小反刍兽疫病毒N蛋白阻断ELISA方法的建立

论文摘要

小反刍兽疫(PPR)是一种跨国传播的重大烈性传染病,主要发生于山羊和绵羊等小反刍动物,具有高发病率和死亡率。小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白是抗体检测的主要靶蛋白,本研究将PPRV Nigeria 75/1毒株的N蛋白进行原核表达,重组蛋白经鉴定和纯化后免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选针对PPRV N蛋白的阳性单克隆细胞株,获得了具有阻断效果的单克隆抗体1B11株。经免疫荧光方法鉴定该单克隆抗体与PPRV Nigeria 75/1毒株发生特异性反应。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记1B11抗体作为阻断抗体,建立了检测PPRV抗体的阻断ELISA方法。经优化反应条件,抗原的最佳包被浓度为2.5μg/mL,阻断抗体的最佳浓度为1μg/mL,待检血清1∶2稀释反应1 h,底物反应时间为10 min,阴阳性检测临界值为阻断率为58.5%。特异性试验证明该方法与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒(BDV)等阳性血清不发生交叉反应。通过对234份血清样品进行检测,该方法与商品化试剂盒符合率为91%(213/234)。由此表明,建立的阻断ELISA方法可用于PPRV临床样品的抗体水平检测,为PPRV疫苗免疫效果检验及PPRV根除提供了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 毛立,张纹纹,李文良,杨蕾蕾,李基棕,郝飞,刘茂军,江杰元

关键词: 小反刍兽疫病毒,蛋白,单克隆抗体,阻断

来源: 畜牧与兽医 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室

基金: 国家重点研发计划(2018YFD0502006),江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(15)1061)

分类号: S852.65

页码: 114-120

总页数: 7

文件大小: 820K

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标签：小反刍兽疫病毒论文;  蛋白论文;  单克隆抗体论文;  阻断论文;