大菱鲆肠道中广谱拮抗活性乳酸菌的筛选及其细菌素鉴定

大菱鲆肠道中广谱拮抗活性乳酸菌的筛选及其细菌素鉴定

论文摘要

应用牛津杯法从大菱鲆肠道分离的乳酸菌中筛选出对革兰氏阳性和阴性细菌均具有抑制作用的菌株LP1-4,经生理生化反应和16SrRNA鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。通过温度、pH值和蛋白酶等因素分析,结果表明菌株LP1-4无细胞上清液(cell-free supernatant,CFS)中抑菌物质具有良好的热稳定性,在pH2.5~5.0具有抑菌活性,且对蛋白酶敏感,初步判断为细菌素类抑菌物质。菌株LP1-4在最佳培养时间24 h时抑菌活性达到峰值,应用乙酸乙酯萃取后抑菌圈直径达25.42 mm。采用Labscale TFF System超滤分离和Sephadex G-25凝胶层析获得小于1.0 ku分子质量的细菌素。经高效液相色谱纯化分析,抑菌物质在液相分离条件下目标峰的保留时间为5.0 min。采用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱确定细菌素分子质量为0.854 ku,其氨基酸排列顺序为谷氨酸-天冬酰胺-赖氨酸-脯氨酸-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-赖氨酸(ENKPAAPK)。本研究从大菱鲆肠道筛选具有广谱抗菌活性的菌株LP1-4,对研发控制水产品腐败菌和致病菌的乳酸菌生物防腐保鲜制剂具有潜在的应用价值。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 大菱鲆肠道中乳酸菌的分离
  •     1.3.2 广谱性抑菌作用乳酸菌的筛选
  •       1.3.2. 1 乳酸菌CFS的制备
  •       1.3.2. 2 指示菌的制备
  •       1.3.2. 3 广谱性菌株的筛选
  •     1.3.3 乳酸菌菌株鉴定
  •       1.3.3. 1 生理生化鉴定
  •       1.3.3.216S rRNA鉴定
  •     1.3.4 乳酸菌生长与拮抗活性曲线
  •     1.3.5 影响乳酸菌CFS拮抗活性因素分析
  •     1.3.6 细菌素初级纯化
  •       1.3.6. 1 有机溶剂萃取
  •       1.3.6. 2 乳酸菌抗菌活性物质的分离纯化
  •     1.3.7 细菌素的层析
  •     1.3.8 HPLC纯化
  •     1.3.9 质谱分析
  •   1.4 数据处理
  • 2 结果与分析
  •   2.1 产广谱性抑菌活性物质乳酸菌的筛选
  •   2.2 乳酸菌菌株鉴定
  •     2.2.1 生理生化反应
  •     2.2.2 16S rRNA鉴定
  •   2.3 乳酸菌生长与拮抗活性曲线
  •   2.4 影响乳酸菌CFS拮抗性的因素
  •     2.4.1 酶敏感性实验
  •     2.4.2 pH值实验
  •     2.4.3 热处理实验
  •   2.5 细菌素初级纯化
  •   2.6 细菌素中度纯化
  •   2.7 HPLC纯化
  •   2.8 质谱分析
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 马国涵,马欢欢,吕欣然,刘佳伊,孙悦,白凤翎,励建荣

    关键词: 大菱鲆肠道,广谱拮抗性乳酸菌,筛选与鉴定,细菌素

    来源: 食品科学 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 渤海大学食品科学与工程学院辽宁省食品安全重点实验室生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心,北京林业大学生物科学与技术学院

    基金: “十二五”国家科技支撑计划项目(2015BAD17B05)

    分类号: TS254.1

    页码: 159-165

    总页数: 7

    文件大小: 2480K

    下载量: 312

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