导读:本文包含了顺乌头酸酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:乌头,线粒体,雄性,拟南芥,蛋白,细胞质,氧化氮。
顺乌头酸酶论文文献综述
杜璟,李艳纯,任雪营,谭国强,吕建新[1]（2015）在《真核细胞顺乌头酸酶活性检测新技术——胶内酶活性分析法》一文中研究指出顺乌头酸酶(aconitase,Aco)是细胞内重要的铁硫蛋白酶,它催化细胞内柠檬酸经中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸.真核细胞中顺乌头酸酶有两种,分别定位在细胞质的顺乌头酸酶1(cAco)和定位在线粒体的顺乌头酸酶2(m-Aco).检测它们活性的变化能敏感地反映出细胞中能量代谢、自由基产生、铁硫簇组装及铁代谢水平的改变.顺乌头酸酶活性的传统检测方法通常是测定细胞中总的顺乌头酸酶活性,该方法难以准确区分出c-Aco和m-Aco各自的活性变化.因此我们建立一种胶内酶活性分析法检测顺乌头酸酶活性.该方法利用非变性电泳技术将c-Aco和m-Aco浓缩分离,通过泡染底物显色,条带颜色深浅反映了酶活性的强弱.同时,比较了胶内酶活性分析法和分光光度法检测细胞内c-Aco和m-Aco的活性,并对比检测了过氧化氢处理细胞前后Aco活性的变化.结果显示,这两种方法均可敏感地检测出Aco的活性改变,并有广泛的细胞系实用性,但胶内酶活性分析法可区别测定c-Aco和m-Aco活性,不需繁琐的细胞质和线粒体分离,简便易行.文中介绍的线粒体分离纯化技术也为线粒体功能深入研究提供了一个快速、高效的分离纯化方法.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2015年11期）
邓明华,吕俊恒,文锦芬,赵凯,马春花[2]（2015）在《辣椒雄性不育系顺乌头酸酶基因的克隆与特性分析》一文中研究指出克隆了湖南省蔬菜研究所选育的辣椒胞质雄性不育系9704A及其保持系9704B的顺乌头酸酶基因(ACO),并进行了时空表达分析,以探讨其表达与雄性不育的关系。在辣椒盛花期取造胞细胞增殖期、花粉母细胞减数分裂期、小孢子单核靠边期、成熟花粉粒期的花蕾提取RNA,用High Fidelity PrimeScript~RT-PCR Kit(TaKaRa)进行逆转录反应。根据GenBank上已报道的茄科植物的顺乌头酸酶(ACO)基因序列,设计特异引物ACO-F1:5′-ATGTATA GTAATACAGCTCGCAAGT-3′;ACO-R1:5′-GTGGTCGAAAGATCAGTTAA-3′;根据获得的序列,设计实时荧光定量PCR引物ACO-F2:5′-TGGTAGCCGTCGTGGTAATG-3′;ACO-R2:5′GAGGGAA TGTGGACAGTCTTTG-3′。内参为β-ACTIN基因(DQ252512),引物为β-ACTIN-5′-TGCAGGAATCC ACGAGACTAC-3′,β-ACTIN-5′-TACCACCACTGAGCACAATGTT-3′。用High Fidelity PrimeScript~RT-PCR Kit(TaKaRa)进行基因的表达分析,具体步骤参照使用说明书。辣椒胞质不育系9704A与同型保持系9704B中CaACO基因编码序列无差异,编码区全长2 988bp,编码995个氨基酸残基;CaACO蛋白质等电点为7.09,分子量为108 386.60 ku,无信号肽,该蛋白位于细胞质的概率是89%。蛋白的保守结构域为Aconitase域,推测其属于Aconitase超家族。CaACO蛋白的二级结构中含331 aa的α-螺旋(33.27%),208 aa的延伸链结构(20.90%),101 aa的β-转角(10.15%),355 aa的无规则卷曲(35.68%)。辣椒的CaACO氨基酸序列与马铃薯、番茄的亲缘关系较近,与其它物种的亲缘关系稍远。组织实时荧光定量结果表明茎、叶、花、果皮、胎座、种子中CaACO基因均有表达,在胎座中的表达量最高,在茎中的表达量最低。花蕾发育过程实时荧光定量结果表明,CaACO基因在小孢子成熟期胞质雄性不育系与同型保持系中的表达水平差异最大,伴随着小孢子的发育,胞质雄性不育系中表达量呈现逐渐升高的变化趋势,在小孢子成熟期表达水平最高。而在保持系9704B花蕾中表现为先下降再升高最后再下降的变化趋势,其中小孢子单核靠边期的表达水平最高,造孢细胞增殖期与花粉母细胞减数分裂期的表达水平差异较小,造孢细胞增殖期略高于花粉母细胞减数分裂期。在花蕾发育的造孢细胞增殖期,两种材料CaACO的表达水平基本持平;在花粉母细胞减数分裂期、小孢子单核靠边期与小孢子成熟期,胞质雄性不育系中均高于保持系。(本文来源于《中国园艺学会2015年学术年会论文摘要集》期刊2015-10-26）
杜璟,李艳纯,任雪营,吕建新,谭国强[3]（2015）在《检测外周血单个核细胞中顺乌头酸酶活性筛查铁硫蛋白病》一文中研究指出铁硫簇是一类古老而功能众多的蛋白辅基,它的组装是需多种组装蛋白参与、有序进行的催化反应。成熟的铁硫蛋白参与了细胞中各种生命活动,如物质代谢、能量产生、DNA复制与修复、基因转录与翻译等。所以,铁硫簇组装过程中任何一个环节出现问题都会严重影响细胞正常的生命活动,从而导致铁硫蛋白病。常见的铁硫簇组装障碍性疾病包括Friedreich's ataxia(FRDA)、Hereditary Myopathy with Lactic acidosis(HML)、Inherited sideroblastic anemias、Acquired sideroblastic anemias、Multiple Mitochondrial Dysfunction Syndromes(MMDS)等,它们都存在不同程度的铁硫簇组装障碍。顺乌头酸酶(aconitase,Aco)是细胞内重要的一类铁硫蛋白酶,它能催化细胞内柠檬酸经过中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸。细胞中含有两种Aco同工酶,一种是由9号染色体编码的定位在细胞质中的aconitase1(c-Aco);另一种是由22号染色体编码的定位在线粒体中参与叁羧酸循环的aconitase 2(m-Aco)。分别检测它们的活性可以反映出细胞质和线粒体中铁硫簇的组装状态。目的:通过胶内酶活性分析法(In-gel activity assay)检测外周血单个核细胞中m-Aco、c-Aco的活性,对临床铁硫蛋白病进行筛查。方法:细胞内有两种Aco同工酶分别定位在线粒体和细胞质中,以往对Aco的检测多采用全细胞蛋白,检测细胞内总Aco活性,这显然不能精确的反映出线粒体和细胞质中不同的铁硫簇组装状态。现在多用差速离心法或密度梯度离心法分离线粒体和细胞质再分别检测m-Aco和c-Aco的活性,但是线粒体的分离需要大量的细胞并且操作较为繁琐。而In-gel activity assay法利用m-Aco和c-Aco的空间构象、电荷量等差异,在保证酶活性的前提下通过非变性电泳技术,将全细胞蛋白样品中两种同工酶有效的浓缩、分离。最后通过泡染底物显色,用凝胶成像系统成像分析,条带的深浅代表了酶活性的强弱。结果:10~7细胞数,100μg全细胞蛋白样品就足够m-Aco和c-Aco活性的检测,并且整个检测过程最快只需6小时。结论:该方法能快捷、准确的检测m-Aco和c-Aco的活性,并且避免了线粒体和细胞质的分离,降低了线粒体纯化过程中的误差。用该方法检测外周血单个核细胞的m-Aco和c-Aco活性有助于临床铁硫蛋白病的筛查及诊断,尤其适合用在新生儿筛查中。(本文来源于《2015年浙江省医学遗传学学术年会暨高通量基因测序产前筛查与诊断技术研讨会论文汇编》期刊2015-06-26）
张嘉,刘海耘,张晓,胡析,杨英杰[4]（2015）在《线粒体顺乌头酸酶在大鼠脊髓损伤后的表达变化》一文中研究指出目的探讨在大鼠脊髓损伤后线粒体顺乌头酸酶在脊髓组织中表达变化。方法 60只SD成年雌性大鼠随机分为假手术组和SCI组。SCI组采用Allen’s法制备SD大鼠脊髓挫伤模型;用BBB评分评估动物的运动功能用实时定量PCR技术检测ACO2在脊髓的基因表达,用免疫组织化学技术检测ACO2蛋白在脊髓的定位。(本文来源于《中华医学会第叁届全国小儿神经外科学术大会论文汇编》期刊2015-06-12）
叶薇,陈赛慧,郝东杰,郑屹,曹建明[5]（2013）在《衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响》一文中研究指出目的:利用自然衰老雄性SD大鼠和D-半乳糖(D-Gal)诱导的细胞衰老模型,研究在衰老细胞中线粒体顺乌头酸酶(mitochondrial aconitase,ACO2)活性的变化及其对能量合成的影响。方法:利用55 mmol/L D-Gal诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5衰老,并采用蔗糖连续密度梯度离心法分离大鼠脑组织和MRC-5细胞的线粒体;ACO2活性根据反应产物NADPH在340 nm的吸光度变化率进行检测,其表达水平分析分别用荧光定量PCR和Western blotting完成;利用试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化还原状态;组织铁含量的检测则通过菲咯嗪法进行;线粒体膜电位及腺苷酸含量分别应用JC-1荧光探针法和高效液相色谱法检测,并计算能荷。结果:随着大鼠月龄增加,ACO2活性逐渐下降,表达水平无明显差异,组织铁水平逐渐升高;体外氧化应激实验显示ACO2活性随H2O2处理浓度和时间增加而下降;细胞衰老模型中,SOD活性降低,MDA含量升高,ACO2活性下降而表达水平未变;自然衰老大鼠和细胞衰老模型中,线粒体膜电位、ATP合成与能荷呈明显下降趋势。结论:衰老过程中,随着氧化压力增加,氧化应激敏感的ACO2活性下降,影响叁羧酸循环效率,同时伴线粒体膜电位下降,进而使得能量合成降低。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2013年07期）
李燕,王建武,谭金娟,冯珊珊,柴团耀[6]（2013）在《顺乌头酸酶AtACO3参与调控Zn稳态的研究》一文中研究指出从拟南芥中克隆得到AtACO3基因的全长cDNA序列.半定量PCR实验结果表明,200μmol/L CuCl2处理能明显抑制该基因的表达,而200μmol/L ZnCl2处理1 h则可显着促进其表达.为验证AtACO3蛋白N端的功能,构建AtACO3 5'端1632 bp基因片段的原核表达载体pET30a-AtACO3-N,并转化大肠杆菌.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,该基因片段可以在大肠杆菌中稳定表达.进一步的抗性实验表明,异源表达基因AtACO3的N端序列能提高大肠杆菌的Zn2+耐受性.(本文来源于《中国科学院研究生院学报》期刊2013年03期）
赵赣,钱芳[7]（2012）在《顺乌头酸酶为何不宜被划分为异构酶》一文中研究指出用中间产物学说和化学反应的过渡态理论探讨了顺乌头酸酶为何不宜被划分为异构酶的原因。(本文来源于《生物学通报》期刊2012年12期）
王晓杰,相久全,韩乐强,张锦前,成军[8]（2011）在《HCV NS5A结合蛋白顺乌头酸酶1的验证研究》一文中研究指出目的筛选人肝脏cDNA文库中与HCV NS5A的结合蛋白基因,验证其中顺乌头酸酶1与HCV NS5A的相互作用。方法应用酵母双杂交系统3筛选人肝脏cDNA文库中的HCV NS5A结合蛋白基因,应用哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证其中顺乌头酸酶1蛋白与HCV NS5A之间的相互作用。结果成功筛选出人肝脏cD-NA文库中与HCV NS5A存在相互作用的蛋白基因,哺乳动物双杂交及免疫共沉淀实验结果证实HCV NS5A与顺乌头酸酶1蛋白在HepG2细胞内存在相互作用。结论本实验成功筛选人肝脏cDNA文库中的HCV NS5A结合蛋白基因,并且在体外水平即细胞内证实HCV NS5A与其中的顺乌头酸酶1蛋白之间的相互作用,为进一步细胞内及体内的糖、脂类代谢等功能研究奠定基础。(本文来源于《山东医药》期刊2011年32期）
张明珠,袁蕾,王俊生,张改生,郭文江[9]（2010）在《顺乌头酸酶基因在杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育花药中的表达分析》一文中研究指出采用RT-PCR技术,克隆了小麦胞质顺乌头酸酶基因(cACO)部分cDNA序列.该cDNA序列长1368bp,编码456个氨基酸,GenBank登录号为GU475062.半定量RT-PCR结果表明,在生理型不育和可育花药发育的单核早期至叁核期,cACO基因的表达水平均表现为先升后降;在生理型不育花药发育的单核晚期cACO基因表达水平与同期可育花药相比显着升高,到二核期和叁核期明显降低,ACO酶活性变化表现出相同趋势.这反映出在小麦生理型不育系中,cACO基因在花药败育关键期异常表达可能影响了花药发育过程中正常的能量供应和物质代谢,导致花粉发育能量不足和所需物质匮乏,从而导致了非遗传型花药败育现象.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2010年08期）
王强,董巍[10]（2007）在《一氧化氮对慢性病贫血大鼠贫血及肝脏顺乌头酸酶活性的影响及其意义》一文中研究指出目的探讨一氧化氮(NO)在慢性病贫血(ACD)发病中的作用及对肝脏顺乌头酸酶(aconitase)活性的影响,为ACD的防治提供实验依据。方法通过反复注射福氏完全佐剂在传统的类风湿性关节炎动物模型基础上建立了ACD大鼠动物模型。由于铁调节蛋白1(IRP-1)与aconitase有高度的同源性,aconitase又是NO主要靶酶,故利用此模型观察了不同处理组NO浓度的改变与贫血及肝脏aconitase活性的关系。结果炎症组NO浓度显着增高,贫血明显,aconitase活性降低,用一氧化氮合酶(NOS)抑制剂后,NO水平降低,贫血改善,aconitase活性介于炎症组与正常对照组之间。统计学处理有显着性差异P<0.01。结论NO参与了ACD的发病,为从NO角度进一步认识ACD的发病机制提供了实验依据。为ACD的治疗提供了一条新途径。(本文来源于《中国小儿血液与肿瘤杂志》期刊2007年06期）
顺乌头酸酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
克隆了湖南省蔬菜研究所选育的辣椒胞质雄性不育系9704A及其保持系9704B的顺乌头酸酶基因(ACO),并进行了时空表达分析,以探讨其表达与雄性不育的关系。在辣椒盛花期取造胞细胞增殖期、花粉母细胞减数分裂期、小孢子单核靠边期、成熟花粉粒期的花蕾提取RNA,用High Fidelity PrimeScript~RT-PCR Kit(TaKaRa)进行逆转录反应。根据GenBank上已报道的茄科植物的顺乌头酸酶(ACO)基因序列,设计特异引物ACO-F1:5′-ATGTATA GTAATACAGCTCGCAAGT-3′;ACO-R1:5′-GTGGTCGAAAGATCAGTTAA-3′;根据获得的序列,设计实时荧光定量PCR引物ACO-F2:5′-TGGTAGCCGTCGTGGTAATG-3′;ACO-R2:5′GAGGGAA TGTGGACAGTCTTTG-3′。内参为β-ACTIN基因(DQ252512),引物为β-ACTIN-5′-TGCAGGAATCC ACGAGACTAC-3′,β-ACTIN-5′-TACCACCACTGAGCACAATGTT-3′。用High Fidelity PrimeScript~RT-PCR Kit(TaKaRa)进行基因的表达分析,具体步骤参照使用说明书。辣椒胞质不育系9704A与同型保持系9704B中CaACO基因编码序列无差异,编码区全长2 988bp,编码995个氨基酸残基;CaACO蛋白质等电点为7.09,分子量为108 386.60 ku,无信号肽,该蛋白位于细胞质的概率是89%。蛋白的保守结构域为Aconitase域,推测其属于Aconitase超家族。CaACO蛋白的二级结构中含331 aa的α-螺旋(33.27%),208 aa的延伸链结构(20.90%),101 aa的β-转角(10.15%),355 aa的无规则卷曲(35.68%)。辣椒的CaACO氨基酸序列与马铃薯、番茄的亲缘关系较近,与其它物种的亲缘关系稍远。组织实时荧光定量结果表明茎、叶、花、果皮、胎座、种子中CaACO基因均有表达,在胎座中的表达量最高,在茎中的表达量最低。花蕾发育过程实时荧光定量结果表明,CaACO基因在小孢子成熟期胞质雄性不育系与同型保持系中的表达水平差异最大,伴随着小孢子的发育,胞质雄性不育系中表达量呈现逐渐升高的变化趋势,在小孢子成熟期表达水平最高。而在保持系9704B花蕾中表现为先下降再升高最后再下降的变化趋势,其中小孢子单核靠边期的表达水平最高,造孢细胞增殖期与花粉母细胞减数分裂期的表达水平差异较小,造孢细胞增殖期略高于花粉母细胞减数分裂期。在花蕾发育的造孢细胞增殖期,两种材料CaACO的表达水平基本持平;在花粉母细胞减数分裂期、小孢子单核靠边期与小孢子成熟期,胞质雄性不育系中均高于保持系。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
顺乌头酸酶论文参考文献
[1].杜璟,李艳纯,任雪营,谭国强,吕建新.真核细胞顺乌头酸酶活性检测新技术——胶内酶活性分析法[J].中国生物化学与分子生物学报.2015
[2].邓明华,吕俊恒,文锦芬,赵凯,马春花.辣椒雄性不育系顺乌头酸酶基因的克隆与特性分析[C].中国园艺学会2015年学术年会论文摘要集.2015
[3].杜璟,李艳纯,任雪营,吕建新,谭国强.检测外周血单个核细胞中顺乌头酸酶活性筛查铁硫蛋白病[C].2015年浙江省医学遗传学学术年会暨高通量基因测序产前筛查与诊断技术研讨会论文汇编.2015
[4].张嘉,刘海耘,张晓,胡析,杨英杰.线粒体顺乌头酸酶在大鼠脊髓损伤后的表达变化[C].中华医学会第叁届全国小儿神经外科学术大会论文汇编.2015
[5].叶薇,陈赛慧,郝东杰,郑屹,曹建明.衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响[J].中国病理生理杂志.2013
[6].李燕,王建武,谭金娟,冯珊珊,柴团耀.顺乌头酸酶AtACO3参与调控Zn稳态的研究[J].中国科学院研究生院学报.2013
[7].赵赣,钱芳.顺乌头酸酶为何不宜被划分为异构酶[J].生物学通报.2012
[8].王晓杰,相久全,韩乐强,张锦前,成军.HCVNS5A结合蛋白顺乌头酸酶1的验证研究[J].山东医药.2011
[9].张明珠,袁蕾,王俊生,张改生,郭文江.顺乌头酸酶基因在杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育花药中的表达分析[J].中国生物化学与分子生物学报.2010
[10].王强,董巍.一氧化氮对慢性病贫血大鼠贫血及肝脏顺乌头酸酶活性的影响及其意义[J].中国小儿血液与肿瘤杂志.2007
论文知识图
