沙门菌多重耐药蛋白AcrB突变体的耐药性和耐药机制

论文摘要

[目的]主动外排系统AcrAB-TolC外排底物广泛,是沙门菌产生多重耐药的主要原因。本研究意在了解临床耐药沙门菌中外排蛋白AcrB的突变对细菌耐药性的作用和作用机制。[方法]检测临床沙门菌中的AcrB突变;通过定点突变获得AcrB突变体。采用微量肉汤稀释法测定突变体对多种药物的敏感性;利用圆二色谱与BN-PAGE实验检测AcrB突变体蛋白稳定性;通过同源建模获得AcrB和AcrAB蛋白模拟结构;并利用定点突变、药敏实验与荧光标记实验对突变位点的耐药机制进行研究。[结果]在临床沙门中检测到两种AcrB突变,AcrBM78I单突变和AcrBM78I/319L双突变。所有携带AcrB突变的菌株均对环丙沙星高水平耐药。AcrB突变体的药物敏感性结果显示,AcrB的M78I和P319L突变均可增强细菌对氟喹诺酮类药物、红霉素、新生霉素和胆盐的耐药性。圆二色谱结果显示,单突变对蛋白光谱影响较小,双突变与野生型相比差异较大,同时AcrB319L突变体的熔解温度比AcrBWT的降低了近1℃,而AcrB78I/319L双突变的熔解温度又有所恢复;BN-PAGE结果表明,AcrB78I和319L突变并没有改变AcrB三聚体的稳定性。荧光底物标记结果表明,78位氨基酸突变疏水性增强使得底物与外排通路中的某些氨基酸位点（如位点Q89和E673）结合增强。通过对AcrA中367位和368位氨基酸进行定点突变,并分析其药物敏感性和AcrB319位于这两个氨基酸的结构关系,发现AcrBP319L的突变导致细菌的耐药性增加,是因为氨基酸L比P具有更长和更灵活的侧链,这使得AcrB与AcrA的相互作用更灵敏,使AcrB的功能性蠕动更加灵活,从而具有更高效的底物外排能力。[结论]本研究揭示了临床沙门菌中外排蛋白AcrBM78I和P319L的突变对菌株多重耐药性的发展具有重要作用。

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文章来源

类型: 国内会议

作者: 杨玲,常满霞,林晓玲,蒋红霞

关键词: 突变,多重耐药

来源: 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会 2019-10-13

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技,医药卫生科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学,基础医学

单位: 华南农业大学兽医学院

分类号: S852.61;R378

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.034656

页码: 230

总页数: 1

文件大小: 76k

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标签：突变论文;  多重耐药论文;