变异链球菌基因诱导表达系统及其应用

论文摘要

基因表达系统在研究代谢途径、信号通路、基因表达调控等方面都起到重要作用。其被广泛的应用于生物、食品、工业以及医学领域,以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。诱导基因表达系统是一种特异性、高效率及剂量依赖性的系统,该系统已经成功的应用于酶、多肽、中间代谢物等表达产物的生产,对食品、医药、保健业和工业等领域大发展起到极大的推动作用。通过利用强启动子将克隆基因整合到染色体上,构建高效的诱导性表达载体,通过不同的诱导方法,实现外源蛋白的高效表达。目前,对于变异链球菌的诱导系统构建已有相关研究,但将该系统与转座系统相结合用于探究一些相关基因的功能等方面尚且不足。本论文以变异链球菌（Streptococcus mutans）UA159为研究对象,旨在构建一个适用于该菌的一个能够有效控制基因表达以及能与转座系统相结合的诱导型表达系统。主要研究结果如下:（1）在变异链球菌UA159中将转座元件与已有的两个木糖诱导系统S2和S1结合构建了两个转座载体 pLH475（pLH1 45::gyrAp::xylR::xy/Ap::xy/Ao::marc9::ermAM）和pLH630（pLH145::gyrAp::xy/R::1dhp::xy/A。::marc9::ermAM）,通过木糖诱导实验后发现这两个系统都无法达到无诱导物情况下低表达水平,有诱导物时高水平表达。前者在添加木糖诱导后无发生转座,后者在不加木糖诱导时也能有大量转座子出现,且转座位点单一。（2）新的诱导表达系统的构建S3。通过对木糖诱导阻遏物基因xylR的RBS区域进行改造后构建出一个新的诱导系统,再用该系统构建一个荧光素报告质粒pLH632（pLH421::gyrAp::xy/R::ldhp::xylAo::luc）,通过荧光素酶活性检测试验结果发现,该系统能够在无诱导物时低水平表达,比S1表达水平低出4倍,在加入木糖诱导后,新的诱导系统表达水平也较高比S2的表达量高出约2.8倍,成功构建出一个低基础表达水平、高诱导表达水平的诱导表达系统。（3）将新的诱导表达系统S3与转座元件结合构建转座载体pLH631（pLH145::gyrAp::xy/R,::/dhp::xylAo::marc9::ermAM）转化入变异链球菌 UA159 中,进行木糖诱导实验后结果发现,在不加入木糖诱导时转座有少量或者无转座子出现,在加入0.4%木糖时转座子数目达到最大,且转座率最大达3%。对转座子进行一些列处理后测序结果发现,转座子插入位点具有多样性。（4）运用转座系统筛选抗性突变株,将转座载体pLH631转化入变异链球菌UA159中进行木糖诱导后发生转座,将发生转座的突变株涂布在含醋酸氯已定抗性的平板上筛选出抗醋酸氯已定的突变株,筛选出的突变株插入基因是SMU1349,且经过试验证明插入突变能够稳定遗传。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 杨孝丽

导师: 刘浩

关键词: 变异链球菌,诱导型基因表达系统,转座系统,醋酸氯已定

来源: 天津科技大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 天津科技大学

分类号: Q78

DOI: 10.27359/d.cnki.gtqgu.2019.000415

总页数: 61

文件大小: 5466K

下载量: 14

相关论文文献

• [1].论语篇的表达系统——兼议表达方式的定体功能[J]. 烟台大学学报(哲学社会科学版) 2018(05)
• [2].慢病毒载体表达系统的研究进展[J]. 中国动物保健 2017(10)
• [3].黑腹果蝇二元表达系统原理及应用[J]. 生命科学 2015(05)
• [4].阅读有心 表达有“形”——思维图在阅读表达中的运用[J]. 课程教育研究 2017(24)
• [5].乳酸乳球菌表达系统的研究进展[J]. 粮油加工(电子版) 2015(10)
• [6].蛋白表达系统的研究进展[J]. 包头医学院学报 2014(03)
• [7].转基因烟草蛋白表达系统的研究进展[J]. 安徽农业科学 2011(07)
• [8].也论汉语方言[昨天][今天][明天]的时间表达系统及其来源[J]. 中国语文 2018(06)
• [9].镰孢霉疫苗表达系统的构建及优化[J]. 天津科技大学学报 2017(01)
• [10].乳铁蛋白的理化性质及其重组表达系统的研究进展[J]. 遗传 2015(09)
• [11].恶性疟原虫环子孢子蛋白在无细胞表达系统的表达及纯化研究[J]. 药物分析杂志 2011(07)
• [12].现代汉语情感词语表达系统研究[J]. 现代语文(语言研究版) 2014(08)
• [13].一种新的植物miRNA体内下调表达系统[J]. 生物技术通报 2014(09)
• [14].以人为中心的产品感知与表达系统设计[J]. 包装世界 2013(03)
• [15].重组蛋白表达系统的研究进展[J]. 生物技术 2012(02)
• [16].里氏木霉细胞表面表达系统的构建[J]. 微生物学报 2013(01)
• [17].双歧杆菌质粒聚合酶基因表达系统的构建及其鉴定[J]. 中国微生态学杂志 2013(11)
• [18].小说话语的时间表达系统[J]. 汉语学报 2010(04)
• [19].无细胞蛋白表达系统研究进展[J]. 科技经济市场 2009(06)
• [20].重组中国仓鼠卵巢细胞表达系统高效表达载体研究进展[J]. 新乡医学院学报 2016(03)
• [21].高灵敏度铜抗性酿酒酵母表达系统的构建与应用[J]. 应用与环境生物学报 2014(03)
• [22].生产重组蛋白的植物表达系统[J]. 生物学通报 2013(01)
• [23].三维GIS符号化表达系统的设计及实现[J]. 智能城市 2018(03)
• [24].粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究[J]. 生物技术通报 2016(07)
• [25].适用于高通量筛选的脂肪酶表达系统[J]. 微生物学通报 2012(06)
• [26].人血清白蛋白的生物制备工艺优化[J]. 生物学杂志 2020(03)
• [27].哺乳动物细胞表达系统研究进展[J]. 中国生物工程杂志 2014(01)
• [28].食品级枯草芽孢杆菌表达系统的最新研究进展[J]. 上海农业学报 2014(01)
• [29].一种基于三顺反子表达载体的生物素诱导表达系统的建立[J]. 现代生物医学进展 2011(08)
• [30].用于药用蛋白生产的外源表达系统[J]. 基因组学与应用生物学 2009(04)

标签：变异链球菌论文;  诱导型基因表达系统论文;  转座系统论文;  醋酸氯已定论文;