叶雪石, 刘霆, 崔旭, 孟文彤, 席亚明[1]2007年在《骨髓增生异常综合征P15~(INK4B)基因甲基化及药物去甲基化作用》文中研究说明目的检测骨髓增生异常综合征(M DS)患者P 15INK 4B基因甲基化状况;探讨5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶(dec itab ine)和叁氧化二砷(A s2O3)对M DS患者细胞的去甲基化作用。方法采用限制性内切酶联合PCR方法检测14例M DS患者P 15INK 4B基因甲基化,选择1例由M DS转化为急性白血病患者的外周血单个核细胞,分组分别加入dec itab ine和A s2O3进行处理,分析甲基化程度变化情况。结果低危组M DS患者(RCM D)均未发现P 15INK 4B基因甲基化,4例高危组M DS患者(RAEB)和4例M DS-AL患者发现P 15INK 4B基因甲基化。经dec itab ine和A s2O3处理后,M DS患者细胞的甲基化程度均降低50%左右。结论M DS的发生与P 15INK 4B基因甲基化密切相关,dec itab ine和A s2O3均对M DS患者细胞高度甲基化的P 15INK 4B基因具明显去甲基化作用。
叶雪石, 刘霆, 孟文彤, 崔旭[2]2004年在《骨髓增生异常综合征P15~(INK4B)基因甲基化及药物去甲基化作用》文中提出目的:检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓P15~(INK4B)基因甲基化情况;探讨5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶(decitabine)和叁氧化二砷(arsenic trioxide,As)2O_3)对MDS患者体外培养细胞的去甲基化作用。方法采用限制性内切酶联合PCR方法检测14例MDS患者骨髓单个核细胞P15~(INK4B)基因甲基化情况,并以β=globin(β珠蛋白)基因片断扩增产物作为试验内参照,凝胶成像系统半定量分析其甲基化
叶雪石[3]2004年在《骨髓增生异常综合征P15～（INK4B）基因甲基化及药物去甲基化作用的研究》文中研究指明目的 检测骨髓增生异常综合征(MDS)p15~(INK4B)基因甲基化状态;探讨5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶(decitabine)和叁氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)对MDS患者体外培养细胞的去甲基化作用。 方法 采用限制性内切酶联合PCR方法检测MDS患者骨髓单个核细胞p15~(INK4B)基因甲基化状态,并以β-globin(β珠蛋白)基因扩增产物作为试验内参照,分析其甲基化率。体外培养经检测p15~(INK4B)基因高度甲基化的MDS患者外周血单个核细胞,加入decitabine和As_2O_3进行处理,分析其甲基化率变化情况。 结果 低危组MDS患者均未发现p15~(INK4B)基因甲基化,80%高危组MDS患者和66.6%MDS转化为急性白血病的患者发现p15~(INK4B)基因高度甲基化。经decitabine和As_2O_3处理后,培养细胞的甲基化率由药物处理前的19.73%降至处理后的8.82～10.06%,明显降低至原来的50%左右,两种药物间去甲基化效应无明显差别。 结论 骨髓增生异常综合征的发生与p15~(INK4B)基因高度甲基化密切相关,且随病情进展,p15~(INK4B)基因高度甲基化出现越频繁。decitabine和As_2O_3对MDS患者来源的体外培养细胞高度甲基化的p15~(INK4B)基因具明显去甲基化作用,两种药物间去甲基化效应无明显差别。
王晓丹, 刘科宇, 卢润章, 韩冰虹, 展昭民[4]2007年在《尿多酸肽对高危组骨髓增生异常综合征细胞株p15~(INK4B)基因的去甲基化作用》文中指出目的探讨尿多酸肽(CDA-2)对高危组骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株p15INK4B基因的去甲基化作用。方法检测不同浓度CDA-2作用下,MDS-RAEB细胞株MuTz-1的细胞存活率(MTT法);p15INK4B基因、甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA表达(RT-PCR);p15INK4B基因甲基化程度(甲基化特异PCR,MSP)。结果CDA-2呈剂量依赖性抑制MuTz-1细胞生长;伴随CDA-2剂量增加,p15INK4B基因甲基化程度逐渐减弱,其mRNA表达逐渐增加;且CDA-2可显着降低MuTz-1细胞中DNMT1和DNMT3BmRNA的表达。结论CDA-2可能通过下调DNMT1和DNMT3BmRNA表达使p15INK4B基因甲基化程度下降,恢复其在细胞周期中的调节作用,进而抑制MDS细胞的过度增殖。
叶雪石, 刘霆[5]2004年在《P15~(INK4B)基因甲基化与骨髓增生异常综合征》文中研究指明骨髓增生异常综合征(MDS)是一种造血干细胞的克隆性疾病,容易进展为急性白血病。P15~(INK4B)基因为人类肿瘤抑制基因,在负向调节造血细胞增生和阻止其恶性转换中起着重要的作用。近来研究显示P15~(INK4B)基因高度甲基化与MDS的发生、发展具重要关系,越是疾病进展期,P15~(INK4B)基因甲基化出现越频繁。5-氮杂胞苷(5-azacytidine)和5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(decitabine)用于治疗MDS患者已取得一定效果,叁氧化二砷的体外试验显示其具有抑制MDS细胞株生长和去甲基化作用。去甲基化治疗有望成为今后治疗MDS的有效方案之一。
张学彦, 刘铁夫, 刘伟, 崔希威[6]2006年在《亚砷酸诱导人食管癌细胞株EC109细胞p15~(INK4B)基因的表达》文中指出目的：研究亚砷酸(As_2O_3)对人食管癌EC109细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15~(INK4B)(p15)基因表达的影响．方法：终浓度2μmol/L的As_2O_3加入食管癌EC109细胞系,采用甲基化特异PCR(MSP)检测食管癌EC109细胞系中p15基因甲基化,采用RT-PCR和Western blot方法检测As_2O_3处理前后p15的mRNA和蛋白质水平的表达情况．用Scion Image软件测量条带灰度值,P15蛋白与ACTB条带的灰度比进行半定量分析．结果：EC109细胞p15基因发生高甲基化,p15基因不表达．As_2O_3作用后p15基因甲基化程度明显下降,As_2O_3作用72,48,24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(37．11±3．62,50．92±5．47,72．07±7．53 vs 97．23±9．80,P＜0．05)．As_2O_3作用24 h后出现p15 mRNA表达,随As_2O_3作用时间延p15 mRNA表达逐渐增强,各个时间组之间比较,除了未加药组和加药24 h组之间及加药24 h组和加药48 h组之间差异无统计学意义外,其余各个时间组之间差异有统计学意义(0．72±0．07 vs 0．58±0．06 vs 0．48±0．07 vs 0．41±0．08,P＜0．05)．As_2O_3作用24 h后P15蛋白出现表达,2μmol/L作用24-72 h中P15蛋白条带灰度逐渐增强,As_2O_3作用72,48,24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(0．51±0．02 vs 0．21±0．01 vs 0．16±0．02 vs 0．06±0．01,P＜0．05),说明其表达随As_2O_3作用时间延长而逐渐增强．结论：As_2O_3可使食管癌EC109细胞p15基因去甲基化,使p15基因表达上调,从而抑制细胞周期进程．
丁倩倩, 陈勤奋, 王小钦[7]2015年在《DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨对SKM-1细胞P15~(INK4B)基因甲基化状态的影响》文中研究指明目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(DAC)对骨髓增生异常综合征(MDS)转白血病细胞株SKM-1 P15INK4B基因甲基化状态的影响。方法对数生长期的SKM-1细胞设4组,每组1×106个细胞,其中3组为DAC处理组,分别以1.5、3.0和6.0μmol/L DAC处理SKM-1细胞48 h,另1组未加DAC的SKM-1细胞培养48 h作为对照组。甲基化特异性PCR(MSP)检测各组细胞P15INK4B基因甲基化情况,实时荧光RT-PCR相对定量法检测P15INK4B基因mRNA表达情况,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)法检测细胞增殖抑制情况,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡情况。结果 1)对照组SKM-1细胞的P15INK4B基因完全甲基化,3个DAC处理组的甲基化条带逐渐变浅,非甲基化条带出现并逐步加深;2)P15INK4B基因mRNA表达水平:对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为1.00±0.12与0.91±0.13、0.51±0.06、0.43±0.04(P<0.05),3个DAC处理组之间差异甚微(P>0.05);3)CFSE平均荧光强度(MFI):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为51.67±1.61与55.33±2.28、56.33±2.50、55.71±2.87,仅3.0μmol/L组较对照组变化较明显(P<0.05),而各DAC处理组之间变化差异很小(P>0.05);4)G1期细胞比例(%):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为55.78±3.61与48.12±2.93、51.69±1.60、46.71±1.54,S期细胞比例(%):4个组分别为44.22±3.61与51.88±2.93、48.31±1.60、53.29±1.54,其中1.5、6.0μmol/L组较对照组变化较明显(P<0.05),而DAC各处理组中,6.0与3.0μmol/L组之间具明显差异(P<0.05);5)早期凋亡率(%):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为2.91±0.26与7.77±0.22、12.45±0.28、13.86±0.27(P<0.05),DAC各处理组没有明显变化(P<0.05)。结论 DAC能逆转SKM-1细胞的P15INK4B基因完全甲基化状态,在一定程度上抑制SKM-1细胞的增殖,使细胞分化阻滞在S期,同时促进细胞凋亡,并随DAC浓度的增加而增强;尚未发现DAC逆转P15INK4B基因甲基化状态的同时使沉默的P15INK4B基因mRNA重新表达。
任立敏, 杜红玲, 朱强, 石永进, 陈华[8]2002年在《体外试验诱导白血病细胞p15~(INK4B)基因重新表达》文中指出目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂 5 氮杂 2′ 脱氧胞嘧啶 (CdR)与组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丁酸钠 (SB)联合诱导白血病细胞p1 5INK4B基因重新表达的可能性。方法 采用急性髓系白血病细胞系KG1a和 2例原代培养白血病细胞为研究对象 ;限制性内切酶联合PCR技术检测p1 5INK4B基因启动子区甲基化状态 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测p1 5INK4BmRNA的表达 ;Western免疫印迹法检测p1 5INK4B蛋白的表达。结果 受检细胞p1 5INK4B基因启动子区呈高甲基化状态 ,mRNA及蛋白表达完全或部分缺失 ;CdR和SB可单独诱导p1 5INK4B mRNA及蛋白表达 ,且有剂量依赖性 ;低浓度CdR(0 5 μmol/L)联合SB(0 5mmol/L)显着诱导p1 5INK4B 表达 ,其作用高于单用高浓度CdR(1 μmol/L) 或高浓度SB(1mmol/L)。结论 CdR和SB可诱导甲基化失活的白血病细胞p1 5INK4B基因重新表达 ,二者有明显的协同作用
参考文献：
[1]. 骨髓增生异常综合征P15~(INK4B)基因甲基化及药物去甲基化作用[J]. 叶雪石, 刘霆, 崔旭, 孟文彤, 席亚明. 四川大学学报(医学版). 2007
[2]. 骨髓增生异常综合征P15~(INK4B)基因甲基化及药物去甲基化作用[C]. 叶雪石, 刘霆, 孟文彤, 崔旭. 中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编. 2004
[3]. 骨髓增生异常综合征P15～（INK4B）基因甲基化及药物去甲基化作用的研究[D]. 叶雪石. 四川大学. 2004
[4]. 尿多酸肽对高危组骨髓增生异常综合征细胞株p15~(INK4B)基因的去甲基化作用[J]. 王晓丹, 刘科宇, 卢润章, 韩冰虹, 展昭民. 黑龙江医学. 2007
[5]. P15~(INK4B)基因甲基化与骨髓增生异常综合征[J]. 叶雪石, 刘霆. 国外医学.输血及血液学分册. 2004
[6]. 亚砷酸诱导人食管癌细胞株EC109细胞p15~(INK4B)基因的表达[J]. 张学彦, 刘铁夫, 刘伟, 崔希威. 世界华人消化杂志. 2006
[7]. DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨对SKM-1细胞P15~(INK4B)基因甲基化状态的影响[J]. 丁倩倩, 陈勤奋, 王小钦. 中国输血杂志. 2015
[8]. 体外试验诱导白血病细胞p15~(INK4B)基因重新表达[J]. 任立敏, 杜红玲, 朱强, 石永进, 陈华. 中华内科杂志. 2002