轮状病毒和诺如病毒重组抗原的表达、纯化及免疫原性鉴定

论文摘要

轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体,诺如病毒除能引起婴幼儿腹泻,也能导致成人感染,引发胃肠炎,两种病毒主要感染小肠上皮细胞,从而造成细胞损伤,引起腹泻、呕吐等临床症状,带来大量直接或间接经济损失甚至导致全球大量儿童死亡病例的产生。疫苗接种是防控轮状病毒和诺如病毒感染的主要手段,轮状病毒疫苗已经在临床应用多年,可以明显减轻轮状病毒感染及引起的症状;由于难以实现诺如病毒体外分离培养,目前还没有诺如病毒疫苗上市使用,在研的诺如病毒疫苗主要是基因工程疫苗,因此我们立足于基因工程疫苗,将两种病毒的主要抗原表位嵌合在一起,构建表达载体进行表达、纯化及免疫原性研究,拟为将来有可能的联合疫苗研发做好前期工作。[目的]本论文研究目的是表达G1型（ZTR-68）株和G9（ZTR-18）型轮状病毒的VP7基因的核心抗原表位以及GⅡ.4型诺如病毒VP1基因的核心抗原表位,使其展示在乙肝核心抗原颗粒表面。为建立一种基于乙型肝炎核心抗原为载体的携带轮状病毒和诺如病毒核心抗原的联合亚单位疫苗提供理论基础。[方法]构建以HBV核心抗原表位为载体的G1型和G9型轮状病毒的串联重组抗原的质粒,GⅡ.4型诺如病毒VP1基因的重组抗原的质粒,G1型和G9型及GⅡ.4型诺如病毒VP1基因的重组抗原的质粒,不同氨基酸区段中间以连接肽GGGGS相连,之后经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达重组蛋白,并纯化包含上述抗原表位的重组蛋白,进行多种免疫相关实验的鉴定,并免疫小鼠检测其免疫原性。[结果]成功构建了 G1型和G9型轮状病毒的串联重组抗原质粒,GⅡ.4型诺如病毒VP1基因的重组抗原的质粒,G1型轮状病毒和G9型轮状病毒及GⅡ.4型诺如病毒的串联重组抗原的质粒,经转化至E.coli DH5α感受态细菌中,经IPTG诱导高效表达出包含上述抗原表位的重组蛋白,实验表明该蛋白被特异病毒抗体识别,取重组蛋白抗原免疫后的小鼠血清鉴定表明重组蛋白可以激发高水平的特异抗体应答。[结论]G1型和G9型轮状病毒的串联重组抗原质粒,GⅡ.4型诺如病毒VP1基因的重组抗原的质粒,G1型轮状病毒和G9型轮状病毒及GⅡ.4型诺如病毒的串联重组抗原的质粒可诱导高水平的、持续存在的特异抗体应答。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 刘洋

导师: 李鸿钧

关键词: 轮状病毒,诺如病毒,重组抗原,免疫原性

来源: 昆明医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 昆明医科大学

基金: 创新工程项目病毒载体(2016-I2M-3-026)

分类号: R373

DOI: 10.27202/d.cnki.gkmyc.2019.000446

总页数: 73

文件大小: 4653K

下载量: 58

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