刘敏燕（四川省革命伤残军人医院610502）
【摘要】目的：探讨高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病肾病特点。方法：选择20只大鼠，行1w的适应性喂养后，按观察组和对照组各10只划分。对照组饮用自来水，给予常规饲料喂养；观察组饮用12%果糖水，给予高糖高脂饮食喂养。均自由进水进食，在行8w高糖高脂饮食后，不禁水禁食12h，观察组给予30mg/kgSTZ一次性腹腔注射，回顾相关资料。结果：实验4w后，观察组体重显著高于对照组（P<0.05）。第10w，观察组体重呈下降表现，对照组持续增加（P<0.05）。第10w，观察组甘油三酯、血总胆固醇、血压均明显增加（P<0.05）。24h尿蛋白定量增加也高于对照组（P<0.05）。葡萄糖灌胃后，两组血糖各时间点无差异，观察组血清胰岛素均高于对照组（P<0.05）。提示两组存在胰岛素抵抗。结论：采用高糖高脂饮食诱导2型糖尿病肾病，结合STZ可对2型糖尿病肾病模型成功制备，与糖尿病肾病典型特点符合，是理想的用于研究此类疾病的模型。
【关键词】高糖高脂饮食诱导2型糖尿病肾病特点
【中图分类号】R587.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）27-0075-02
近年来，社会经济的迅猛发展人显著提高了公众生活水平，饮食结构及生活方式随之有了较大的调整，糖尿病的患病率逐年升高，糖尿病肾病（DN）是其常见且严重的并发症，极易引发慢性肾功能衰竭，对公众的生存质量构成了严重影响[1]。对符合经济快捷特点的2型糖尿病肾病相关动物模型进行研制，在研究其发病机制中发挥着重要的作用。本次研究采取在给予高糖高脂饮食应用的基础上，加用小剂量链脲佐菌素（STZ）的方法，对与人2型糖尿病肾病发病过程类似的大鼠动物模型进行建立，以为研究糖尿病肾病提供参考依据。
1材料与方法
1.1一般材料主要试剂包括胆酸钠、胆固醇、STZ、胰岛素ELISA试剂盒、葡萄糖试剂盒。实验动物包括Wistar雄性SPF级大鼠20只，每笼4只，房笼标准化喂养，体重约180g，8周龄，每天行12h光照，自由饮食进食。
1.2方法
1.2.1分组及建立模型对大鼠行1w的适应性喂养后，按观察组和对照组各10只划分。对照组饮用自来水，给予常规饲料喂养；观察组饮用12%果糖水，给予包括66.5%常规饲料，10%猪油，1%胆酸钠，2.5%胆固醇，20%蔗糖的高糖高脂饮食喂养。均自由进水进食，在8w后，不禁水禁食12h，观察组给予30mg/kgSTZ一次性腹腔注射，对照组给予枸橼酸缓冲液（同等体积）注射，48h后，对足底静脉血进行采集，并对血糖行连续3d测量。伴有胰岛素抵抗，尿糖以（+++）-（++++）定性，血糖在16.7mmol/L及以上，即可纳入2型糖尿病组，其它退出模型组。观察组造模成功8只，对体重在实验中每2周行1次测量。
1.2.2实验室及病理诊断①血及尿标本：在STZ注射前即大鼠饲养满8w和STZ注射后即造模成功后，大鼠自由饮食，行12h禁食，给予无水乙醚实施吸入麻醉，对血糖取内眦静脉血进行检测，行500μl血液留取，将血清分离，胰岛素水平应用ELISA法检测，应用RT2100C型自动酶标仪。第10w，对两组大鼠24h尿蛋白定量进行检查，收集24h尿标本，取10ml，采用全自动生化仪测定。并吸入麻醉后，对心脏血开胸进行抽取，测定胆固醇、甘油三酯、尿素氮、血肌酐等。②葡萄糖耐量试验（OCTT）：注射STZ前，不禁水禁食12h，灌胃20%葡萄糖，分别在0min，30min，120min对眦静脉丛血标本进行留取，对血糖胰岛素和血清加以测定。③血压监测：实验第10w，吸入麻醉，分别对两组血压采用大鼠尾动脉血压计分别行3次测量，取平均值。④肾脏病理：切片，并常规行PAS染色和HE染色测定。
1.3统计学分析统计学软件采用SPSS13.0版，组间计量数据采用（x-±s）表示，计量资料行t检验，P<0.05差异有统计学意义。
2结果
2.1一般情况及生化项目比较实验4w后，观察组体重显著高于对照组（P<0.05）。第10w，观察组体重呈下降表现，对照组持续增加（P<0.05）。第10w，观察组甘油三酯、血总胆固醇、血压均明显增加（P<0.05）。24h尿蛋白定量增加也高于对照组（P<0.05）。见表1，表2
注：*P<0.05。
2.2胰岛素抵抗葡萄糖灌胃后，两组血糖各时间点无差异，观察组血清胰岛素均高于对照组（P<0.05）。提示两组存在胰岛素抵抗。见表3。
2.3肾组织病理正常大鼠肾小管及肾小球形态结构无异常表现。2型糖尿病肾病大鼠以肾小球基底膜及系膜基质轻度增生，肾小球体积增大等为主要表现。
3讨论
在2型糖尿病肾病实验研究中，国外在目前多选择有重要遗传作用的动物，如OLETF及ob/ob小鼠等，而人2型糖尿病肾病中遗传因素并未起到主要作用，且此材料价格昂贵，来源受限[2]。依据胰岛素分泌相对不足和胰岛素抵抗为主要的2型糖尿病的发病机制，脂胖为造成肾脏损害及2型糖尿病发生的高危因素等研究。故在应用高脂高糖饮食对胰岛素抵抗诱导产生的基础上，给予STZ应用，对胰岛细胞加以破坏，使胰岛素分泌不足，进而完成2型糖尿病与人发病过程类似的模型建立，此模型更易发展至糖尿病肾病，占有一定优势[3]。
评估胰岛素敏感性中，正常血糖高胰岛素钳夹技术虽为金标准，但动物死亡率高，费用昂贵，不易开展[4]。本次研究采用OGTT和HOMA-IR方法，在大鼠行2h高糖高脂饮食后对胰岛素抵抗情况进行评价，结果显示，观察组胰岛素抵抗现象较为明显，模型成功1w后，虽观察组大鼠胰岛素水平出现下降，但胰岛素抵抗仍存在，且血糖水平也与糖尿病诊断标准符合，故2型糖尿病造模较为成功。2型糖尿病以进行性肾功能损害、高血压、持续蛋白尿为主要临床表现，本次研究中，观察组甘油三酯、血总胆固醇、血压均明显增加（P<0.05）。24h尿蛋白定量增加也高于对照组（P<0.05）。且病理检查与糖尿病肾病组织病理学特征类似[5]。
综上，采用高糖高脂饮食诱导2型糖尿病肾病，结合STZ可对2型糖尿病肾病模型成功制备，与糖尿病肾病典型特点符合，是理想的用于研究此类疾病的模型。
参考文献
[1]高苹，贾汝汉.2型糖尿病肾病大鼠模型的建立.中国中西医结合肾病杂志，2007，8（6）：316-319.
[2]FreitasRR,LopesKL,CarillBA,etal.Sympatheticandrennin-an-giotensinsystemscontributetoincreasedbloodpreasutreinsucrose-fedrats[J].JAmJHypertens,2007,20(6):692.
[3]王英，江从海，王惠英，等.血脂异常对2型糖尿病肾病的影响[J].中国热带医学，2008，8（6）：981-982.
[4]邢淑丽，郑君芙，黄文政.单侧肾切除STZ诱导糖尿病肾病大鼠动物模型研究[J].中国中医急症，2006，15（6）：643-644.
[5]王康，李平，张浩军，等.2型糖尿病肾病中晚期病变大鼠模型的研究[J].中国中西医结合肾病杂志，2010，1.11（1）：14-15.
表3第8周末OGTT中不同时间点组间指标差异（x±s）
注：*P<0.05。