重组仿刺参超氧化物歧化酶在大肠杆菌中表达条件的优化及分离纯化

重组仿刺参超氧化物歧化酶在大肠杆菌中表达条件的优化及分离纯化

论文摘要

利用基因工程菌BL21(DE3)/pET30a(+)-SOD1,优化表达重组仿刺参超氧化物歧化酶蛋白(rAj-SOD1)。采用摇瓶发酵优化rAj-SOD1可溶性表达的条件,提高蛋白的表达产量。结果表明,在温度30℃、转速200 r/min、0.1 mmol/L IPTG诱导8 h条件下,菌体中rAj-SOD1蛋白表达量最大,达到315.59 mg/L。电泳检测结果表明,rAj-SOD1的纯度为96.7%,符合后续酶活要求。纯化后rAj-SOD1质量浓度为98.73 mg/L,收率为31.28%。邻苯三酚法对rAj-SOD1蛋白进行活性分析,结果表明,纯化的rAj-SOD1蛋白具有明显的抗氧化活性。

论文目录

  • 0 引 言
  • 1 材料和方法
  •   1.1 材 料
  •     1.1.1 菌 种
  •     1.1.2 试 剂
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 重组rAj-SOD1蛋白的诱导表达
  •     1.2.2 发酵条件的优化
  •     1.2.3 重组rAj-SOD1蛋白的提取纯化
  •       1.2.3.1 发酵菌体预处理
  •       1.2.3.2 Ni2+-NTA分离纯化
  •     1.2.4 蛋白质量分数的测定
  •     1.2.5 邻苯三酚自氧化法检测海参SOD1活性
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 重组rAj-SOD1诱导表达条件的优化
  •     2.1.1 诱导温度对重组rAj-SOD1表达量的影响
  •     2.1.2 摇床转速对重组rAj-SOD1表达量的影响
  •     2.1.3 IPTG浓度对重组rAj-SOD1表达量的影响
  •     2.1.4 诱导时间对重组rAj-SOD1蛋白表达量的影响
  •   2.2 重组rAj-SOD1蛋白的纯化、产率及活性分析
  •     2.2.1 重组rAj-SOD1的分离、纯化
  •     2.2.2 rAj-SOD1抗氧化活性分析
  • 3 结 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 黄君,张晓天,李月,穆贤,丛丽娜,李成

    关键词: 仿刺参,超氧化物歧化酶,抗氧化活性

    来源: 大连工业大学学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 大连工业大学生物工程学院,营口市环境监测中心站

    基金: 辽宁省自然科学基金重点项目(20170520043)

    分类号: Q55;Q78

    DOI: 10.19670/j.cnki.dlgydxxb.2019.0204

    页码: 92-96

    总页数: 5

    文件大小: 566K

    下载量: 148

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