小反刍兽疫病毒间接化学发光抗体检测方法的建立与优化

小反刍兽疫病毒间接化学发光抗体检测方法的建立与优化

论文摘要

构建了原核表达质粒pET-28a-N,经原核表达纯化获得小反刍兽疫病毒N蛋白。将纯化的小反刍兽疫病毒N蛋白与对应的酶标二抗配对,通过对各个反应条件的优化建立了间接化学发光抗体检测方法。通过对血清样本的检测,对该方法的敏感性、特异性、重复性、符合率进行了评价。试验结果显示:N蛋白最适包被浓度为0.5μg/mL,最适包被条件为4℃24 h;酶标二抗最适工作浓度为1∶2000。特异性试验证明,该方法与羊常见病毒的抗体阳性血清没有交叉反应。通过检测大量小反刍兽疫病毒抗体阴、阳型血清,确定了科学的判定标准。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 主要试剂
  •     1.1.2 血清样本
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 小反刍兽疫N蛋白的表达
  •     1.2.2 包被缓冲液的选择
  •     1.2.3 包被条件的摸索
  •     1.2.4 封闭缓冲液的选择
  •     1.2.5 血清稀释倍数和抗原包被浓度的确定
  •     1.2.6 酶标二抗最适浓度的筛选
  •     1.2.7 临界值的确定
  •     1.2.8 交叉实验
  • 2 结果与分析
  •   2.1 重组蛋白表达及验证
  •     2.1.1 pET-28a-N重组质粒的构建及验证
  •     2.1.2 pET-28a-N重组蛋白的表达及纯化
  •     2.1.3 重组蛋白反应性验证
  •   2.2 包被缓冲液的选择
  •   2.3 包被条件的确定
  •   2.4 封闭缓冲液的选择
  •   2.5 抗原包被浓度及血清稀释倍数的选择
  •   2.6 酶标二抗最适工作浓度筛选
  •   2.7 临界值确定
  •   2.8 交叉反应
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 任雪建,李秀梅,杨晓帆,李亚静,杨志,耿玉静,吕园园

    关键词: 原核表达,最适条件,临界值

    来源: 现代畜牧科技 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 洛阳现代生物技术研究院有限公司

    分类号: S852.65

    DOI: 10.19369/j.cnki.2095-9737.2019.10.001

    页码: 1-5

    总页数: 5

    文件大小: 734K

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