论文摘要
目的建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌。方法提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段,将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,验证所得到的重组质粒,以紫外分光光度计测量重组质粒吸光度值A260,并换算为质粒拷贝数后作梯度稀释得到不同浓度的质粒标准品;进行荧光定量PCR分析并通过特异性、灵敏性实验以验证该方法的可行性。结果重组质粒标准品浓度在103～108 copies/μL范围内线性关系良好（r2>0.99）,实时荧光定量PCR检测志贺氏菌时出现良好的扩增曲线,鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未出现扩增曲线。志贺氏菌的检出限为100CFU/m L。结论本方法便捷、高效、可靠,可用于志贺氏菌的快速定性定量检测。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 戴陈伟,童琳,武昌俊,许勇,李舜,朱倩云,蔡标
关键词: 志贺氏菌,实时荧光定量,标准曲线,特异性,灵敏性
来源: 食品安全质量检测学报 2019年23期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅰ辑
专业: 化学,轻工业手工业
单位: 安徽省医学科学研究院
基金: 安徽省十三五医疗卫生重点专科建设项目(皖卫科教[2017]30号),2018年度安徽省卫计委科研计划项目(2018YK008)~~
分类号: TS207.4;O657.3
DOI: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2019.23.040
页码: 8037-8041
总页数: 5
文件大小: 1207K
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