基于PEG介导原生质体转化构建粉红聚端孢荧光标记

基于PEG介导原生质体转化构建粉红聚端孢荧光标记

论文摘要

粉红聚端孢是多种植物的重要病原菌。本研究通过酶解粉红聚端孢幼嫩菌丝细胞壁获得原生质体,用PEG介导原生质体转化将携带GFP基因和博来霉素抗性基因的外源DNA随机插入粉红聚端孢基因组,共获得博来霉素抗性菌株90株,转化效率达18个/μg。选取22株转化子荧光观察,发现均可表达荧光,菌株间荧光强度不同,其中10株转化子荧光表达较强。与野生型相比,突变菌株TR45的菌落生长、产孢量和致病力等生物学特性均未改变,在不含博来霉素的培养皿中继代培养10代荧光仍能稳定表达。本研究构建的高效原生质体制备和PEG介导粉红聚端孢遗传转化方法,可用于该菌基因功能研究,绿色荧光标记菌株可用于病菌侵入、田间监测、侵染循环等发生规律研究。

论文目录

  • 1材料与方法
  •   1.1供试菌株、质粒、培养基和试剂
  •   1.2 PEG介导的遗传转化
  •   1.3荧光观察
  •   1.4转化子PCR检测
  •   1.5转化子的生物学特性和致病力分析
  •   1.6组织学观察
  •   1.7统计学分析
  • 2结果与分析
  •   2.1粉红聚端孢的遗传转化、PCR验证和荧光信号观察
  •   2.2荧光标记转化子的生物学特性和致病力评价
  •   2.3组织学观察
  • 3讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 戴蓬博,梁晓飞,张荣,孙广宇

    关键词: 遗传转化,绿色荧光蛋白,原生质体制备,苹果,心腐病

    来源: 菌物学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

    单位: 西北农林科技大学植物保护学院

    基金: 国家自然科学基金(31772113),国家苹果产业技术体系(CARS-27)~~

    分类号: S432.44

    DOI: 10.13346/j.mycosystema.180259

    页码: 90-97

    总页数: 8

    文件大小: 654K

    下载量: 375

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