费聿锋[1]2002年在《鸡IL-2基因的克隆、表达、生物学活性测定及其对鸡多联油苗免疫增强效果的研究》文中指出应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术，参照国内外巳发表文献，自行设计并合成1对引物，从ConA活化的30日龄来杭SPF鸡及崇仁绿脚麻鸡脾淋巴细胞中分别扩增出片段大小为441bp的鸡白细胞介素2 cDNA基因，将扩增片段克隆到pMD18-T载体，经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测定，表明扩增片段为鸡白细胞介素2基因。该基因与Genebank申报道的序列一致。它们编码序列与genebank中公布的鸡IL-2DNA序列仅有1-5个碱基的差异，与火鸡的同源性分别为85.9％和86.6％。而与其它哺乳动物IL-2的同源性在25.5-36.1％之间；氨基酸分析表明，他们与公布的鸡IL-2序列有1-5个氨基酸的差异，同源性在98.6％-99.3％，与火鸡的同源性分别为68.8％和69.4％。通过二级结构预测表明，他们的编码蛋白前面有22个氨基酸的信号肽序列，4个半胱氨酸形成两个二硫键，并含有4个类似于哺乳动物的α螺旋。IL-2基因进化树分析、氨基酸进化树分析及IL-2分子抗原性分析表明，鸡IL-2与哺乳动物的IL-2有着共同的渊源，从而进一步证明了IL-2具有属特异性的观点。 应用DNA重组技术，将ChIL-2基因克隆到原核表达质粒载体pBV220中，并转化大肠杆菌DH5α。通过温度诱导表达，在大肠杆菌中表达了重组鸡II-2蛋白。SDS-PAGE电泳显示，其分子量在17KD左右，42℃，4-5hr表达产物最多，约占总菌体蛋白的10％左右。超声波裂解初步分离后，表达产物主要在包涵体中，但在细胞裂解液上清中亦有相当的含量。将包含体经过初步分离纯化，复性，并且对碎菌上清，复性蛋白进行了生物学活性的检测。结果表明，重组鸡IL-2对ConA活化的鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑脾淋巴细胞具有相当高的体外维持增殖作用，但对ConA活化的小鼠脾淋巴细胞的活性较低。实验证明，所获得的的重组鸡IL-2具有较高的生物学活性。为进一步动物实验提供了必要的实验依据。 本实验中使用在原核表达系统中表达的重组鸡IL-2蛋白，经过初步的分离纯化，与新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗同时使用，肌肉注射，检测其对疫苗的免疫增强效果。实验中共分5组，每组10只鸡，以只注射新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗组为对照组，设4个实验组，在注射疫苗的同时分别注射重组鸡IL-2蛋白0.05mg、0.10mg、0.15mg、0.20mg。实验组与对照组同时各注射新城疫等多联油苗0.5ml。采用HA、HI实验测定鸡新城疫、禽流感抗体滴度。结果表明：重组鸡IL-2对新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳4 摘要剂灭活苗有较强的免疫增强作用，以第3、4组的增强效果较为明显，其中对NDV和Al抗原的抗体效价，与对照组相比分别提高2．4－2．8和2．2－3．0个滴度。重组鸡1卜2在使用的过程中，没有发现具有任何毒副作用，证明是一种安全高效的免疫增强剂。
闫峰宾[2]2006年在《固始鸡重组白细胞介素-2作为免疫增强的研究》文中认为本研究通过原核系统表达了固始鸡重组IL-2蛋白，经过镍亲和层析柱纯化后，分别与鸡新城疫灭活苗和鸡痢疾志贺氏菌灭活苗同时免疫鸡群，以检测其对疫苗的免疫增强效果。共分叁个试验。 试验一 将低温保存的基因工程表达菌pET28a-GSIL-2／BL_(21)(DE_3)复苏后，经过IPTG诱导，表达了固始鸡重组IL-2蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示：目的蛋白分子量为18kD左右，薄层扫描分析表明表达量占菌体总蛋白的18％；经超声波裂解菌体，离心初步分离，目的蛋白主要以包涵体形式存在，但在细胞裂解上清中也有一定含量。将包涵体经过初步分离、变性、镍亲和层析柱纯化、复性，并对纯化的目的蛋白进行生物学活性检测。MTT试验结果表明：重组IL-2对经ConA活化的鸡脾淋巴细胞具有明显的体外增殖作用，这表明重组IL-2具有一定免疫增强作用。 试验二 固始鸡重组IL-2作为免疫增强剂对鸡新城疫灭活苗免疫效果的影响。5日龄200只鸡随机分为5组，每组40只鸡(公母各半)，即空白对照组，新城疫疫苗组，新城疫疫苗+IL-2(10ug)组，新城疫疫苗+IL-2(50ug)组，新城疫疫苗+IL-2(250ug)组。所有免疫组均于8日龄分别免疫接种相应疫苗，18天后各组均取10只鸡用于动物攻毒保护试验，并进行免疫器官指数、血清抗体效价和外周血T淋巴细胞亚群的测定，试验结果表明：重组IL-2蛋白增强了新城疫疫苗的免疫效果，提高了血清中抗体水平、T淋巴细胞CD3~+、CD4~+、CD8~+亚群水平、CD4~+／CD8~+的比值和各免疫器官指数，且部分指标差异达到显着水平(P＜0.05)，促进鸡免疫器官的生长发育，增强鸡的免疫功能。 试验叁 固始鸡重组IL-2作为免疫增强剂对鸡志贺氏菌灭活苗免疫效果的影响。5日龄200只鸡随机分为5组，每组40只鸡(公母各半)，即空白对照组，鸡志贺氏菌苗组，鸡志贺氏菌苗+IL-2(10ug)组，鸡志贺氏菌苗+IL-2(50ug)组，鸡志贺氏菌苗+IL-2(250ug)组。所有免疫组于21日龄分别免疫接种相应疫苗，20天后各组均取10只鸡用于动物攻毒保护试验，并进行免疫器官指数、血清抗体效价和外周血T淋巴细胞亚群的测定，试验结果表明：重组IL-2蛋白增强了鸡志贺氏菌苗的免疫效果，提高了血清中抗体水平、T淋巴细胞CD3~+、CD4~+、CD8~+亚群水平、CD4~+／CD8~+的比值和各免疫器官指数，且部分指标差异达到显着水平(P＜0.05)，促进鸡免疫器官的生长发育，增强鸡的免疫功能。 本研究结果表明，固始鸡重组IL-2蛋白可作为免疫增强剂代替其他佐剂来使用，且很少量的IL-2蛋白就能发挥增强免疫效果的作用，为开发生产天然的免疫增强剂提供了新的途径。
于涟, 李建荣, 黄耀伟, 梁雪芽, 孟松树[3]2001年在《鸡白细胞介素2增强传染性法氏囊病病毒多聚蛋白DNA疫苗免疫原性的研究》文中研究说明鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d后二免 ,二免后 3d攻击标准强毒株。结果表明共注射鸡IL 2质粒能明显增强DNA疫苗对强毒攻击 ,保护率达 80 % ;能增强DNA疫苗诱导的中和抗体效价 (P <0 0 5 ) ;能显着促进鸡胸腺、脾脏和外周血液T淋巴细胞及法氏囊B淋巴细胞增殖反应 (P <0 0 5 )。这些结果提示鸡IL 2能明显增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗的免疫原性 ,是一种优良的禽类DNA疫苗佐剂。
谢荣辉, 万旺军, 李龙, 李建荣, 于涟[4]2007年在《鸡白细胞介素2口服免疫佐剂增强传染性法氏囊病病毒DNA疫苗免疫效果的研究》文中进行了进一步梳理将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为载体的鸡白细胞介素2口服免疫增强剂具有相对的安全性.重组ZJ111/pCI-IL-2菌能明显增强IBDV DNA疫苗对强毒株攻击保护率;增强IBDV DNA疫苗诱导的抗体的效价(P<0.05);增强IBDV DNA疫苗所诱导的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应(P<0.05).上述结果初步表明以减毒沙门氏菌为载体的白细胞介素2免疫增强剂具有良好的安全性和免疫增强作用,为研制低成本、实用化的禽类口服免疫增强剂奠定了基础.
赵峰[5]2008年在《重组白细胞介素-2（IL-2）对固始鸡免疫机能和分泌型免疫球蛋白（SIgA）表达影响的研究》文中研究指明本研究以固始鸡作为试验材料,用不同剂量的重组白细胞介素-2(IL-2)配合志贺氏菌灭活苗对固始鸡进行分组免疫接种,在免疫前和免疫后不同时期对固始鸡血清内抗体效价和免疫器官指数进行了测定;利用免疫组织化学染色技术和Qwin图像处理系统,对固始鸡肠道黏膜内SIgA表达情况进行观察和定量分析,从而探讨了IL-2对固始鸡的免疫机能和免疫器官生长发育的影响。结果表明:(1)志贺氏菌疫苗配合IL-2进行免疫的试验组,免疫后固始鸡血清内抗体水平高于志贺氏菌疫苗免疫组和空白对照组,在免疫后第2周差异显着(p﹤0.05)。(2)注射IL-2的各试验组的固始鸡的脾脏、胸腺和法氏囊的指数均大于志贺氏菌疫苗免疫组和空白对照组,有时差异显着(p﹤0.05)。(3)SIgA主要表达于固始鸡肠黏膜固有层分泌细胞膜上,分泌细胞有的位于肠绒毛内,有的位于肠腺腺腔周围。SIgA也有以片层状或线状分布于肠腺腺腔内。随免疫后时间的延长,SIgA表达量明显增多。(4)在十二指肠中,SIgA主要表达于肠腺周围和黏膜与肠绒毛内的固有层内。免疫后随时间的延长,表达量逐渐增加。注射白介素的试验组中十二指肠中SIgA的表达量多于空白对照组和志贺氏菌疫苗免疫组。在注射白介素的试验组中当添加量为50μg时SIgA表达量最多。空肠中SIgA主要分布于肠腺之间和黏膜固有层内。志贺氏菌疫苗+IL-2(50μg)组中空肠内SIgA表达量增多的快,而且多于其他各组。回肠中SIgA主要分布在绒毛内的固有层中,多以颗粒状存在。在注射白介素的试验组SIgA在回肠的表达量显着多于空白对照组和志贺氏菌疫苗组,而且注射量为50μg时表达量最多。盲肠扁桃体内,在免疫后随时间延长SIgA主要以团簇状、叁角锥形、短杆状分布于肠绒毛固有层及肠腺腺腔的周围。志贺氏菌疫苗+IL-2使SIgA的表达量显着高于空白对照组和志贺氏菌疫苗免疫组。志贺氏菌疫苗+IL-2(50μg)组中盲肠扁桃体内SIgA表达量最多。在卵黄囊憩室中,SIgA主要分布于肠绒毛基底部附近的固有层内。志贺氏菌疫苗+IL(50μg)组SIgA的表达量最多。在直肠内,以肠腺腺腔内分布的SIgA的较多。各试验组中志贺氏菌疫苗+IL(50μg)组SIgA的表达量最多。(5)肠道内SIgA一般随免疫时间的延长而表达量逐渐增多,到免疫后第4周时,表达量达到高峰值,随后缓慢下降。(6)免疫后1周,注射IL-2的试验组盲肠扁桃体内SIgA的表达量最多。而在空白对照组和志贺氏菌疫苗免疫组中,卵黄囊憩室中的SIgA的表达量最大。免疫后第2周,各试验组SIgA的最大表达量出现在不同的器官:在空白对照组是在卵黄囊憩室;在志贺氏菌疫苗免疫组和志贺氏菌疫苗+IL-2(250μg)组是在盲肠扁桃体;在志贺氏菌疫苗+IL-2(10μg)组和志贺氏菌疫苗+IL-2(50μg)组则出现在回肠中。免疫后3-7周,盲肠扁桃体中的SIgA表达量最大。(7)志贺氏菌疫苗配合注射IL-2(50μg)使器官的SIgA表达量最大。本研究结果表明,重组鸡IL-2可明显促进固始鸡免疫器官生长发育,提高体液免疫水平,同时也有利于SIgA在固始鸡肠道内的表达。研究结果提示IL-2与疫苗配合使用,可作为佐剂提高疫苗的免疫原性,增强机体免疫力。
张小燕[6]2006年在《鸡CD3和IL-2分子单克隆抗体的研制与鉴定》文中指出鸡CD3分子是T细胞表面的重要标志之一,在抗原识别过程中,CD3分子参与信号传导。针对鸡CD3分子的特异性单克隆抗体(McAb)可用于测定或分选鸡体内CD3~+ T细胞群,从而了解鸡体的细胞免疫功能状态,进行细胞免疫机理的深入研究。鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)是主要由激活的T细胞和部分B细胞产生的一种糖蛋白,可激活T淋巴细胞,促进B细胞增殖和分泌抗体,增强NK细胞的活性等,是一种天然的免疫增强剂。针对鸡IL-2的特异性McAb可用于建立简单、快速、敏感性高的鸡IL-2检测方法,同时为IL-2在禽类免疫系统中的免疫生物学研究提供有用的工具。本研究分别用表达鸡CD3和IL-2分子的重组真核表达质粒免疫6周龄BALB/c小鼠,制备出能稳定分泌抗鸡CD3和IL-2分子的特异性McAb细胞株,并对McAb的部分生物学特性进行鉴定,为其进一步应用奠定基础。一、重组质粒pcDNA3.1-IL-2的构建及表达通过PCR扩增出鸡IL-2 cDNA片段,并将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-IL-2,经酶切鉴定正确后转染COS-7细胞,间接免疫荧光结果显示,鸡IL-2能在真核细胞中获得表达。将重组原核表达质粒pET-IL-2转化宿主菌BL21(DE3),重组菌小量提取质粒后经酶切鉴定正确;将重组菌用IPTG(0.1mM终浓度)诱导4h后,收获细菌,SDS-PAGE结果表明目的蛋白成功表达;诱导菌经超声波裂解后,分别取沉淀和上清进行SDS-PAGE,结果显示,目的蛋白主要以包涵体形式存在;包涵体经PBS洗涤3次后得到初步纯化,将其溶于6M盐酸胍溶液。二、鸡IL-2 McAb的研制与鉴定
余波[7]2008年在《鹅白细胞介素-2成熟蛋白基因表达及其免疫佐剂效应的研究》文中研究表明根据本实验室在GenBank中注册的四川白鹅白细胞介素2(GoIL-2)基因序列,用OLIGO6.0设计PCR引物,对GoIL-2基因进行PCR扩增、序列测定及生物信息学分析后,开展GoIL-2基因原核表达载体构建和表达产物纯化、表达产物生物学活性检测、表达产物对小鹅瘟弱毒疫苗和VP3基因工程重组亚单位疫苗的佐剂效应研究,获如下结果:1 GoIL-2原核表达、产物纯化和生物学活性PCR扩增GoIL-2成熟蛋白基因并克隆到pMD18-T载体,测序鉴定后将其连接到原核表达载体pET32a~+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果,表达出大小约34KD重组GoIL-2蛋白,以可溶性形式存在,占菌体总蛋白的42.5%。重组蛋白经镍金属螯合介质填料(Ni~+-MIAC)后得到纯化,复性后用MTT法检测表达产物的相对生物学活性单位为110672U/mg。2重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗、GPV弱毒疫苗免疫青年鹅佐剂效应研究重组GoIL-2以500U/只、1000U/只、2000U/只分别与小鹅瘟VP3基因16抗原决定簇重组亚单位工程疫苗(Ag16v)、小鹅瘟VP3基因10抗原决定簇重组亚单位工程疫苗(Ag10v)和GPV弱毒疫苗同时免疫青年鹅,分为12组:500U+Ag16v、1000U+Ag16v、2000U+Ag16v、500U+Ag10v、1000U+Ag10v、2000U+Ag10v、1000U+GPV,同时设Ag16v对照组、Ag10v对照组、GPV弱毒对照组、IL-2对照组、PBS对照组。(1)细胞免疫:免疫后第3d、7d、14d、21d、28d、35d、49d采血,用MTT法检测青年鹅细胞免疫水平。结果:试验组鹅外周血中T淋巴细胞转化率于7-49d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于PBS对照组。①2000U+Ag16v组,14-49d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag16v对照组和500U+Ag16v组,于21-28d显着(P＜0.05)高于1000U+Ag16v组。500U+Ag16v组与Ag16v对照组差异不显着(P＞0.05)。②2000U+Ag10v组,14-49d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag10v对照组和500U+Ag10v组,于21-28d显着(P＜0.05)高于1000U+Ag10v组。500U+Ag10v组与Ag10v对照组差异不显着(P＞0.05)。③1000U+GPV组,14-28d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于GPV对照组。结果表明GoIL-2能够增强小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗和GPV弱毒疫苗诱导的细胞免疫应答,且具有一定的剂量依赖性。(2)体液免疫:免疫后第3d、7d、14d、21d、28d、35d、49d、63d、77d、91d、105d、119d、133d、147d、161d、175d采血,用ELISA法和中和抗体试验检测青年鹅体液免疫水平。结果:①ELISA抗体:试验组于7-175d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于PBS对照组、IL-2对照组。2000U+Ag16v组于14-147d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag16v对照组和500U+Ag16v组,于21-28d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于1000U+Ag16v组。500U+Ag16v组与Ag16v对照组差异不显着(P＞0.05)。2000U+Ag10v组于14-147d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag10v对照组、500U+Ag10v组,于21d、49d、77d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于1000U+Ag10v组。500U+Ag10v组与Ag10v对照组差异不显着(P＞0.05)。1000U+GPV组,于21d时达到峰值,于14-147d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于GPV弱毒疫苗对照组。②中和抗体:试验组、对照组(除PBS对照组、IL-2对照组)都产生了特异性GPV抗体。2000U+Ag16v组21-147d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于500U+Ag16v组和Ag16v对照组,21-35d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于1000U+Ag16v组。500U+Ag16v组与Ag16v对照组差异不显着(P＞0.05)。2000U+Ag10v组于14-147d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag10v对照组和500U+Ag10v组,于21d、28d极显着(P＜0.01)高于1000U+Ag10v组。500U+Ag10v免疫组中和抗体效价与Ag10v对照组差异不显着(P＞0.05)。1000U+GPV组21-147d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于GPV弱毒疫苗对照组。体液免疫试验表明重组GoIL-2能够增强小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗和GPV弱毒疫苗诱导的体液免疫应答,且具有一定的剂量依赖性。3重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗、GPV弱毒疫苗免疫开产前种鹅佐剂效应研究重组GoIL-2以6000U分别与GPV弱毒疫苗、Ag16v和Ag10v免疫种鹅,同时设Ag16v对照组、Ag10v对照组、GPV弱毒对照组、IL-2对照组、PBS对照组,免疫后第3d、7d、14d、21d、28d、35d、49d、63d、77d、91d、105d、119d、133d、147d、161d、175d各组随机采集种鹅血、收集种蛋进行血清和卵黄抗体检测,同时孵化种蛋以100个LD_(50)GPV-CHv强毒株对后代雏鹅进行攻毒保护试验。结果:(1)血清ELISA抗体:试验组于7-175d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于PBS对照组、IL-2对照组。6000U+Ag16v、6000U+Ag10v和6000U+GPV免疫组,7-147d分别极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag16v、Ag10v和GPV对照组。(2)血清中和抗体:试验组、对照组(除PBS对照组、IL-2对照组)都产生了特异性GPV抗体。6000U+Ag16v、6000U+GPV免疫组,21-147d分别极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag16v、GPV对照组。6000U+Ag10v,14-147d极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag10v对照组。(3)卵黄ELISA抗体:6000U+Ag16v、6000U+Ag10v和6000U+GPV免疫组,7-147d分别极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag16v、Ag10v和GPV对照组。(4)卵黄中和抗体:试验组和对照组(除PBS对照组、IL-2对照组)都产生了特异性GPV抗体。其中IL-2+Ag16v、IL-2+Ag10和IL-2+GPV免疫组抗体的中和效价于21-147d分别极显着(P＜0.01)或显着(P＜0.05)高于Ag16v、Ag10v和GPV对照组。表明重组GoIL-2增强了小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗和GPV弱毒疫苗诱导的种鹅血清和卵黄抗体水平。(5)攻毒保护率:Ag16v+IL-2、Ag10v+IL-2、GPV+IL-2于21d达到100%保护率持续至161d,175d时对后代雏鹅的保护率分别降到80%、80%、90%,对后代雏鹅的免疫保护期达140d,而Ag16v、Ag10v、GPV对照组于28d达到100%保护率分别持续至147d、147、161d,对后代雏鹅的免疫保护期分别为119d、119、133d。试验组其后代雏鹅免疫保护期较对照组长7-21d,表明重组GoIL-2能够提高小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗和GPV弱毒疫苗免疫种鹅后对其后代雏鹅的攻毒保护率。
徐赓[8]2008年在《白细胞介素-2和粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的克隆与表达》文中研究表明鸡柔嫩艾美耳球虫属于具有顶复合器的原生动物,主要寄生于鸡的盲肠中,常常引起大批鸡只的死亡,如何更好的控制球虫病是兽医工作者面临的一个课题,本文对细胞因子IL-2和GM-CSF展开研究。根据GenBank上发表的鸡的IL-2和GM-CSF序列,设计引物。逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法,从人工感染柔嫩艾美耳球虫的雏鸡盲肠扁桃体中扩增到了391bp和435bp的DNA片段,将两片段与pGEM-T载体连接后转化JM109感受态细胞,经蓝白斑筛选、PCR鉴定后,将阳性质粒进行测序。结果表明,扩增片断为鸡IL-2和GM-CSF。IL-2和GM-CSF基因与GenBank中报道的序列仅有1-2个碱基的差异,IL-2与鹌鹑的同源性为54.5%,而与哺乳动物IL-2的同源性在29.9%~34.5%之间。GM-CSF与哺乳动物的同源性在35.2%~45.4%之间。以鸡β-Actin为内参进行半定量RT-PCR检测柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊免疫前后鸡盲肠扁桃体IL-2和GM-CSF基因表达的动态变化。结果表明,ChIL-2在第一次免疫后的第九天和第二次免疫后的第七天ChIL-2的表达明显升高;ChGM-CSF在第一次免疫后的第一天(P<0.05)和第二次免疫后的第七天(P<0.01),ChGM-CSF的表达量显着升高,在第一次免疫后的第九天和第二次免疫后的第叁天ChGM-CSF的表达量显着降低(P<0.01)。按照pGEX-6p-1表达载体的多克隆位点,重新设计IL-2和GM-CSF带有相应限制性内切酶酶切位点的引物,通过RT-PCR克隆获得两目的基因,与pGEM-T载体连接后转化JM109感受态细胞,经蓝白斑筛选、测序正确后,进行双酶切,胶回收酶切后的目的基因片段,将其与pGEX-6p-1表达载体连接,转化入BL21感受态细胞中。经双酶切和PCR鉴定为阳性的菌株,测序鉴定正确后,用IPTG最佳诱导条件表达IL-2和GM-CSF蛋白。通过菌体裂解,包涵体的洗涤、溶解、复性后,过Sepharose 4B柱纯化GST融合蛋白。Western Blot检测IL-2和GM-CSF融合蛋白,通过淋巴细胞增殖试验证明纯化的IL-2和GM-CSF融合蛋白具有一定的生物学活性。
参考文献：
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[8]. 白细胞介素-2和粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的克隆与表达[D]. 徐赓. 北京农学院. 2008
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