FHIT、Ki67和bax在宫颈癌中的表达及临床意义

张飞燕李芳何芳王帅

保定市第二医院河北保定071000

【关键词】宫颈肿瘤；FHIT；Ki67；bax

【中图分类号】R71174

【文献标识码】B【文章编号】16748999(2013)12023802

FHIT基因（FragileHistidineTriad，脆性组氨酸三联体基因）为近年来新发现的一候选抑癌基因，定位于染色体3p142，跨越t（3；8）易位断裂点和脆性区域FRA3B。许多研究报道多种肿瘤细胞系和原发性肿瘤中均发现有FHIT基因的异常转录和表达，包括宫颈癌。bax和Ki67分别为标志细胞凋亡和增殖最重要的指标之一，与肿瘤的发生、发展及预后关系密切。本研究应用免疫组化技术检测FHIT、bax和Ki67在宫颈癌中的表达情况，探讨它们之间的相互联系及与临床病理学指标和近期预后之间的关系。

1资料与方法

11研究资料:试验组50例宫颈癌标本和对照组20例正常宫颈组织取自武汉大学中南医院妇瘤科2011年6月～2012年1月的手术标本。患者年龄25～66岁，平均425岁。采用国际妇产科联盟（FIGO）1985年临床分期标准：Ⅰb期20例，Ⅱa期4例，Ⅱb期24例，Ⅲb期1例。组织学类型：鳞癌41例，非鳞癌9例。病理分级：Ⅰ级4例，Ⅱ级22例，Ⅲ级24例。随访资料均完整,随访时间4～50个月。

12主要试剂:FHIT多克隆抗体购自北京中山生物工程公司，bax单克隆抗体为美国ZYMED公司产品，Ki67单克隆抗体、SP试剂盒为福州迈新公司产品。

13免疫组化方法:所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片。采用免疫组化SP法，FHIT、bax行微波抗原修复，Ki67行高压抗原修复，具体方法参照说明书进行。以PBS代替一抗作为阴性对照。

14免疫组化染色结果判断:FHIT蛋白以胞浆内出现棕黄色颗粒视为阳性细胞，参照Connolly等［2］的方法，进行染色强度评分：不染色或弱染色为1分；中度染色为2分；染色如正常宫颈上皮细胞或宫颈内腺体为3分。阳性率评分：阳性细胞百分比＜10%为1分；10%～50%为2分；＞50%为3分。FHIT蛋白表达最终评分为染色范围与染色强度的乘积，1～3分为低表达或表达缺失；4～9分为阳性表达。bax表达于胞浆，按照阳性细胞百分比<10%为阴性，≥10%为阳性表达。Ki67以细胞核内呈现棕黄色颗粒为阳性结果，根据阳性细胞所占比例分为：阳性细胞数<10%为阴性表达，≥10%为阳性表达。

2结果

21FHIT的表达与临床病理特征的关系:

所有正常宫颈组织中，FHIT表达于鳞状上皮和宫颈内腺体的胞浆中，呈中等程度至强阳性表达，而在50例宫颈浸润癌中，FHIT的阳性表达率为48%（24/50），52%（26/50）的宫颈癌FHIT表达降低或不表达，表达较正常宫颈组织明显降低（P＜0001)。FHIT表达不仅与病理分级(P＝0003)和淋巴结转移(P＝0002)关系密切，而且与宫颈癌的复发和死亡关系密切(P＝0019)，与年龄、临床分期、组织学类型无明显关系（P＞005）。

22Ki67的表达及与临床病理特征的关系:

Ki67主要表达于正常的宫颈组织鳞状上皮的基底层，中间层和表皮层表达几乎为阴性。在癌组织中Ki67的表达明显增强，72%（36/50）的宫颈癌表达阳性，并可见癌巢边缘的细胞表达强于中央的癌细胞。Ki67的表达与年龄、临床分期、组织学类型、病理分级、淋巴结转移和生存结果无明显相关性。

23bax的表达及与临床病理特征的关系:

bax表达于83%正常宫颈组织的上皮层的胞浆中。50例宫颈癌中，31例（62%）bax蛋白表达阳性。bax的阳性表达率随病理分级的升高而降低，差异有显著性（P=0012），与年龄、临床分期、组织学类型、病理分级、淋巴结转移及生存结果无明显相关性。

3讨论

自从1996年Obta等［1］利用外显子捕获法首先发现了定位于染色体3p142的FHIT基因，相继许多研究发现3p142区段的缺失或断裂与多种肿瘤的发生发展有关。文献报道在宫颈癌中有44%～71%的FHIT基因的转录异常和表达异常，而且在宫颈癌前病变及原位癌中也有FHIT的异常转录和表达［2，5］。本研究发现FHIT在正常宫颈上皮中呈中到强阳性染色，而宫颈癌中有52%表达降低或缺失，差异有显著性(P＞0001)，表明FHIT基因的异常改变参与了宫颈癌的发生和发展。同时还观察到FHIT表达的降低或缺失与宫颈癌潜在的恶性生物学行为密切相关，包括高分级和淋巴结的转移，表明FHIT表达的降低或缺失在宫颈癌的发展中起着重要作用，有可能影响宫颈癌的预后。目前，FHIT的表达与宫颈癌预后关系的研究还很少。Krivak等［5］的研究发现在59名Ⅱ～Ⅲ期宫颈癌患者中，66%有FHIT的表达下降或缺失，正常与异常表达组的3年生存率分别为74%与37%，多因素分析表明FHIT的异常表达是一项独立的预后因素。本实验观察了FHIT的表达对宫颈癌近期预后的影响，发现复发和死亡组中FHIT表达的阴性率明显高于无瘤存活组，FHIT表达的降低或缺失提示不良预后。

综上所述，本研究结果表明FHIT可能通过影响细胞的凋亡与增殖而参与宫颈癌的发生、发展，其异常表达与宫颈癌的不良预后有关。由于本实验样本量较小，随访时间不够长，FHIT与宫颈癌预后的关系尚须长期的随访及大样本资料的研究加以证实。

参考文献

［1］OhtaM，InoueH，CotticelliMG,etal.TheFHITgene，spanningthechromosome3p142fragilesiteandrenelcarcinomaassociatedt(3;8）breakpoint,isabnormalindigestivetractcancers［J］.Cell，2006，84(4):587597

［2］ConnollyDC，GreenspanDL，WuR，etal.LossofFhitexpressionininvasivecervicalcarcinomasandintraepitheliallesionsassociatedwithinvasivedisease［J］.ClinCancerRes，2000，6(9):35053510

［3］NakagawaS，YoshikauaH，KimuraM，etal.ApossibleinvolvementofaberrantexpressionoftheFHITgeneinthecarcinogenesisofsquamouscellcarcinomaoftheuterinecervix［J］.BrJCancer，1999，79(3/4):589594

［4］BirrerMJ，HendricksD，FarleyJ，etal.AbnormalFhitexpressioninmalignantandpremalignantlesionsofthecervix［J］.CancerRes，1999，59(20):52705274

［5］KrivakTC，McbroomJW，SeidmanJ，etal.AbnormalFHITexpressioninadvancedcervicalcarcinoma:apoorprognosticfactor［J］.CancerRes,2011,61(11):43824385

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