趋化因子CCL28基因的克隆表达及其多抗制备

趋化因子CCL28基因的克隆表达及其多抗制备

论文摘要

将原核表达质粒pGEX-6P-1-CCL28转化至大肠埃希菌BL21中,经IPTG诱导,获得了GST-CCL28可溶性融合表达产物。利用纯化的GST-CCL28蛋白免疫BALB/c小鼠制备了抗GST-CCL28的多克隆抗体。同时将CCL28基因亚克隆进真核表达载体,经测序验证后命名为pcDNA3.1-CCL28。间接免疫荧光及Western blot试验结果进一步证明,所获得的抗GST-CCL28多克隆抗体能特异性的识别转染pcDNA3.1-CCL28质粒的DF-1细胞内高表达的CCL28蛋白。这一研究为制备抗CCL28单克隆抗体和探究与CCL28相关的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 质粒、菌株与细胞
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 GST-CCL28的诱导表达及多抗制备
  •   1.4 引物设计
  •   1.5 PCR扩增
  •   1.6 真核表达载体构建及筛选
  •   1.7 真核质粒转染
  •   1.8 多克隆抗体间接免疫荧光检测
  •   1.9 多克隆抗体Western blot检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 GST-CCL28的蛋白表达鉴定及其纯化
  •   2.2 CCL28基因真核表达载体构建
  •   2.3 抗GST-CCL28蛋白多抗反应性鉴定
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陆文静,王礼学,王国相,王伟康,谢泉,谢菁,邵红霞,高巍,秦爱建,叶建强

    关键词: 趋化因子,克隆表达,多克隆抗体

    来源: 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 扬州大学兽医学院/禽类预防医学教育部重点实验室/江苏省动物预防医学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/农业科技发展研究院/教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室,南京中医药大学附属南京医院(南京市第二医院)放疗科,南京至泰生物医药科技有限公司

    基金: 江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD)

    分类号: Q78

    DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2019.04.007

    页码: 44-48+54

    总页数: 6

    文件大小: 1468K

    下载量: 81

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