导读:本文包含了胞外病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,转染,免疫,受体,蛋白,细胞,恒河。
胞外病毒论文文献综述
马红玲,郭志勋[1]（2018）在《石斑鱼蛙虹彩病毒(GIV-R-SY1301株)胞外病毒关联蛋白再鉴定与注释》一文中研究指出石斑鱼蛙虹彩病毒(GIV-R)是石斑鱼产业中的关键风险因素,针对该病毒,目前国内外均无有效防控药物。病毒蛋白包括病毒基因编码蛋白和被整合进病毒粒子内的宿主细胞来源宿主蛋白,在病毒的侵染、复制、包装、出芽及对宿主致病方面扮演重要角色。此前的研究显示,新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)包含44个病毒编码结构蛋白,但未发掘宿主来源病毒蛋白。本研究对GIV-R国内叁亚分离株SY1301的胞外病毒蛋白进行研究,结果显示,共有54个病毒编码蛋白和101个细胞来源宿主蛋白得到鉴定。54个病毒蛋白中,15个病毒蛋白是首次获得鉴定。101宿主蛋白中包括了细胞骨架蛋白及其相关马达蛋白、分子伴侣蛋白、分子调节蛋白、细胞调控及外泌体形成等多组分、多来源和多功能等众多蛋白。上述研究提示,GIV-R胞外病毒蛋白的复杂程度超过原有预测,特别是众多宿主来源病毒关联蛋白的鉴定对于深入揭示病毒与宿主之间在致病与抗病等方面极其复杂的相互作用关系具有重要参考意义。(本文来源于《2018年中国水产学会学术年会论文摘要集》期刊2018-11-15）
乔佳明,张芝晴,张振勇,李少伟,夏宁邵[2]（2018）在《人CD4胞外区蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达纯化及性质鉴定》一文中研究指出目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析。方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(p Ac-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表达,采用镍离子亲和层析纯化。运用SDS-PAGE、Western blot、体积排阻色谱、ELISA、SPR法等分析纯化得到目的蛋白的理化性质和抗原性。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,监测小鼠免疫血清的抗体生成。结果:经纯化可获得纯度90%以上的人CD4蛋白,每升细胞培养液最终可获得11.2 mg的目的蛋白,且该人CD4胞外区蛋白具有良好的抗原性。小鼠血清监测结果显示人CD4蛋白能有效刺激机体产生免疫应答,显示其具有良好的免疫原性。结论:本研究通过杆状病毒-昆虫细胞系统进行高效表达,获得抗原性和免疫原性良好的人CD4胞外区蛋白,为HIV受体和感染的研究奠定基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2018年08期）
周晓雅,周祺,殷冬冬,唐井玉,邢雪[3]（2018）在《鸭坦布苏病毒感染对BHK-21细胞分泌胞外体的影响》一文中研究指出目的:探讨鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞对胞外体的影响,进一步研究鸭坦布苏病毒的致病机制。方法:利用鸭坦布苏病毒AH-F10株感染BHK-21细胞,并设置未感染病毒的对照组。用PEG法提取感染病毒的BHK-21细胞和对照组细胞上清中的胞外体,通过电镜观察、Western blot检测对胞外体进行鉴定,并对提取的两组胞外体进行质谱鉴定分析。结果:电镜观察到纯度高的内部色浅、边缘浓染的杯状囊泡,直径30~160 nm。感染组胞外体的平均粒径大小大于对照组胞外体的平均粒径大小。Western blot试验中,均检测出CD9、CD63分子。应用液相质谱法从胞外体中鉴定出106种蛋白,其中感染坦布苏病毒组共检测出84种蛋白,对照组49种蛋白,有27种共同蛋白分子。结论:鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞会影响细胞胞外体的分泌,影响胞外体粒径大小及其蛋白组成成分。本试验为进一步研究坦布苏病毒的感染和致病机制奠定了基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2018年02期）
刘喜红[4]（2016）在《HTLV-1病毒蛋白Tax对胞外HMGB1介导自噬的影响》一文中研究指出背景自噬是程序性细胞存活的一种形式,作为一种溶酶体的降解途径,细胞自噬主要降解损伤的细胞器和一些长寿蛋白,对于细胞的稳态起着非常重要的作用。HMGB1是一个经典的损伤相关模式分子,可以调节细胞的发育、分化、炎症和代谢等过程。我们实验室之前的研究表明,胞外的HMGB1可以促进HTLV-1感染的T细胞自噬。HTLV-1病毒编码的肿瘤蛋白Tax控制着多种重要的细胞信号途径,对细胞自噬也有一定的调节作用。但是,在胞外HMGB1介导的细胞自噬中,Tax蛋白的作用还不清楚。目的研究Tax蛋白对细胞自噬的调节作用,研究Tax蛋白在胞外HMGB1介导自噬中的作用;探讨Tax蛋白在胞外HMGB1介导自噬中作用的可能机制。方法1.细胞培养:Hela细胞在37℃、含有5%CO2和一定湿度的细胞培养箱中培养,所用培养基为含10%胎牛血清、2mML--谷氨酰胺、100μg/mL链霉素、100U/mL青霉素的RPMI 1640或DMEM培养基。每天观察细胞状态和密度,平均每2天更换新鲜培养基1次,3天传代1次。2.质粒的提取:LC3B-EGFP-mCherry荧光质粒菌液,pCMV-Neo、pCMV-Tax、pCMV-Tax-m47、pCMV-Tax-m22质粒菌液,涂板、挑单克隆、摇菌和保存菌种后,按天根无内毒素大提质粒试剂盒上的说明提取相关质粒,验证所提质粒的浓度和纯度。3.细胞转染:用lip 2000将LC3B-EGFP-mCherry、pCMV-Neo、pCMV-Tax、pCMV-Tax-m47和pCMV-Tax-m22质粒转染入Hela细胞,转染完成后6h更换预热的、含血清但不含双抗的完全培养基,48h后收集蛋白用Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、p62等的表达水平或用共聚焦显微镜观察自噬体形成的多少。4.药物处理:细胞转染后,使用终浓度为1μg/mL的重组人HMGB1(rhHMGB1)处理Hela细胞,用Western blot和共聚焦显微镜观察相关指标的变化情况。5.指标检测:分别提取rhHMGB1处理组和对照组的Hela细胞中的蛋白,用Western blot方法分析LC3、P62等蛋白的变化情况;转染入质粒并用rhHMGB1处理后,用共聚焦显微镜观察各组自噬体形成的多少。6.统计学分析:用SPSS19.0软件对数据进行处理,结果用均数±标准差(?x±s)的形式表示,t检验用于两组均数的比较,p<0.05表示差异有统计学意义。结果1.双荧光素酶报告基因检测结果显示真核表达质粒pCMV-Tax和pCMV-Tax-m47表达产物的NF-?B活性明显高于pCMV-Neo和pCMV-Tax-m22表达产物的NF-?B活性。2.Western blot结果显示,将Hela细胞中转入pCMV-Tax或pCMV-Tax-m47质粒后,与对照组相比,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值明显升高。而转入pCMV-Tax-m22质粒后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值没有明显变化。3.Western blot结果显示,当质粒pCMV-Tax或pCMV-Tax-m47转染入Hela细胞并用rhHMGB1处理后,相较于单用rhHMGB1处理,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值变化更明显。4.共聚焦结果显示:Hela细胞用rhHMGB1处理或转染入pCMV-Tax和pCMV-Tax-m47质粒后,自噬体明显增多且部分聚集成团块状。两因素共同存在时,自噬体的形成更多。5.共聚焦结果显示:将真核表达质粒pCMV-Tax和LC3B-EGFP-mCherry共同转染入Hela细胞再用rhHMGB1处理后,相对于pCMV-Neo对照组,实验组仅可以看到黄色自噬体,对照组可以看到黄色自噬体和红色自噬体。结论HTLV-1病毒蛋白Tax的表达可以促进胞外HMGB1对自噬的调节作用,这种作用可能是通过NF-?B信号通路来实现的。(本文来源于《新乡医学院》期刊2016-04-01）
贾俊杰,龚文杰,蒋大良,涂长春[5]（2015）在《信号肽调节猪瘟病毒E~(rns)蛋白、糖基化修饰和胞外分泌》一文中研究指出猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的以免疫抑制、高死亡率为主要特征的急性热性传染病,每年给养猪业带来巨大经济损失。CSFV囊膜蛋白E~(rns)是一个高度糖基化的病毒结构蛋白,含有7个潜在的N-糖基化位点,具有RNase活性,能水解双链RNA,阻止其诱导产生IFN-β。E~(rns)蛋白还可以分泌到细胞培养基中,抑制E~(rns)蛋白的糖基化并不影响其RNase活性,但是会阻断E~(rns)蛋白分泌到细胞外。在哺乳动物细胞中分泌蛋白的氨基端都有一段15-35个氨基酸的疏水性肽片段,其作用是引导后续蛋白质多肽链进入内质网腔内。在CSFV核心蛋白Core的羧基端和E~(rns)蛋白之间存在一段20个氨基酸的信号肽序列,由于E~(rns)蛋白在CSFV感染和致病中发挥重要作用,实验对该信号肽在E~(rns)蛋白表达、糖基化修饰和胞外分泌中的作用进行了初步研究。首先克隆CSFV兔化弱毒疫苗株HCLV株E~(rns)蛋白基因至含EGFP基因的pEGFP-N1质粒,再将E~(rns)-EGFP基因克隆至有嘌呤霉素抗性基因的pIRES-puro3质粒中,重组质粒转染猪睾丸细胞系ST,构建了表达带有信号肽或去除信号肽的E~(rns)-EGFP融合蛋白和ΔE~(rns)-EGFP融合蛋白的细胞系PE-C-E~(rns)和PE-C-ΔE~(rns)。荧光显微镜观察发现,PE-C-E~(rns)细胞荧光分布于胞质,荧光强度大,在局部聚集;而PE-C-ΔE~(rns)细胞荧光分布于胞质,荧光强度微弱,分散于胞质中,结果表明信号肽调节E~(rns)-EGFP融合蛋白的表达。Western Blot检测发现,PE-C-E~(rns)细胞出现55KDa微弱蛋白条带(E~(rns)-EGFP融合蛋白)和72KDa极强蛋白条带(糖基化的Erns-EGFP融合蛋白),而PE-C-ΔE~(rns)细胞仅出现55KDa微弱的E~(rns)-EGFP融合蛋白条带。Imagej软件分析发现PE-C-E~(rns)细胞中糖基化的E~(rns)-EGFP融合蛋白表达量为PE-C-ΔE~(rns)细胞中非糖基化E~(rns)-EGFP融合蛋白的25倍,该结果进一步表明信号肽能促进E~(rns)-EGFP融合蛋白的表达并介导该蛋白的糖基化修饰。利用外泌小体分离试剂盒分别提取PE-C-E~(rns)和PE-C-ΔE~(rns)细胞释放至培养上清中的含有E~(rns)-EGFP融合蛋白的粒子,Western blot检测发现,PE-C-E~(rns)细胞释放的E~(rns)-EGFP融合蛋白为糖基化修饰的蛋白,除了72KDa的融合蛋白外,还有一个90KDa左右的高度糖基化融合蛋白,且主要以后者形式存在,而PE-C-ΔE~(rns)细胞表达的非糖基化E~(rns)-EGFP融合蛋白不能释放至培养上清中,结果表明信号肽介导的糖基化修饰决定了E~(rns)-EGFP融合蛋白的胞外释放。综上所述,CSFV E~(rns)蛋白信号肽正向调控该蛋白在细胞中的表达、糖基化修饰和胞外分泌,该研究发现有助于进一步解析E~(rns)蛋白的生物学活性和表达调控机制,为研发抗CSFV化学药物和生物制品提供一定理论依据。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集》期刊2015-09-03）
王帅帅[6]（2015）在《Marc-145细胞中猪繁殖与呼吸综合症病毒粒子与胞外体的分离与鉴定》一文中研究指出胞外体(Exosome)是真核细胞分泌的脂质双层膜性小囊泡,主要功能是介导细胞间的通讯,其形成和特点具有细胞特异性。Exosome在病毒感染中的作用被称为病毒感染的Exosome途径。PRRSV粒子和Exosome的浮力密度相同、尺寸大小相近,传统的分离方法不能达到分离目的。本研究旨在：建立Exosome研究的Marc-145细胞培养模式,观察细胞形态;收集细胞上清液,提取总Exosome,电镜负染色法和Western blot鉴定;设计碘克沙醇速率区带离心分离Exosome,采用Western b lot鉴定其分布区间；建立Exosome研究的PRRSV感染模型,IFA观察结果；收集上清液,粗提取总Exosome,免疫磁珠捕获技术分离纯化Exosome与PRRSV粒子,Western blot分析纯化结果。实现在体外培养的Marc-145细胞中PRRSV粒子与Exosome的分离。结果显示：细胞形态观察显示消耗血清胞外体培养的Marc-145细胞形态饱满,折光率强,与无消耗胎牛血清胞外体培养的细胞相比无明显差别,提示该模式适合后续研究；电镜负染色法结果发现Marc-145产生的胞外体符合其一般特性,尺寸为40-1 OOnm,形态呈圆形或椭圆形；Western blot结果显示存在Exosome标志蛋白CD63、Alix、Tsg-101及P-actin,不存在非Exosome标记蛋白EEA1、GRP94、Cytochrome c,表明得到较纯净Exosome;梯度样品通过VVestern blot分析标志蛋白CD63,得到Exosome分布于3-12区带；IF结果提示Exosone研究的PRRSV感染模型建立成功；免疫磁珠捕获技术结合Western blot实验结果分析显示,同型对照磁珠系统不存在Exosome表面标记蛋白Tsg-101,提示成功纯化Exosome。(本文来源于《山西农业大学》期刊2015-06-01）
李伟[7]（2015）在《重组腺病毒介导恒河猴PD-L1Ig和CD40L胞外区基因在恒河猴未成熟树突状细胞中的表达和鉴定》一文中研究指出[目的]构建和鉴定恒河猴PD-L1Ig和CD40L胞外区基因重组腺病毒载体。鉴定PD-L1Ig和CD40L胞外区基因重组腺病毒载体在恒河猴未成熟树突状细胞(immature dendritic cell, imDC)中的表达。[方法]1.恒河猴PD-L1Ig和CD40L胞外区基因的重组腺病毒载体的构建、鉴定和包装。查询GeneBank中恒河猴PD-L1和IgGlFc基因序列并基因合成PD-L1Ig目的基因序列,然后PCR扩增PD-L11g目的基因。将PD-L1Ig基因双酶切产物与线性化的GV282载体连接,然后转化感受态大肠杆菌、氨苄霉素(Amp)筛选转化组菌落、PCR鉴定阳性转化子得到重组质粒载体pCMV-3FLAG-IRES-EGFP-PD-L1Ig并对其测序。将pGEM-T-efCD40L质粒PCR后的双酶切产物与线性化重组质粒载体pCMV-3FLAG-IRES-EGFP-PD-L1Ig连接,通过转化感受态大肠杆菌、氨苄霉素(Amp)筛选转化组菌落、PCR鉴定阳性转化子重组穿梭载体pShuttleCMV-efCD40L-3FLAG-IRES-EGFP-PD-L1Ig并对其测序。重组穿梭载体转染293T细胞,并Western Blot鉴定目的蛋白的表达。应用腺病毒AdMax包装系统法将HEK293细胞和重组载体包装成重组腺病毒,并用终点稀释法检测重组腺病毒滴度。2.分离培养恒河猴imDC,重组腺病毒转染imDC, Western Blot鉴定PD-L1Ig和CD40L胞外区基因在恒河猴imDC的表达。用猴淋巴细胞分离液提取恒河猴骨髓血中的单个核细胞,免疫磁珠法分选单个核细胞中的CD34+阳性细胞,应用细胞因子GM-CSF、IL-4诱导培养其分化为imDC。确定重组腺病毒转染imDC的最佳转染MOI值。转染48小时后提取蛋白并通过Western Blot分别鉴定PD-L1Ig和CD40L基因在imDC中蛋白的表达。[结果]重组质粒载体pCMV-3FLAG-IRES-EGFP-PD-L1Ig序列测序结果正确。重组穿梭载体pShuttleCMV-efCD40L-3FLAG-IRES-EGFP-PD-L1Ig序列测序结果正确。重组穿梭载体转染293T细胞后Western Blot检测目的融合蛋白,23kD处出现特异性条带。重组腺病毒滴度为1×10-11 PFU/ml。重组腺病毒转染恒河猴imDC, Western Blot检测PD-L1Ig,33kD处出现特异性条带,Western Blot检测CD40L胞外区,可见29kD处出现特异性条带。[结论]成功构建pCMV-3FLAG-IRES-EGFP-PD-L1Ig重组质粒载体。成功构建重组穿梭载体pShuttleCMV-efCD40L-3FLAG-IRES-EGFP-PD-L1Ig。应用腺病毒AdMax包装系统法成功获得高滴度重组腺病毒。PD-L1Ig和CD40L胞外段基因可以在恒河猴imDC中稳定的表达。[展望]重组腺病毒成功转染恒河猴imDC且稳定表达,为进一步研究在进行恒河猴肝移植体内实验中PD-L1Ig和CD40L胞外区基因诱导肝移植免疫耐受提供了理论和实验基础。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2015-05-01）
郭佳,尹衍新,蒋明,于丽华,蒋韵[8]（2015）在《人C-Met胞外区慢病毒穿梭载体构建及在293T细胞中的表达》一文中研究指出本研究构建含人肝细胞生长因子受体(C-Met)胞外区基因的慢病毒表达载体,并将其转染293T细胞,真核表达并纯化获得人C-Met胞外段蛋白。采用RT-PCR扩增人C-Met胞外区(ED)基因,构建慢病毒表达载体p RRL-CMV-ED,磷酸钙法转染293T细胞,RT-PCR及Western blot法检测ED基因在293T细胞中mRNA的转录和蛋白表达。PCR扩增及测序结果表明成功构建了p RRL-CMV-ED慢病毒表达载体,PCR扩增的目的基因大小为2 700bp左右;转染p RRL-CMV-ED的293T细胞上清经镍柱亲和纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在105kD处有明显蛋白条带;Western及ELISA结果显示,纯化蛋白为C-Met胞外区蛋白且能与肝细胞生长因子(HGF)特异性结合。本研究结果可能为制备C-Met单克隆抗体以及筛选阻断HGF/C-Met信号通路的中和抗体奠定基础。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2015年02期）
闫艳[9]（2015）在《胞外ADP在病毒感染中的功能和机制研究》一文中研究指出近年来,不断爆发的禽流感、SARS、埃博拉等恶性病毒感染给各国人民带来了恐慌,也给现代医疗体系带来了巨大的挑战,如何预防、控制病毒性疾病的传播成为我们迫切需要解决的重大科学问题。而深入开展病毒对宿主的感染途径以及机体的抗病毒机制研究是解决这个问题的关键。众所周知,干扰素是宿主抵抗病毒感染过程中最重要的效应分子,它通过诱导下游300多种干扰素诱导基因(Interferon stimulated gene, ISGs)的表达来抵抗病毒的感染。本课题首先利用重组人IFN-a 2a刺激人外周血单核细胞,并采用Affymetrix公司的GeneChip(?) Human Transcriptome Array 2.0 (HTA2.0)对245,000个编码转录本进行系统筛查,发现嘌呤受体家族重要成员P2Y12和P2Y13的表达显着提高,呈现出典型的干扰素诱导基因的特征。随后我们在病毒感染后的细胞中也进一步明确P2Y13在病毒感染过程中表达上调。这提示我们嘌呤受体P2Y12和P2Y13在病毒感染过程中可能具有重要作用。嘌呤受体是一类以胞外核苷酸为特异性配体的细胞膜受体分子,近年来发现其在神经、心血管以及免疫功能中都发挥重要作用。有趣的是P2Y12和P2Y13虽然是不同的嘌呤受体,但是它们的配体却都是ADP。为此我们对病毒感染过程中胞外ADP的释放进行了检测,结果显示随着病毒的感染,胞外ADP的释放明显增多。这一特征进一步将我们的研究目标指向了胞外ADP及其受体P2Y12和P2Y13。因此我们分别在病毒感染的不同阶段对ADP及其受体的抗病毒功能进行了系统评价。首先,利用荧光定量PCR对病毒的数量进行检测,结果ADP不会显着影响VSV的入侵过程。但是,如果我们在病毒后期复制过程中也保持ADP的刺激,ADP处理后的细胞中VSV的数目就会明显降低。这提示我们ADP的抗病毒作用可能主要集中在病毒感染的中后期,而这种抑制作用同样也在NDV、HSV、Lentivirus等不同病毒的感染过程中发现。进而我们在VSV感染的小鼠动物模型中也发现了ADP的重要抗病毒功能。为进一步明确ADP的抗病毒机制,我们首先对其作用受体进行筛选。目前已知ADP的受体有叁个P2Y1, P2Yi2和P2Y13。其中P2Y1主要激活PLC-β,而P2Y12和P2Y13主要抑制cAMP的合成。因此我们首先通过Forskolin激活腺苷酸环化酶,从而提高胞内cAMP含量以及U73122抑制PLC-β来阻断不同嘌呤受体的信号通路,然后再用VSV对细胞感染。结果表明：Forskolin能够显着抑制ADP的抗病毒功能,而U73122却没有明显作用。这提示我们ADP的抗病毒功能主要是通过P2Y12和P2Y13激活后抑制cAMP信号通路来完成的。同时我们利用CRISPRs的技术分别构建了P2Y1、P2Y12、P2Y13敲除小鼠。当野生型小鼠BMDM(骨髓来源诱导巨噬细胞)以及P2Yi、P2Yi2、P2Yi3敲除小鼠BMDM同时感染相同剂量VSV病毒时,只有P2Y13敲除小鼠BMDM相对于野生型小鼠BMDM感染病毒明显增加。因此,P2Y13在ADP抗病毒功能中是一个重要的受体。并且,在P2Y12敲除小鼠中P2Y13表达上调,其抗病毒功能也相对野生型小鼠也更加明显。因此,我们认为P2Y13是ADP抗病毒功能的主要受体。细胞内第二信使cAMP在调控细胞生理功能中发挥了十分重要的作用,但关于其在病毒感染中的功能却较少有报道,因此ADP如何通过cAMP来调控抗病毒功能成为我们接下来研究的重点。我们通过免疫印迹实验发现：病毒感染细胞过程中cAMP以及Epac1基因表达明显上调,并且ESI09(Epac1的抑制剂)能够明显抑制病毒核酸的复制。这提示我们ADP极有可能是通过与P2Y13的结合来抑制病毒诱导的cAMP/Epac1表达,从而阻止病毒在胞内的复制。综上所述,病毒感染过程中伴随着ADP的大量释放以及其受体P2Y13的表达上调,而这些释放出来的ADP通过与细胞表面的P2Y13受体结合,进而抑制胞内cAMP以及Epacl相关信号通路,最终达到抑制病毒复制的作用。我们的研究从胞外危险信号释放以及嘌呤受体激活的角度对机体的抗病毒机制进行了深入研究,明确了胞外ADP及其受体在病毒感染中的重要调控作用,为病毒性疾病的预防和相关药物的开发奠定了理论基础。(本文来源于《华东师范大学》期刊2015-04-01）
伊兴旭,陈敬贤,甘霖,王明丽[10]（2015）在《水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外域基因的真核细胞稳定表达及其免疫反应性的初步研究》一文中研究指出目的真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(g E)的胞外域基因,应用g E抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV g E胞外域基因的真核表达质粒p CDNA3.1-g E,测序后脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选出稳定表达VZV g E的细胞株。采用RT-PCR法检测VZV g E的mRNA,Western blot和间接免疫荧光法检测g E的免疫反应性,表达产物经Ni2+-NTA柱纯化后包被ELISA板,对127份0~10岁正常儿童血清中VZV-Ig G抗体水平进行检测。结果成功筛选出能够稳定表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,RT-PCR检测到g E的mRNA,经Western blot和间接免疫荧光鉴定,g E具有明显的免疫反应性,COS-7细胞株和其培养上清液中均有g E融合蛋白,表达量约为0.632 mg/ml,纯度约为90%。ELISA实验检测了127份0~10岁儿童血清中VZV-Ig G抗体,总阳性率为81.89%,特异度和灵敏度分别为93.75%和88.24%。结论本实验获得稳定高效表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,建立的ELISA血清学检测方法有助于VZV感染的流行病学研究和对易感人群VZV感染的诊断和预防。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2015年03期）
胞外病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析。方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(p Ac-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表达,采用镍离子亲和层析纯化。运用SDS-PAGE、Western blot、体积排阻色谱、ELISA、SPR法等分析纯化得到目的蛋白的理化性质和抗原性。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,监测小鼠免疫血清的抗体生成。结果:经纯化可获得纯度90%以上的人CD4蛋白,每升细胞培养液最终可获得11.2 mg的目的蛋白,且该人CD4胞外区蛋白具有良好的抗原性。小鼠血清监测结果显示人CD4蛋白能有效刺激机体产生免疫应答,显示其具有良好的免疫原性。结论:本研究通过杆状病毒-昆虫细胞系统进行高效表达,获得抗原性和免疫原性良好的人CD4胞外区蛋白,为HIV受体和感染的研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胞外病毒论文参考文献
[1].马红玲,郭志勋.石斑鱼蛙虹彩病毒(GIV-R-SY1301株)胞外病毒关联蛋白再鉴定与注释[C].2018年中国水产学会学术年会论文摘要集.2018
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[3].周晓雅,周祺,殷冬冬,唐井玉,邢雪.鸭坦布苏病毒感染对BHK-21细胞分泌胞外体的影响[J].中国免疫学杂志.2018
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[5].贾俊杰,龚文杰,蒋大良,涂长春.信号肽调节猪瘟病毒E~(rns)蛋白、糖基化修饰和胞外分泌[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集.2015
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[9].闫艳.胞外ADP在病毒感染中的功能和机制研究[D].华东师范大学.2015
[10].伊兴旭,陈敬贤,甘霖,王明丽.水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外域基因的真核细胞稳定表达及其免疫反应性的初步研究[J].安徽医科大学学报.2015
论文知识图
