金黄色葡萄球菌肠毒素SEK的纯化及DAS-ELISA检测方法的建立与应用

论文摘要

本研究目的为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK的双抗夹心酶联免疫吸附方法。将构建的原核表达载体pET-28a（+）-ΔNspSEK转化入BL 21（DE3）pLysS细胞中诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化获得重组SEK蛋白作为抗原。利用双抗夹心酶联免疫方法检测程序,确定抗SEK单克隆抗体及抗SEK多克隆血清的最佳稀释度,并使用该方法应用于检测SEK人工污染样品的加标回收率和茶多酚及乳酸链球菌素（Nisin）对7株sek阳性菌株的SEK蛋白分泌影响。结果表明,原核表达载体得到可溶性表达,重组SEK蛋白分子量约为27.7ku;建立的双抗夹心酶联免疫检测方法中,单克隆抗体最佳包被浓度为2.89μg/mL、抗血清的最佳稀释度为1:500,回归方程为y=0.2165x+0.1627,相关系数R2=0.9993,最低检测限为0.1μg/mL;检测SEK人工污染脱脂奶、LB肉汤和牛肉糜中的加标回收率高达97%以上;并且,采用建立的方法测得茶多酚和Nisin的添加浓度在其MIC及以下浓度时,茶多酚对7株sek阳性菌株蛋白分泌抑制效果更明显。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨丹茹,赵燕英,唐俊妮

关键词: 金黄色葡萄球菌肠毒素,原核表达,蛋白纯化,检测方法

来源: 现代食品科技 2019年03期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 西南民族大学生命科学与技术学院青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室

基金: 国家重点研发计划项目(2018YFD0500500),西南民族大学研究生创新项目(CX2018SZ20)

分类号: TS207.4

DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.3.034

页码: 225-233

总页数: 9

文件大小: 1578K

下载量: 205

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标签：金黄色葡萄球菌肠毒素论文;  原核表达论文;  蛋白纯化论文;  检测方法论文;