口蹄疫病毒VP2蛋白特异性单克隆工程抗体的表达与活性鉴定

论文摘要

为了在牛上应用单个B细胞抗体技术制备口蹄疫病毒（FMDV）特异性单克隆抗体,本研究利用生物素标记O型FMDV 146S抗原,从免疫牛外周血单个核细胞（PBMCs）中分选单个抗原特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,将可变区基因插入含有牛Ig G抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建完整Ig G抗体的表达质粒。将表达质粒转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞（CHO-S）进行抗体表达与纯化。经病毒中和试验（VNT）、间接免疫荧光试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、Western-blot验证抗体的生物活性。结果显示,获得了4株FMDV特异性单克隆工程抗体,其中2株（A35、B57）可以中和O型FMDV;2株（A7、E32）IFA检测为阳性,其中E32可特异性结合O型和A型FMDV两种抗原,但没有病毒中和活性;ELISA结果显示,E32具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,E32可特异性结合衣壳蛋白VP2,说明在衣壳蛋白VP2存在型间保守的抗原位点,为通用型FMDV抗原检测方法的研究提供了材料。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王省,李坤,卢曾军,刘在新,李冬,包慧芳,李平花,孙普,白兴文,陈应理,付元芳,张婧,马雪青,曹轶梅

关键词: 口蹄疫病毒,单个细胞抗体技术,单克隆工程抗体,衣壳蛋白

来源: 中国兽医科学 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室

基金: 国家重点研发计划项目(2017YFD0501104,2017YFD0500902)

分类号: S852.4

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0108

页码: 939-946

总页数: 8

文件大小: 1422K

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