牛种布鲁氏菌2308强毒株dsbG基因缺失突变株的构建与初步评价

论文摘要

目的研究dsbG基因对布鲁氏菌2308毒力的影响。方法以布鲁氏菌2308亲本株为模板,通过同源重组和抗性替代的方法,构建布鲁氏菌dsbG基因缺失株（2308ΔdsbG）。将毒力株2308、疫苗株RB51、2308ΔdsbG缺失株在相同起始浓度下恒温振荡培养,观察其生长变化趋势;将各菌株按200∶1的感染复数侵染人胚胎滋养层细胞（HPT-8）,比较其在胞内的生存能力和粘附侵袭力。结果成功构建并获得了布鲁氏菌dsbG缺失株,且10代内未发现回复现象,遗传性较稳定。2308ΔdsbG缺失株与2308亲本株相比在体外具有相似的生长趋势,但其对宿主细胞的粘附侵袭和胞内的繁殖能力显著低于亲本株。结论 dsbG基因在布鲁氏菌的致病能力中发挥重要作用,dsbG基因的缺失显著降低了牛种布鲁氏菌2308的粘附侵袭和胞内生存能力。

论文目录

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和细胞

1.1.2 试剂

1.2 方法

1.2.1 引物设计与合成

1.2.2 布鲁氏菌dsbG突变株自杀载体的构建

1.2.3 布鲁氏菌dsbG突变株的构建

1.2.4 布鲁氏菌2308ΔdsbG突变株的遗传稳定性检测

1.2.5 布鲁氏菌亲本株和突变株生长曲线测定

1.2.6 布鲁氏菌侵染HPT-8细胞形态学观察

1.2.7 布鲁氏菌粘附侵袭实验

1.2.8 布鲁氏菌胞内繁殖实验

1.2.9 统计学分析

2 结果

2.1 布鲁氏菌dsbG基因突变株的构建

2.1.1 dsbG基因同源臂及卡那霉素抗性基因的扩增

2.1.2 dsbG基因同源臂和卡那霉素抗性基因的融合

2.1.3 布鲁氏菌dsbG突变株载体的构建及鉴定

2.2 布鲁氏菌2308ΔdsbG基因突变株的初步筛选及鉴定

2.3 布鲁氏菌2308ΔdsbG突变株的遗传稳定性检测

2.4 突变株和亲本株的生长曲线分析

2.5 胚胎滋养层细胞形态学观察

2.6 布鲁氏菌的粘附侵袭能力

2.7 布鲁氏菌的胞内繁殖能力

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨宁宁,徐明国,张欢,王奔奔,陈创夫,王震

关键词: 布鲁氏菌,基因,缺失株

来源: 中国人兽共患病学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学,感染性疾病及传染病

单位: 新疆石河子大学动物科技学院,新疆石河子大学生命科学学院,西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心

基金: 国家重点研发计划(No.2017YFD0500304),国家自然科学基金(No.31572491,No.3176010491),石河子大学高层次人才科研启动项目(No.RCSX2018B13)联合资助~~

分类号: S852.61;R516.7

页码: 370-375

总页数: 6

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