测MMP9、MDR1、CD44和CD24蛋白表达进行检测,通过qRT-PCR检测MMP9、MDR1、CD44、CD24、,乳腺癌干细胞标志物Sca1、干细胞分子标志物Nestin、Tert、Nanong和Sox2的m RNA的表达,实验结果表明共培养后的4T1-CSC恶性相关标志物及干细胞相关标志物表达上调。与HUVECs共培养促进4T1及4T1-CSC的恶性相关标志物表达,说明HUVECs对肿瘤细胞的促进支持作用,这可能可以作为肿瘤治疗的靶点,为肿瘤治疗的研究提供研究思路。(本文来源于《哈尔滨工业大学》期刊2015-06-01）
共培养系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
糖苷是一类重要的次级代谢天然产物,具有多种药理活性,在医药、食品、保健品领域都有广泛应用。糖苷的生物合成需要两种前体,由于苷元和活性糖供给的限制,单菌合成糖苷的效率往往很低。本文以红景天苷和淫羊藿次苷D2为例,采用汇聚线路,由苯丙氨酸缺陷的BMT菌株合成酪醇,酪氨酸缺陷的BMS菌株合成UDP-葡萄糖和糖苷,组成大肠杆菌共培养系统,研究了途径构建和共培养系统的优化控制。我们构建酮基脱羧酶基因kdc4的组成型表达载体,得到菌株BMT21,摇瓶发酵36h,可生产酪醇1.46g/L。在UDP-葡萄糖强化菌株BMS9中,表达拟南芥来源的密码优化的糖基转移酶基因synugt85a1,得到菌株BMS23,摇瓶发酵36h,可将500mg/L酪醇几乎全部转化,生成927.04mg/L红景天苷。BMT21与BMS23共培养后,无需添加苯丙氨酸和酪氨酸,在极限培养基上能形成稳定良好的互养生长关系。为了解除共培养系统中两个菌株对碳源的竞争,在敲除ptsG基因的基础上,敲除manZ基因,构建了优先利用木糖的菌株BMT23;敲除xylA基因,构建了只能利用葡萄糖的菌株BMS24。研究了葡萄糖木糖比例、接种比例对共培养系统和糖苷合成的影响,优化了发酵控制。在最适条件下,共培养系统摇瓶发酵36h可合成红景天苷670.58mg/L,只有少量酪醇积累。在5L发酵罐中补料发酵129h,红景天苷产量达6.03g/L,没有中间产物积累。为了验证共培养系统的灵活性,选用非特异性的糖基转移酶YjiC,同时生产红景天苷和淫羊藿次苷D2。经过对碳源、接种比例等发酵条件优化,在最适条件下摇瓶发酵48h,可生产403.45mg/L红景天苷,409.34mg/L淫羊藿次苷D2。在5L发酵罐中补料发酵84h,红景天苷产量为2.27g/L,淫羊藿次苷D2产量分为2.38g/L。将苷元和活性糖由两种菌株分别合成,组成共培养系统,是一种非常有潜力的生产糖苷策略,而且对其他复杂天然产物的高效合成也有借鉴价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
共培养系统论文参考文献
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