导读:本文包含了缺血复灌论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:程序性,损伤,脑缺血,心肌,受体,相互作用,肾脏。
缺血复灌论文文献综述
丁汉东,廖贵益,钟金彪,赵飞[1]（2018）在《低温环境复灌对兔肾缺血-再灌注损伤保护作用的实验研究》一文中研究指出目的探讨建立兔肾缺血低温环境、常温环境及高温环境再灌注损伤模型的新方法,并评价低温环境复灌对兔肾缺血-再灌注损伤(IRI)的影响。方法将60只健康新西兰兔随机分为5组:对照组(A组)、假手术组(B组)、低温环境复灌组(C组)、常温环境复灌组(D组)、高温环境复灌组(E组),每组12只。术后7 d内每日检测各组兔的血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;术后1 d检测各组兔肾组织内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;术后1 d采用苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化;术后1 d采用d UTP缺口末端标记(TUNEL)染色评价细胞凋亡。结果术后1 d,与A组和B组比较,C、D和E组兔的Scr和BUN水平均升高(均为P<0.01);与C组比较,D组和E组兔的Scr和BUN水平升高更明显(均为P<0.05)。术后7 d内,C、D和E组兔的Scr和BUN水平呈下降趋势。与D组和E组比较,C组兔的Scr和BUN水平较低(均为P<0.05)。与A组和B组比较,C、D和E组的MDA含量均升高,SOD活性均降低(均为P<0.01);与C组比较,D组和E组的MDA含量升高更明显,SOD活性更低(均为P<0.01)。术后1 d肾组织病理学检查示A组和B组肾组织形态结构正常,D组和E组损伤表现明显,与D、E组比较,C组损伤较轻。TUNEL染色结果显示,D组和E组肾小管上皮细胞阳性细胞明显增多,管腔内也可见到阳性细胞,C组阳性细胞数量较D组和E组明显减少。结论冰泥覆盖肾脏、37℃生理盐水及40℃生理盐水连续滴加肾脏可建立不同温度环境复灌模型。低温环境复灌对肾IRI具有保护作用。(本文来源于《器官移植》期刊2018年05期）
丁汉东[2]（2018）在《低温环境复灌对兔肾缺血再灌注损伤保护作用的动物实验研究》一文中研究指出背景:随着肾脏终末期疾病患病率的不断增多,导致患者的生活质量和寿命大大降低,肾脏移植已经逐渐成为治疗慢性肾功能衰竭最理想的方法,器官来源短缺是当前面临的主要问题。在每年我国登记等待的肾移植的病人中,不到十分之一的患者能有机会接受肾脏移植。为了解决肾脏严重不足的问题,人们将扩大器官的来源,转移至公民逝世后自愿捐赠(china Donation after Cardiac Death CDCD)供肾,这给我国的器官移植带来了新的希望,在全国各地也逐步的推广开来。但CDCD器官相对于亲属供肾移植,面临着一个不可避免的问题,大部分供肾存在热和冷缺血时间较长问题。肾脏移植术后肾功能延迟恢复及原发性肾失功的概率显着增加,此外供者本身的疾病也损害供肾的功能,受者肾脏的长期存活率均因为以上种种原因而明显下降。但是缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)导致的肾功能下降最严重,不仅可诱发和加重移植肾的功能延迟恢复(delayed graft function,DGF),还与慢性肾脏纤维化和急性排斥反应(acute rejection,AR)相关。因此为了充分利用CDCD器官和改善肾脏移植预后,减轻CDCD器官IRI的发生是当前亟待解决的问题。目的:对以往的冷缺血模型进行改进,建立兔肾冷缺血后,在低温环境下、常温环境下和高温环境下再恢复血流灌注的动物模型的新方法,观察叁组不同温度环境下复灌血流,对兔肾缺血再灌注损伤的影响,从而深入研究导致肾缺血再灌注损伤的发病机制。方法:健康新西兰兔60只,随机分为5组(n=12):对照组(以下用A组表示),假手术组(B组),低温环境下复灌组(C组),常温环境下复灌组(D组),高温环境下复灌组(E组)。手术后从第1-7天,每天检测五组兔血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的值;术后第1天、7天分别取等量肾组织,将其匀浆后检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,HE染色检验五组兔子肾脏组织形态及炎症变化。TUNEL染色评价细胞凋亡。结果术后第1天,检测发现C组、D组和E组血淸Cr、BUN和肾MDA,与A组比较,有明显的增高(P<0.05),肾SOD明显降低(P<0.05);与D、E组比较,C组血淸Cr、BUN和肾MDA明显降低(P<0.05),肾SOD显着升高(P<0.05);观察术后第1天和第7天肾病理切片,发现A和B组肾脏组织形态结构是正常的,D和E组有较明显的损伤,与D、E组比较,C组损伤相对较轻(P<0.05)。TUNEL染色表明D和E组肾小管上皮细胞凋亡增加,管腔内有大量凋亡细胞。C组凋亡细胞较D组和E组凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论冰泥覆盖肾脏、37℃0.9%NS及40℃0.9%NS热水连续滴加肾脏可建立叁组不同温度环境复灌模型,低温环境下再复灌,对肾缺血再损灌注伤有保护作用。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-03-01）
郭建丽,王星[3]（2017）在《枸橼酸预处理对大鼠心肌缺血复灌后SOD的影响》一文中研究指出目的:观察枸橼酸预处理对大鼠心肌缺血复灌后超氧化物歧化酶(SOD)的影响。方法:建立大鼠在体缺血复灌模型,健康成年雄性SD大鼠24只,采用随机数字表法分为叁组:假手术组(只穿线,不结扎;Sham组)、缺血再灌注组(缺血30分钟,再灌注120分钟;I/R组),以及枸橼酸预处理组(P组)。于复灌120分钟末,采用western blot检测复灌120分钟末心肌组织中SOD的表达。结果:Sham组与I/R组的SOD均为(0.85±0.08)、(0.78±0.04),与Sham组相比,I/R组的SOD活性降低;与I/R组相比,给药组0.01M组(1.20±0.12)、0.05M组(1.30±0.12)、0.1M组(1.16±0.12)明显增加了SOD的释放量,与Sham组与I/R组相比,差异显着(P<0.05),但无剂量依赖性;组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论:枸橼酸预处理后SOD的表达量都有明显升高,提示在缺血复灌时,枸橼酸干预可改善或提高体内清除自由基的能力,降低心肌细胞的损伤情况。(本文来源于《中外女性健康研究》期刊2017年23期）
徐阳,魏瑞理,汪敬业,罗本燕[4]（2016）在《RIP3与AIF相互作用在大鼠全脑缺血/复灌损伤中作用的机制研究》一文中研究指出目的:受体相互作用蛋白3(RIP3)已被证实是程序性坏死通路的开-关分子,我们前期实验表明,20分钟大鼠全脑缺血/复灌损伤(I/R)导致的海马CA1区神经元死亡的主要方式是程序性坏死,并且RIP3向细胞核内转位表达增加。在本研究中将进一步探索海马CA1区凋亡诱导因子(AIF)和RIP3蛋白的分布及表达变化情况,在缺血/复灌损伤诱导下,AIF和RIP3相互作用介导海马神经元死亡的机制,为研究应对缺血损伤的神经保护剂提供新靶点。材料与方法:取体重280-350g的成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,制作大鼠全脑缺血/复灌损伤模型。采用四血管法,电凝双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉缺血20分钟后恢复血流再灌注。分别在缺血前1小时侧脑室注射程序性坏死抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)和自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA),复灌后2天、3天、7天取脑、石蜡包埋,行HE染色计算海马CA1区神经元存活率。TUNEL染色,计数CA1区神经元阳性细胞率。免疫荧光双染,组合如下:RIP3分别和β-Tubulin-Ⅲ(神经元胞浆特异性标记)、AIF双染;Neun(神经元细胞标记)与caspase-8双染;caspase-8分别和Iba-1(小胶质细胞特异性标记物)、GFAP(星形胶质细胞特异性标记物)双染,观察相应的蛋白表达及空间分布。Western blot检测LC3-Ⅱ、MLKL、AIF的表达变化。以RIP3为沉淀蛋白做免疫沉淀,Western blot检测RIP3与AIF、RIP3与RIP1间的相互作用。结果:免疫荧光和免疫共沉淀研究发现caspase-8表达在GFAP阳性的星形胶质细胞和Iba-1阳性的小胶质细胞,但不在NeuN阳性神经元中表达。缺血/复灌损伤后海马神经元RIP3与AIF相互结合并在海马神经元细胞核内共定位。Western blot研究发现AIF和MLKL在缺血/复灌损伤后表达没有变化,但是LC3-Ⅱ表达增多。HE检测显示Nec-1和3-MA对神经元缺血/复灌损伤有保护作用。TUNEL染色提示二者可以减少神经元DNA的断裂。免疫组化和免疫共沉淀进一步提示Nec-1和3-MA可以阻止RIP3进入细胞核及与AIF在细胞核内共定位。结论:RIP3与AIF在细胞核内共定位并且相互作用是缺血/复灌损伤诱导的神经元程序性坏死的关键,且caspase-8不参与其中。Nec-1和3-MA通过抑制二者的结合减轻全脑缺血/复灌引起的神经元损伤。(本文来源于《华东六省一市第二十叁次神经病学学术会议暨2016年浙江省神经病学学术年会论文汇编》期刊2016-07-29）
杨莹莹[5]（2016）在《STVNa对缺血复灌H9c2心肌细胞线粒体保护作用及机制研究》一文中研究指出线粒体是细胞生长的重要调节者,是机体进行氧化磷酸化的主要场所。心肌缺血时,线粒体动态网络结构被打破,线粒体功能紊乱。因此,探索一种以线粒体为作用靶点的药物对于心脏功能的恢复来说尤为重要,对于心血管疾病的治疗也是一大突破。异甜菊醇是天然植物成分甜菊苷的酸性水解产物,将其改造成钠盐形式即异甜菊醇钠(Isoteviol sodium,STVNa),增加水溶性并提高生物利用度。大量研究表明,异甜菊醇具有抗高血糖、抗高血压、抗炎和抗肿瘤活性,同时对心肌缺血复灌损伤也有保护作用,但其作用机制仍不明确。本研究主要通过建立体外心肌细胞缺血复灌模型,探讨STVNa对心肌缺血复灌损伤线粒体的保护作用及其机制,主要内容如下:1、通过H9c2心肌细胞缺氧90 min复灌90 min来研究复灌给药对其保护作用,结果表明,与control组(0.982±0.007)相比,IR组(0.567±0.007)细胞活性下降50%左右,10μM STVNa处理组(0.627±0.013)能够显着提高IR损伤的细胞活性(P<0.05);进一步研究发现1μM、10μM、100μM STVNa还能恢复线粒体膜电位(MMP),MMP相对值由IR组34.7%±0.6%分别上升至51.6%±4.3%、62.9%±2.8%、80.4%±5.9%(P<0.05);减少复灌引起的活性氧(ROS)爆发,ROS相对值由IR组130.9%±2.4%分别下降至110.9%±2.0%、103.5%±3.1%、101.6%±0.8%(P<0.05);并对细胞凋亡有显着抑制作用,细胞凋亡率由IR组的45.7%±3.6%分别下降至34.0%±3.4%、25.8%±1.4%、21.3%±0.9%(P<0.05)。2、研究STVNa对线粒体分裂与融合的调控作用,结果表明,IR会引起线粒体异常分裂,线粒体片段化增加,而STVNa能够抑制这种现象;细胞免疫荧光和Western blot实验发现其与线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1有关,与control组(1.00±0.10、1.00±0.07)相比,IR组Drp1、Fis1蛋白表达水平(1.74±0.06、1.76±0.06)显着增加(P<0.05),10μM、100μM STVNa处理组分别降低Drp1蛋白表达水平至1.21±0.06、1.15±0.08(P<0.05),分别降低Fis1蛋白表达水平至1.47±0.05、1.25±0.04(P<0.05),从而对心肌缺血复灌损伤线粒体产生保护作用。结论:STVNa对心肌缺血复灌引起的线粒体损伤具有显着地保护作用,其具体作用机制可能与STVNa抑制线粒体分裂,从而减少细胞内活性氧,降低细胞凋亡率有关。(本文来源于《华南理工大学》期刊2016-05-20）
徐阳[6]（2015）在《受体相互作用蛋白3与溶酶体通透性改变在大鼠全脑缺血/复灌损伤中作用的机制研究》一文中研究指出研究背景：程序性细胞死亡(Programmed cell death, PCD)在生物生长发育过程和疾病的发展过程中起着重要的作用。基于形态学和生化改变的特征将PCD分为叁种类型：凋亡、自噬和程序性坏死。细胞凋亡是第一个发现的PCD,根据涉及的信号调控分子又可分为天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)依赖和caspase非依赖途径。大多数的caspase非依赖性细胞死亡途径作用于线粒体,细胞凋亡诱导因子(Apoptosis inducing factor, AIF)被认为是主要的效应分子。AIF从线粒体释放入细胞质,然后进入细胞核引起染色质浓缩和溶解。程序性坏死是一种caspase非依赖性PCD,显示出坏死的形态特征,如核固缩、细胞器肿胀,但是可以由许多分子控制。受体相互作用蛋白1 (Receptor-interacting protein, RIP 1)和受体相互作用蛋白3(RIP3)形成的复合物(necrosomes)是程序性坏死的关键启动因子。有研究指出DNA烷化剂诱导的程序性坏死中,AIF也起到重要作用。由此AIF可能是影响caspase非依赖性凋亡和程序性坏死的共同因素。我们课题组前期研究发现全脑缺血／复灌损伤诱导的大鼠海马CA1区神经元死亡特点符合程序性坏死而非传统的凋亡模式。RIP3是程序性坏死的关键调节因子,并且在大鼠全脑缺血／复灌损伤后,位移进入细胞核发挥引起细胞死亡的作用和。但是RIP3入核后引起神经元程序性坏死的机制,以及RIP3与AIF的关系尚不明确。此外我们还通过电镜观察到大鼠海马神经元程序性坏死进展过程中存在细胞器破裂、细胞膜与核膜消失、核固缩。溶酶体膜的完整性受到损坏,使溶酶体水解酶释放到细胞质中。早期的研究认为溶酶体酶的释放通常导致细胞非程序性坏死；然而近期的许多研究也提示,溶酶体酶的释放在程序性细胞死亡中也起着关键作用,这取决于溶酶体膜损伤的程度和释放的水解酶的量。溶酶体膜通透性(Lysosomal membrane permeability, LMP)改变,但是超微结构没有发生明显的变化,溶酶体酶向细胞质释放是有限的。根据课题组之前电镜观察的结果,我们认为程序性坏死的发生发展过程与溶酶体酶的释放存在关联,但缺乏进一步的研究。组织蛋白酶B (Cathepsin-B)是具有代表性的溶酶体水解酶,在生理和病理过程中具有重要的作用。严重的氧化应激可以诱导损伤溶酶体膜结构和Cathepsin-B的泄漏。CA074-me是Cathepsin-B的抑制剂,可以与Cathepsin-B形成复合物抑制Cathepsin-B的活性。CA074-me经侧脑室给药可以保护大鼠大脑中动脉闭塞损伤(Middle cerebral artery occlusion, MCAO),但是其在全脑缺血引起的程序性坏死中的作用,以及与溶酶体通透性的关系没有得到明确证实。研究目的：基于以上的研究背景,我们建立程序性坏死主导的大鼠全脑缺血／复灌损伤模型,试图解决以下问题：(1) 探索大鼠全脑缺血／复灌损伤后,可能与RIP3相互作用的分子,进一步揭示其在程序性坏死中的作用机制；(2)探索不同死亡信号通路的抑制剂预处理对海马神经元程序性坏死的作用；(3) 通过离体细胞及整体动物实验探讨溶酶体膜通透性对海马神经元程序性坏死的影响第一部分RIP3与AIF相互作用在大鼠海马神经元缺血性程序性坏死中的机制研究研究方法：取体重280-350g的成年雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠,制作大鼠全脑缺血／复灌损伤模型。采用四血管法,电凝双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉缺血20分钟后恢复血流再灌注。分别在缺血前1小时侧脑室注射程序性坏死抑制剂Necrostatin-1 (Nec-1)、自噬抑制剂3-Methyladenine (3-MA)和caspase-3抑制剂Ac-DMQD-CHO,复灌后2天、3天、7天取脑、石蜡包埋,行HE染色计算海马CA1区神经元存活率。TUNEL染色,计数CA1区神经元阳性细胞率。免疫荧光双染,组合如下RIP3分别和β-Tubulin-Ⅲ(神经元胞浆特异性标记)、AIF双染；Neun(神经元细胞标记)分别和激活型caspase-3、caspase-8双染；caspase-8分别和11)a-1(小胶质细胞特异性标记物)、GFAP(星形胶质细胞特异性标记物)双染。观察相应的蛋白表达及空间分布。Western blot检测LC3-Ⅱ、MLKL、AIF的表达变化。以RIP3为沉淀蛋白做免疫沉淀,Western blot检测RIP3与AIF、RIP3与RIP1间的相互作用。实验结果：免疫荧光和免疫共沉淀研究发现缺血／复灌损伤后海马神经元RIP3与AIF相互结合并在细胞核内共定位。Western blot研究发现AIF和MLKL在缺血／复灌损伤后表达没有变化,但是LC3-II表达增多。HE检测显示Nec-1和3-MA对神经元缺血／复灌损伤有保护作用。TUNEL染色提示二者可以减少神经元DNA的断裂。免疫组化和免疫共沉淀进一步提示Nec-1和3-MA可以阻止RIP3进入细胞核及与AIF在细胞核内共定位。结论：RIP3与AIF在细胞核内共定位并且相互作用是缺血/复灌损伤诱导的神经元程序性坏死的关键,Nec-1和3-MA通过抑制二者的结合减轻全脑缺血/复灌引起的神经元损伤。第二部分CA074-me在全脑缺血/复灌损伤诱导海马神经元程序性坏死中的作用及机制研究研究方法：在大鼠全脑缺血前1小时和复灌开始后1小时分别侧脑室注射CA074-me,复灌后7天、30天处死大鼠,取脑石蜡包埋,行HE染色计算海马CA1区神经元存活率。提取海马组织进行免疫荧光检查和Western blot检查,观察缺血/复灌后大鼠海马区Cathepsin-B、溶酶体相关膜蛋白-1 (Lysosomal associated membrane protein-1, LAMP-1)、RIP3和蛋白热休克蛋白70 (Heat shock protein 70, HSP70)的表达变化及CA074-me的干预作用。NAD+/NADH试剂盒检测复灌1天海马组织NAD+变化情况。离体培养新生大鼠海马原代神经元,氧糖剥夺/复氧复糖损伤(Oxygen-glucose deprivation, OGD)后,通过DND-153染色评价水解酶释放对溶酶体pH值及功能的影响,评价CA074-me对神经元溶酶体膜完整性的保护作用。实验结果：无论是缺血前还是复灌后1小时侧脑室注射CA074-me对神经元均有保护作用。免疫荧光检测发现缺血/复灌损伤后海马神经元Cathepsin-B和LAMP-1表达增多、形态不规则。CA074-me预处理不仅能抑制二者的变化,还可以抑制RIP3表达增多及向细胞核内转移。CA074-me能明显抑制缺血损伤后海马组织NAD+水平的下降、提高HSP70的表达。CA074-me还可以抑制OGD后神经元溶酶体膜通透性增加导致的pH值的变化。结论：全脑缺血／复灌损伤诱导的神经元程序性坏死与溶酶体通透性改变关系密切。CA074-me除了直接抑制Cathepsin-B的活性,还可以通过抑制RIP3核转移、增强HSP70的表达和维持能量平衡对溶酶体膜稳定性产生影响,起到保护神经元的作用。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-12-01）
刘金龙,王志华,顾珊珊,谭吉良,杨黄恬[7]（2015）在《不同浓度H_2O_2激活的损伤与保护通路的博弈决定了其在心肌缺血/复灌过程中的双重作用》一文中研究指出目的:再灌注初期活性氧的大量释放被认为是造成这一损伤的主要因素之一。然而,ROS也作为启动者介导了缺血预处理和后处理等措施对I/R损伤心肌的保护作用。如何界定ROS起损伤或保护作用的浓度界限目前尚无明确的研究结论。因此,本实验旨探讨ROS这种相互矛盾的双重作用及其潜在机制。方法:利用大鼠离体心脏全心缺血/复灌模型来探讨不同浓(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2015年10期）
徐阳,汪敬业,罗本燕[8]（2015）在《不同自噬抑制剂对大鼠全脑缺血复灌损伤海马CA1区神经元程序性坏死的作用研究》一文中研究指出目的我们前期研究发现大鼠全脑缺血复灌损伤诱导的海马CA1区神经元死亡呈现程序性坏死特点,本研究旨在探讨不同类型的自噬抑制剂,对全脑缺血损伤CA1区神经元程序性坏死的影响。方法将250g-300g雄性SD大鼠随机分为5组。分别为:假手术组、缺血/复灌模型组和3-甲基腺嘌呤组(本文来源于《中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（上）》期刊2015-09-18）
徐阳,罗本燕,汪敬业[9]（2015）在《CA074-me对大鼠全脑缺血复灌损伤海马CA1区神经元程序性死亡的作用研究》一文中研究指出目的:本研究旨在探讨CA074-me对大鼠全脑缺血/复灌海马CA1区神经元程序性坏死的影响。方法:将250g-300g雄性SD大鼠随机分为3组。分别为:假手术组(n=6)、缺血/复灌模型组(n=6)和CA074组(n=6)。采用四血管法制作全脑缺血复灌损伤模型组,双侧椎动脉电凝恢复24小时夹闭双侧颈总动脉,缺血20分钟后恢复血液灌注;假手术组除不夹闭双侧颈总动脉外其余操作同模型组;CA074-me组在缺血前1小时侧脑室注射CA074-me 1ug,其余操作同模型组。缺血/复灌模型组和CA074组在缺血/复灌第2天处死大鼠。1.制作受体相互作用蛋白3(RIP3)的免疫荧光染色切片。石蜡包埋、切片、免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察RIP3免疫荧光强度和分布形态,荧光强度用Image-J软件统计。2.通过Western-Blot的方法检测热休克蛋白HSP70的变化。结果:假手术组CA1区神经元RIP3荧光染色强度较弱,呈点状分布在细胞核周围,不与细胞核重迭。缺血复灌2天后荧光强度增加(P<0.01),穿梭到细胞核内呈现片状融合。CA074预处理组荧光强度较缺血组弱,并且抑制RIP3入核。Western-Blot检测提示缺血后HSP70表达增加,CA074-me预处理进一步增加HSP70表达。结论:CA074-me可以抑制大鼠全脑缺血复灌损伤后RIP3的表达及向细胞核内位移,增加HSP70的表达,对缺血再灌注损伤起保护作用。(本文来源于《2015年浙江省神经病学学术年会论文汇编》期刊2015-05-29）
曹丽娟[10]（2015）在《小鼠脑内TIGAR水平与缺血复灌损伤耐受的相关性研究》一文中研究指出目的:观察TIGAR在小鼠脑各区域的表达差异性、细胞定位以及在发育和成熟不同阶段小鼠脑皮层内表达的变化,比较TIGAR表达量与小鼠对脑缺血损伤耐受性的关系。方法:采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞再灌注(transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型和体外培养原代神经元缺糖缺氧/复糖复氧(oxygen glucose dripivation/reoxygenation,OGD/R)模型。在动物脑组织中,使用免疫荧光法和Western blot检测TIGAR表达含量的差异性。使用免疫电镜检测TIGAR在亚细胞内的定位变化。以脑梗死体积,行为学症状评分和存活率等指标比较TIGAR不同表达量和脑缺血损伤耐受性的关系。在培养原代神经元中,用Western Blot检测不同胎龄神经元在H2O2处理后TIGAR表达的变化;使用CCK-8检测TIGAR不同表达量的神经元对H2O2损伤的耐受性差异。用DHE探针标记检测神经元的ROS变化。运用NADPH/NADP+,GSH/GSSG和LD试剂盒检测脑皮层和神经元内NADPH,GSH和LD表达水平。Western Blot和免疫荧光法检测γ-H2A.X的含量变化,彗星实验进一步比较DNA损伤变化。Western Blot和免疫荧光法检测细胞色素C在不同年龄小鼠和不同胎龄神经元内的逸出变化,从而比较线粒体损伤变化。结果:TIGAR在小鼠各脑区均有表达,并且在嗅球,皮层及海马等脑区表达含量尤为显着。免疫荧光检测发现TIGAR在神经元和胶质细胞均有表达,但在神经元内表达量更高。免疫电镜检测发现,TIGAR在线粒体,内质网,胞浆,细胞核等亚细胞结构均有表达,而缺血复灌3 h后,TIGAR在线粒体以及内质网上的表达水平显着增多。在小鼠的整个发育过程中,TIGAR在胚胎期的表达含量显着高于其它时期,在整个胚胎发育阶段,表达量呈下降趋势,并在出生后下降至最低。在1-7天的新生鼠脑皮层内,TIGAR表达量逐渐回升。但在新生第7天后开始逐渐下降,在之后的发育过程中,TIGAR表达量逐渐下降,并在3 M后,TIGAR维持在较低水平。脑缺血复灌损伤后,TIGAR在发育不同时程动物体内调节具有差异性。1 M小鼠在脑缺血复灌后,TIGAR表达水平下降;2 M和3 M龄小鼠脑缺血复灌后,TIGAR表达上调,但在复灌3 h后,1 M,2 M和3 M小鼠TIGAR表达调节至相似水平,这可能与TIGAR在脑缺血复灌损伤中起到的保护作用机制有关。除此以外,在TTC染色脑缺血复灌后的小鼠脑片中,3 M小鼠比1 M小鼠具有更大的脑梗死面积。脑缺血复灌损伤后,3 M小鼠比1 M和2 M小鼠有更严重的神经行为学损伤和和更高的死亡率。同样地,在胚胎小鼠脑皮层培养的神经元中,TIGAR调节与在体实验结果一致。并且在OGD复灌24 h后,E 12胚胎神经元存活率高于E 16和E 20胚胎神经元。在使用NADPH给予治疗OGD复灌损伤后,E 12,E 16和E 20胚胎神经元的存活率都有所升高。在胚胎神经元中加入H2O2后,E 20胚胎神经元细胞内ROS含量显着高于E 12胚胎神经元。在动物和细胞缺血模型中,TIGAR通过抑制糖酵解,增加磷酸戊糖途径,从而增加细胞内NADPH,GSH水平,降低LD水平。在缺血复灌后,3 M小鼠(E 20胚胎神经元)比1 M小鼠(E 12原代神经元)DNA和线粒体损伤更严重。结论:TIGAR对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,且具有高表达量的青年小鼠和早期胚胎神经元对脑缺血有更强的耐受性,其作用机制可能与产生更多内源性抗氧化剂NADPH,降低神经元细胞内ROS含量,从而抑制神经细胞凋亡有关。外源性给予NADPH对胚胎神经元OGD诱导的损伤具有保护作用。(本文来源于《苏州大学》期刊2015-05-01）
缺血复灌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:随着肾脏终末期疾病患病率的不断增多,导致患者的生活质量和寿命大大降低,肾脏移植已经逐渐成为治疗慢性肾功能衰竭最理想的方法,器官来源短缺是当前面临的主要问题。在每年我国登记等待的肾移植的病人中,不到十分之一的患者能有机会接受肾脏移植。为了解决肾脏严重不足的问题,人们将扩大器官的来源,转移至公民逝世后自愿捐赠(china Donation after Cardiac Death CDCD)供肾,这给我国的器官移植带来了新的希望,在全国各地也逐步的推广开来。但CDCD器官相对于亲属供肾移植,面临着一个不可避免的问题,大部分供肾存在热和冷缺血时间较长问题。肾脏移植术后肾功能延迟恢复及原发性肾失功的概率显着增加,此外供者本身的疾病也损害供肾的功能,受者肾脏的长期存活率均因为以上种种原因而明显下降。但是缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)导致的肾功能下降最严重,不仅可诱发和加重移植肾的功能延迟恢复(delayed graft function,DGF),还与慢性肾脏纤维化和急性排斥反应(acute rejection,AR)相关。因此为了充分利用CDCD器官和改善肾脏移植预后,减轻CDCD器官IRI的发生是当前亟待解决的问题。目的:对以往的冷缺血模型进行改进,建立兔肾冷缺血后,在低温环境下、常温环境下和高温环境下再恢复血流灌注的动物模型的新方法,观察叁组不同温度环境下复灌血流,对兔肾缺血再灌注损伤的影响,从而深入研究导致肾缺血再灌注损伤的发病机制。方法:健康新西兰兔60只,随机分为5组(n=12):对照组(以下用A组表示),假手术组(B组),低温环境下复灌组(C组),常温环境下复灌组(D组),高温环境下复灌组(E组)。手术后从第1-7天,每天检测五组兔血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的值;术后第1天、7天分别取等量肾组织,将其匀浆后检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,HE染色检验五组兔子肾脏组织形态及炎症变化。TUNEL染色评价细胞凋亡。结果术后第1天,检测发现C组、D组和E组血淸Cr、BUN和肾MDA,与A组比较,有明显的增高(P<0.05),肾SOD明显降低(P<0.05);与D、E组比较,C组血淸Cr、BUN和肾MDA明显降低(P<0.05),肾SOD显着升高(P<0.05);观察术后第1天和第7天肾病理切片,发现A和B组肾脏组织形态结构是正常的,D和E组有较明显的损伤,与D、E组比较,C组损伤相对较轻(P<0.05)。TUNEL染色表明D和E组肾小管上皮细胞凋亡增加,管腔内有大量凋亡细胞。C组凋亡细胞较D组和E组凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论冰泥覆盖肾脏、37℃0.9%NS及40℃0.9%NS热水连续滴加肾脏可建立叁组不同温度环境复灌模型,低温环境下再复灌,对肾缺血再损灌注伤有保护作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
缺血复灌论文参考文献
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