导读:本文包含了猪肾细胞系论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:PCV2,细胞,PK-15,蛋白
猪肾细胞系论文文献综述
刘捷,张旭亮,马畅,尤金炜,董敏[1]（2015）在《Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制》一文中研究指出引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失~([1,2])。一些病毒感染细胞后会引起细胞产生热休克反应(heat shock response,HSR),诱导一系列热休克蛋白(本文来源于《中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2015年学术年会论文集》期刊2015-09-18）
刘捷,张旭亮,马畅,尤金炜,董敏[2]（2015）在《Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制》一文中研究指出引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirustype 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒感染细胞后会引起细胞产生热休克反应(heat shock response,HSR),诱导一系列热休克蛋白表达,进而保证病毒基因组复制、病毒蛋白合成及子代病毒组装等。本研究拟通过Hsp90基因过表达和RNA干扰,明确其对PCV2复制的影响及其与PCV2Cap、Rep蛋白的相互作用关系。材料与方法采用Hsp90抑制剂处理细胞,观察其对PCV2在PK-15细胞中复制的影响;分别设计Hsp90过表达质粒和siRNA干扰片段,转染细胞后经定量检测,明确Hsp90在PCV2复制过程中的作用;通过激光共聚焦试验探究Hsp90与病毒Cap、Rep蛋白的细胞定位变化。结果与讨论前期通过iTRAQ定量蛋白组技术结合质谱分析,发现了PCV2感染PK-15细胞过程中,有一系列细胞蛋白表达量发生了显着变化,其中包括Hsp90、Hsp70和Hsp27等,提示这类蛋白可能参与了病毒的感染和复制。本研究首先采用Hsp90特异性抑制剂处理细胞,western blot和TCID_(50)检测发现PCV2在细胞中的复制滴度明显下降;同时定量PCR检测显示,特异性抑制剂并非影响病毒侵入细胞这一初始阶段。利用重组真核质粒在PK-15细胞中过量表达Hsp90,可以促进PCV2的复制,相反,使用特异性siRNA干扰细胞中内源性Hsp90,可以抑制PCV2的复制。激光共聚焦试验结果显示,与对照组相比,病毒感染组细胞内的Hsp90β蛋白会在核内呈颗粒状聚集。这些结果表明Hsp90这一伴侣蛋白在PCV2的复制过程中起了重要作用,本研究对阐明PCV2致病机理和研究新的抗病毒药物具有重要意义。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集》期刊2015-09-03）
黄钰[3]（2014）在《猪肾细胞过表达SelS细胞系的构建及其对OTA毒性的拮抗作用》一文中研究指出硒蛋白S(SelS)是一种潴留于内质网和细胞膜的硒蛋白,广泛分布于在生物机体内,如肝脏、肾脏、骨骼肌、脂肪、下丘脑等组织。相关研究显示,硒蛋白S可以保护细胞免于氧化损伤,具有调节细胞氧化还原平衡和抗氧化作用,参与炎症反应和免疫反应,并拮抗内质网应激及其诱导的细胞凋亡。赭曲霉毒素是一种由曲霉属真菌和青霉菌属真菌产出的毒素,其中我们生活关系最密切相关的是赭曲霉毒素A(OTA)。OTA广泛分布于农作物和农产品,并能在动物和人体中富集,造成健康危机。本研究主要通过引物设计,将酶切位点引入目的基因,构建真核载体pcDNA3.1-SelS;通过脂质体转染方法将重组子pcDNA3.1-SelS转染至猪肾细胞(PK15),筛选出稳定转染的细胞株,细胞分组情况:PK15+pcDNA3.1-SelS转染组、PK15+pcDNA3.1转染组、未转染的正常PK15细胞组;采用OTA损害细胞造模,观察不同细胞组对OTA毒性损伤的影响,初步探讨过表达硒蛋白S的细胞生物学功能。试验一:重组质粒pcDNA3.1-SelS的构建与鉴定本试验通过在Genbank搜索猪硒蛋白S的mRNA,设计引物,并通过PCR、连接T载体等方法,扩增出SelS目的基因片段;选择pcDNA3.1作为为真核载体,经DNASTAR分析载体基因的酶切位点,选择EcoRI酶和XhoI酶,将SelS 目的基因与pcDNA3.1连接,经菌落PCR鉴定、双酶切验证及测序结果分析。结果显示,成功构建出所需的真核载体,标记为pcDNA3.1-SelS,保存菌种。试验二:重组子pcDNA3.1-SelS的稳定转染及表达水平检测本试验通过采用脂质体转染方法,将成功构建的真核载体pcDNA3.1-SelS,转染至猪肾细胞PK15,并通过G418进行筛选,从而得到稳定转染的细胞株,试验分组如下:PK15+pcDNA3.1-SelS转染组、PK15+pcDNA3.1转染组、未转染的正常PK15细胞组;对得到的细胞株,用RT-PCR法来测定细胞内SelS的mRNA表达水平,间接来检测基因转染的情况,并通过Western Blotting来检测细胞内硒蛋白S的表达水平。结果显示,转染了 SelS的细胞组的SelS的mRNA表达水平升高,是对照组的2.12倍,蛋白表达水平是对照组的2.0倍。同时检测各组细胞的增殖性,并对细胞内丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)进行测定。结果显示,不同细胞组的增殖速度没有明显差异;转染了 SelS的细胞组的MDA显着低于较对照组,转染了 SelS细胞组的SOD和GSH分别显着高于对照组。本试验说明过表达SelS细胞组的氧化还原状态优于对照组,因此可以推测过表达SelS细胞组的抗应激能力较强。将稳定转染的细胞冻存,置液氮保存。试验叁:过表达SelS保护PK15细胞拮抗OTA的细胞损伤本试验通过采用OTA损害细胞造模,通过分别对PK15+pcDNA3.1-SelS转染组、PK15+pcDNA3.1转染组和未转染的正常PK15细胞组的细胞毒性测定。结果显示,OTA浓度为2ug/ml时,PK15+pcDNA3.1-SelS转染组细胞拮抗毒性作用与对照组有显着差异,明显优于对照组,说明过表达SelS在某程度上对OTA造成的细胞毒性损伤具有一定的抵制作用。本试验使用OTA作用培养细胞48小时后,对细胞内的丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量进行测定。结果显示,转染了 SelS的细胞组的MDA含量极显着低于较对照组,转染了 SelS细胞组的SOD和GSH含量分别极显着高于对照组。本试验说明过表达SelS细胞组的氧化还原状态明显优于对照组,因此可以推出过表达硒蛋白S在一定程度上可以拮抗OTA造成的细胞毒性损伤。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-05-01）
李斌,梁家幸,苏乾莲,赵武,秦毅斌[4]（2013）在《猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒的检测》一文中研究指出本研究应用聚合酶链式反应技术对未接种猪细小病毒但出现类似猪细小病毒感染病变的日常培养猪肾细胞系IBRS-2进行检测,结果发现IBRS-2细胞感染了猪细小病毒。检测结果表明猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒较为常见,提示在IBRS-2细胞培养过程中要注意预防猪细小病毒的感染。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集》期刊2013-10-21）
李斌,梁家幸,苏乾莲,赵武,秦毅斌[5]（2013）在《猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒的检测》一文中研究指出本研究应用聚合酶链式反应技术对未接种猪细小病毒,但出现类似猪细小病毒感染病变的日常培养猪肾细胞系IBRS-2进行检测,结果发现IBRS-2细胞感染了猪细小病毒。检测结果表明猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒较为常见,提示在IBRS-2细胞培养过程中要注意预防猪细小病毒的感染。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2013年08期）
常宏宇,宫锋,季守平,鲍国强,李素波[6]（2010）在《利用正负筛选打靶载体在猪肾细胞系PK-15细胞中敲除GGTA1基因》一文中研究指出目的半乳糖-α1,3-半乳糖(αGal)表位是猪到人异种移植中引起排斥反应的主要异种抗原。通过同源重组敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因可从异种移植物表面彻底清除αGal表位。本研究的目的在于利用正负筛选打靶载体定向缺失猪GGTA1基因。方法构建猪α1,3-半乳糖基转移酶基因正负筛选打靶载体pSL/GT,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,打靶载体线性化后用脂质体包裹转染猪肾细胞系PK-15细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,挑选抗性克隆进行PCR及Southern杂交鉴定。结果共得到436个抗性细胞克隆,其中31个克隆PCR结果阳性。经Southern杂交鉴定证实,其中1个克隆发生了同源重组,为杂合子。结论本研究构建了有效的猪GGTA1基因的正负筛选打靶载体pSL/GT,并利用其在猪肾细胞系PK-15细胞中定向缺失GGTA1基因,获得了杂合子GGTA1(+/-)PK-15细胞。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2010年03期）
阮小华[7]（2010）在《合作猪肾成纤维细胞系的构建及生物学鉴定》一文中研究指出西北民族大学硕士学位论文本文选取国家级禽畜遗传保护品种——合作猪,利用动物细胞培养技术,通过差速贴壁和差速消化法,构建了15个合作猪肾原代成纤维细胞系,并冻存细胞200余支。根据ATCC细胞建系要求,对其培养条件和生物学特性进行了分析。结果：倒置相差显微镜下细胞呈梭形或柳树叶形,生长旺盛,经48～72h培养,细胞长满单层,生长走势呈放射状或旋涡状。透射电镜显示胞浆内有纤维状结构存在。免疫组化显示波形蛋白阳性,角蛋白阴性。经DMEM(H)、MEM、RPMI1640和HamF12四种培养基各加10%FBS选择培养的结果表明,DMEM(H)培养基加10%FBS最适合对该细胞的培养。间歇降温冻存法冻存的细胞,复苏后细胞生长状态良好,生长曲线呈“S”型,细胞经历了潜伏期、对数期与停滞期,符合细胞体外生长规律。冻存前细胞平均成活率97%,复苏后为95%,说明该法冻存细胞效果良好。细胞核型分析显示：合作猪肾成纤维细胞染色体数目为2n=38,其中18对常染色体,1对性染色体,y染色体为最小的中着丝粒染色体。分别统计雌雄个体来源细胞的100个细胞中期分裂相,结果为雌性2n=38占88%,雄性90%,表明所建细胞系为二倍体细胞占主体,遗传性能稳定。SDS凝胶电泳显示细胞的乳酸脱氢酶酶谱为五条区带,不同个体来源细胞经多次重复结果相同,表明所建细胞系没有发生交叉污染。脂质体介导绿色、红色荧光蛋白报告质粒转染,分别获得45%、35%的细胞转染率,表明合作猪肾成纤维细胞能有效地转染表达外源基因。细菌、真菌、支原体和病毒外源因子感染的检测结果均为阴性。结论：所构建并冻存的合作猪肾成纤维细胞系符合ATCC建系要求,为合作猪的基因组文库构建、体细胞克隆及基因遗传多样性研究等储备了理想的生物学材料,为基因工程疫苗的构建储备了细胞载体,同时也可为组织工程肾提供种子细胞。(本文来源于《西北民族大学》期刊2010-04-01）
戚丹英,刘福安[8]（1985）在《幼猪肾(BPKV)传代细胞系病毒感染范围》一文中研究指出1、本文报告了用近二十种不同的感染禽类或哺乳动物的病毒株接种幼猪肾(BPKV)传代细胞系以及进行血球吸附试验的测定方法与结果。下列病毒能产生细胞病变(CPE):牛传染性鼻气管炎、伪狂犬病、猪水泡病、猪痘、口蹄疫、羊传染性脓疱、鸡新城疫(强毒)、鸡传染性支气管炎。而以下病毒既无 CPE 出现,也不发生鸡红细胞吸附现象:牛病毒性腹泻、猪瘟、传染性囊病、鸡新城疫(I 系)、鸡新城疫(LaSota 系)、传染性喉气管炎、鸡痘、禽流感(鸭源)、鸭瘟、小鹅瘟。2、进一步在 BPKV 系上对伪狂犬病病毒(PRV)进行微量毒价测定和微量血清中和试验。实验结果表明:该 BPKV 传代细胞系可利用作为某些病毒病的诊断材料。(本文来源于《畜牧兽医科技》期刊1985年01期）
张赋平,戴维平,陈嘉棣,许日龙,曹伟明[9]（1983）在《猪肾传代细胞系IB-RS-2的研究》一文中研究指出IB-RS-2传代细胞现已广泛地用于病毒分离,疾病诊断,病毒抗原的生产和疫苗制造等方面,整个细胞群体在传代培养过程中,有些细胞的遗传性可能发生变(本文来源于《上海畜牧兽医通讯》期刊1983年01期）
刘福安[10]（1979）在《幼猪肾(BPKⅣ)传代细胞系培育的研究》一文中研究指出一、引言传代细胞系是由再培养(继代)次数有限的原代细胞株,在试管内经过若干次继代和若干时间发生变异而成为生长速度很快、理论上可以连续不断地传代下去的异倍体细(本文来源于《中国兽医杂志》期刊1979年10期）
猪肾细胞系论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirustype 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒感染细胞后会引起细胞产生热休克反应(heat shock response,HSR),诱导一系列热休克蛋白表达,进而保证病毒基因组复制、病毒蛋白合成及子代病毒组装等。本研究拟通过Hsp90基因过表达和RNA干扰,明确其对PCV2复制的影响及其与PCV2Cap、Rep蛋白的相互作用关系。材料与方法采用Hsp90抑制剂处理细胞,观察其对PCV2在PK-15细胞中复制的影响;分别设计Hsp90过表达质粒和siRNA干扰片段,转染细胞后经定量检测,明确Hsp90在PCV2复制过程中的作用;通过激光共聚焦试验探究Hsp90与病毒Cap、Rep蛋白的细胞定位变化。结果与讨论前期通过iTRAQ定量蛋白组技术结合质谱分析,发现了PCV2感染PK-15细胞过程中,有一系列细胞蛋白表达量发生了显着变化,其中包括Hsp90、Hsp70和Hsp27等,提示这类蛋白可能参与了病毒的感染和复制。本研究首先采用Hsp90特异性抑制剂处理细胞,western blot和TCID_(50)检测发现PCV2在细胞中的复制滴度明显下降;同时定量PCR检测显示,特异性抑制剂并非影响病毒侵入细胞这一初始阶段。利用重组真核质粒在PK-15细胞中过量表达Hsp90,可以促进PCV2的复制,相反,使用特异性siRNA干扰细胞中内源性Hsp90,可以抑制PCV2的复制。激光共聚焦试验结果显示,与对照组相比,病毒感染组细胞内的Hsp90β蛋白会在核内呈颗粒状聚集。这些结果表明Hsp90这一伴侣蛋白在PCV2的复制过程中起了重要作用,本研究对阐明PCV2致病机理和研究新的抗病毒药物具有重要意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪肾细胞系论文参考文献
[1].刘捷,张旭亮,马畅,尤金炜,董敏.Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制[C].中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2015年学术年会论文集.2015
[2].刘捷,张旭亮,马畅,尤金炜,董敏.Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集.2015
[3].黄钰.猪肾细胞过表达SelS细胞系的构建及其对OTA毒性的拮抗作用[D].南京农业大学.2014
[4].李斌,梁家幸,苏乾莲,赵武,秦毅斌.猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒的检测[C].中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集.2013
[5].李斌,梁家幸,苏乾莲,赵武,秦毅斌.猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒的检测[J].中国动物检疫.2013
[6].常宏宇,宫锋,季守平,鲍国强,李素波.利用正负筛选打靶载体在猪肾细胞系PK-15细胞中敲除GGTA1基因[J].军事医学科学院院刊.2010
[7].阮小华.合作猪肾成纤维细胞系的构建及生物学鉴定[D].西北民族大学.2010
[8].戚丹英,刘福安.幼猪肾(BPKV)传代细胞系病毒感染范围[J].畜牧兽医科技.1985
[9].张赋平,戴维平,陈嘉棣,许日龙,曹伟明.猪肾传代细胞系IB-RS-2的研究[J].上海畜牧兽医通讯.1983
[10].刘福安.幼猪肾(BPKⅣ)传代细胞系培育的研究[J].中国兽医杂志.1979