导读:本文包含了抗黑色素瘤论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:黑色素瘤,激素,靶向,性腺,细胞,疫苗,嵌合体。
抗黑色素瘤论文文献综述
王睿,王永梅,蔡铭君,柯学佳,吴越[1]（2019）在《融合蛋白G3G6和HST1致敏DC疫苗抗黑色素瘤的药效探究》一文中研究指出本研究旨在探究融合蛋白GnRH-GRP(G3G6)和HSP65-STEAP1(HST1)致敏树突状细胞(DC)效果和致敏后DC对B16F10黑色素瘤的抑制杀伤作用。利用实验室现存工程菌表达融合蛋白G3G6和HST1,按未致敏DC(US-DC)组,G3G6融合蛋白致敏DC(G3G6-DC)组,HST1融合蛋白致敏DC(HST1-DC)组和G3G6及HST1联合致敏DC(GH-DC)组致敏小鼠骨髓来源的DC分化成熟,获得融合蛋白致敏的相应DC疫苗。将B16F10黑色素瘤细胞以10～6个/只移植于C57BL/6J雄性小鼠构建黑色素瘤模型,DC疫苗免疫治疗,体内外实验探究DC疫苗的抗肿瘤药效。流式细胞术分析证明融合蛋白有效刺激DC分化成熟;动物实验显示,与US-DC组相比,G3G6-DC黑色素瘤抑制率为35.75%,HST1-DC组为34.03%,GH-DC组为55.74%。初步证明,G3G6-DC和HST1-DC均可有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长(P<0.05),且联合用药优于单独用药(P<0.01)。(本文来源于《华东六省一市生物化学与分子生物学会联盟2019年学术与教学交流会摘要集》期刊2019-07-12）
聂佳慧[2]（2019）在《红芸豆抗黑色素瘤活性成分及机制研究》一文中研究指出选题依据:芸豆是一种古老的蔬菜作物和粮食作物,以味道鲜美、营养丰富而闻名。红芸豆(Phaseolus vulgaris L.),又名红菜豆,是一种在全球范围内商业化生产和消费的食用豆。最近的研究表明,红芸豆具有抗氧化的生物活性。红芸豆中富含植物凝集素(PHA),PHA已被发现具有抗肿瘤,抗真菌,抗病毒和α-葡萄糖苷酶抑制等一系列生物活性。黑色素瘤是一种由黑色素细胞引起的恶性肿瘤,其死亡率占皮肤癌死亡率的80%,且五年生存率低于5%。因此,寻找具有抑制黑色素瘤能力的药物刻不容缓。已有研究表明桑椹花色苷可抑制小鼠黑色素瘤细胞转移、柑橘汁提取物可抑制黑色素瘤细胞的增殖。红芸豆具有鲜红的种皮,其颜色可能在于其含有花色苷类成分,因此,我们推测红芸豆可能具有潜在的抗黑色素瘤作用。山西是红芸豆的主产区,为了进一步开发利用山西优质红芸豆资源,本研究拟对红芸豆抗黑色素瘤活性成分及其机制进行研究,为把红芸豆进一步开发为治疗黑色素瘤的潜在药物和功能食品提供依据。目的:本课题以山西特产红芸豆为研究对象,采用B16-F10小鼠黑色素瘤细胞模型,通过化学分析、细胞生物学、代谢组学、网络药理学和多元统计分析技术等多学科方法阐明红芸豆皮提取物抗黑色素瘤的活性成分和作用机制,为红芸豆的进一步开发奠定基础。方法:(1)通过~1H-NMR及LC-MS分析,结合文献数据及标准品对照,分别对红芸豆皮及去皮种子提取物的化学成分进行结构鉴定。(2)采用小鼠黑色素瘤B16-F10细胞模型,首先通过观察红芸豆皮提取物(RKBC)和去皮种子提取物(RKBK)对细胞存活率、细胞迁移、细胞周期、细胞凋亡的影响进行抗黑色素瘤作用药效评价;其次,利用基于LC-MS的细胞代谢组学技术和网络药理学初步探究其抗黑色素瘤的作用机制;最后,采用Western blot对相关通路、靶点进行验证。(3)进一步将RKBC提取物分为石油醚(PE)、乙酸乙酯(EA)、正丁醇(BU)、剩余水层(W)四个萃取部位。通过分析四个萃取部位对B16-F10小鼠黑色素瘤细胞的存活率、细胞迁移、细胞凋亡的影响,明确红芸豆皮抗黑色素瘤活性部位;采用液质联用、结合标准品对照对活性部位的化学成分进行定性分析,采用高效液相色谱和pH示差法对活性部位进行定量分析。(4)通过Western blot分析活性部位对细胞程序性死亡相关蛋白的作用,确认其可能的作用通路。对活性部位中鉴定的单体进行细胞存活率、细胞凋亡的药效评价,选择活性最佳的单体进行细胞程序性死亡相关通路的验证。结果:(1)采用NMR分析,从RKBC及RKBK提取物中共鉴定化合物29个,主要为氨基酸、糖和有机酸。采用LC-MS分析,从RKBC提取物中共鉴定化合物15个,主要为原花青素类、花色苷类及黄酮醇类成分;从RKBK提取物中共鉴定化合物5个,主要为大豆皂苷类。结果表明,RKBC和RKBK提取物具有相似的初级代谢物,但次级代谢物存在很大的差异。原花青素,黄酮醇类成分和花色苷类成分是RKBC提取物的主要成分,大豆皂甙则为RKBK提取物的主要成分。(2)RKBC提取物对B16-F10细胞抑制作用的IC_(50)为36.93±2.74μg/mL,说明对B16-F10细胞具有明显的抑制作用;而RKBK提取物在6.25-200μg/mL的浓度范围内对B16-F10细胞无明显抑制作用。此外,RKBC提取物还可以浓度依赖性抑制细胞迁移,诱导G1期和G2/M期阻滞,并引发细胞凋亡和空泡化。细胞代谢组学结果表明RKBC提取物的抗黑色素瘤作用可能与嘌呤代谢有关。网络药理学结果显示RKBC可能通过调节CDK2和CDK4影响细胞周期。Western Blot分析发现RKBC可降低AKT1/2/3和cleaved-MMP2的水平,并上调Bcl-xl的表达。(3)EA、BU、W和PE四个部位均能抑制B16-F10细胞增殖,EA、BU和W在6.25-100μg/mL的浓度范围内的IC_(50)分别为12.57±0.95μg/mL、11.71±4.44μg/mL、32.80±4.58μg/mL,而PE部位在此范围的最大抑制率仅为35%。从IC_(50)值可以看出BU抑制B16-F10细胞增殖的活性最强,其次是EA、W和PE。细胞迁移、细胞凋亡、AO/EB和Hoechst 33342染色试验结果显示,BU部位在抑制细胞迁移和诱导细胞程序性死亡方面作用较强。活性部位定性分析结果显示,EA、BU和W的化学组成存在显着差异。EA部位以金丝桃苷和槲皮素为主,BU部位以保留时间为9.09 min的色谱峰和金丝桃苷为主,W部位以保留时间为2.63min和9.09 min的色谱峰为主。此外,保留时间为9.09 min的色谱峰通过液质联用分析推测为以槲皮素为母核的黄酮类成分,但具体结构未定。定量分析结果显示,EA、BU和W叁个部位中金丝桃苷含量分别为3.534±0.055、1.716±0.008、0.930±0.003μg/μL,槲皮素含量分别为2.839±0.009、0.811±0.008、0.264±0.010μg/μL;总花色苷含量分别为0.374、0.227、0.107 mg/g。(4)Western blot分析显示BU部位对与细胞程序性死亡调控相关的AKT1/2/3,p-AKT1/2/3,PARP,Bim和Bcl-xl均有一定作用,说明BU部位可能通过影响AKT1/2/3-Bim通路和上调Bcl-xl的表达促进B16-F10细胞的程序性死亡。金丝桃苷、槲皮素和山柰酚的抗黑色素瘤活性结果显示,槲皮素(IC_(50)为17.88±1.28μg/mL)的抗黑色素瘤活性最强,山柰酚次之,金丝桃苷最弱。Western blot的结果显示槲皮素对细胞程序性死亡的机制与BU部位相同。结论:本文通过NMR结合LC-MS分析,共鉴定出红芸豆提取物的55种化合物。发现RKBC提取物和RKBK提取物具有相似的初级代谢物,但次级代谢物存在显着差异。采用小鼠黑色素瘤细胞B16-F10模型证明红芸豆皮具有显着的抗黑色素瘤活性,而去皮种子无明显作用。进一步研究发现RKBC提取物发挥抗黑色素瘤作用可能通过抑制AKT1/2/3-MMP2通路从而抑制细胞迁移,抑制CDK2和CDK4的表达阻滞细胞周期,激活cGMP-PKG通路促进细胞凋亡,上调Bcl-xl的表达促进细胞空泡化等途径实现。进一步的活性部位筛选实验发现BU部位具有较强的抗黑色素瘤作用,其对细胞程序性死亡机制在于影响AKT1/2/3-Bim通路和上调Bcl-xl的表达诱导细胞程序性死亡进而抑制细胞增殖。BU中含有的槲皮素可能为RKBC提取物抑制黑色素瘤细胞增殖的主要活性成分之一。以上研究结果初步阐明红芸豆提取物抑制黑色素瘤细胞的活性成分和作用机制,为基于红芸豆的黑色素瘤治疗药物或功能食品研发奠定了基础。(本文来源于《山西大学》期刊2019-06-01）
张秋利,刘梦月,姜轩,金天明,赵瑞利[3]（2019）在《新抗菌肽RGD-嵌合体靶向抗黑色素瘤活性》一文中研究指出目的研究新抗菌肽RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)嵌合体的靶向抗肿瘤活性。方法采用MTT法和流式细胞术筛选抗肿瘤活性强的抗肿瘤肽和细胞表面整合素αvβ3表达量高的肿瘤细胞,建立BALB/c裸鼠(B16)皮下肿瘤模型。将裸鼠随机分为T-La(FS)、RGD-T-La(FS)、T-La和RGD-T-La组,尾静脉注射对应药物(600μg/m L),100μL/只,并设阳性对照组(1 mg/mL顺铂溶液)和空白对照组(PBS)。检测抗肿瘤肽对黑色素瘤B16细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果 RGD-T-La(FS)对B16细胞的敏感性最强,10μg/mL浓度时,细胞存活率为25. 12%;50μg/m L浓度时,T-La(FS)和RGDT-La(FS)作用的B16细胞存活率较低,分别为6. 61%和24. 65%。B16细胞表面整合素αvβ3表达量最高,PE-A荧光强度为868,其次为H460、HepG2和3T3细胞,PE-A荧光强度分别为840、446和265。T-La(FS)和RGD-T-La(FS)对VEGF的表达具有抑制作用,对Caspase-3的表达具有诱导作用,协同诱导黑色素瘤细胞的凋亡。结论为小分子抗菌肽作为靶向抗肿瘤肽的应用提供了科学依据,为临床上抗肿瘤药物的开发及应用奠定了理论基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年09期）
王睿,王永梅,蔡铭君,柯学佳,吴越[4]（2019）在《融合蛋白G3G6和HST1致敏DC疫苗抗黑色素瘤的药效学研究》一文中研究指出探究促性腺激素释放激素(GnRH)与胃泌素释放肽(GRP)偶联的融合蛋白(G3G6)和热休克蛋白65(HSP65)与六跨膜前列腺上皮抗原(STEAP1)偶联的融合蛋白(HST1)致敏树突状细胞(DC)的效果和致敏后DC对B16F10黑色素瘤的抑制杀伤作用。利用实验室现存工程菌表达融合蛋白G3G6和HST1,按未致敏DC(US-DC)组,G3G6融合蛋白致敏DC(G3G6-DC)组,HST1融合蛋白致敏DC(HST1-DC)组和G3G6及HST1联合致敏DC(GH-DC)组致敏小鼠骨髓来源的DC分化成熟,获得融合蛋白致敏的相应DC疫苗。将B16F10黑色素瘤细胞以1×10~6个/只移植于C57BL/6J雄性小鼠构建黑色素瘤模型,DC疫苗免疫治疗,体内外实验探究DC疫苗的抗肿瘤药效。流式细胞术分析证明,融合蛋白有效刺激DC分化成熟;动物实验显示,与US-DC组相比,G3G6-DC黑色素瘤抑制率为35.75%,HST1-DC组为34.03%,GH-DC组为55.74%。研究结果初步证明,G3G6-DC和HST1-DC均可有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长(P<0.05),且联合用药优于单独用药(P<0.01)。(本文来源于《中国药科大学学报》期刊2019年02期）
张华菁[5]（2019）在《铱（Ⅲ）多吡啶配合物抗黑色素瘤活性研究》一文中研究指出目前,癌症正严重威胁着人类的健康。铂类金属抗癌药物因其高效且广谱的抗癌特性,被广泛应用于多种癌症的治疗中。该类药物的主要作用机制为通过结合癌细胞的DNA来抑制其复制过程,进而诱导癌细胞凋亡。首个获批的铂类金属抗癌药物,顺铂(Cisplatin),至今仍是睾丸癌、卵巢癌等常见癌症的首选药物。然而,顺铂具有一系列较强的毒副作用,会使接受相关治疗的病人承受巨大的痛苦。不仅如此,长期使用顺铂还会使癌细胞产生耐药性。这促使人们开始寻找更为安全,更为有效的金属配合物类抗癌药物。研究人员提出了多种开发金属类抗癌药物的新策略,主要方法之一是替换配合物的核心金属。同属于铂系过渡金属的铱(Iridium),是一个极具潜力的候选者。铱(Ⅲ)具有较高的配位数,这意味着其所能接受的配体结构具有广泛的多样性。这为研究人员提供了设计具有新作用机制的药物的可能性。目前,在金属配合物的相关研究中,以联吡啶、菲罗啉等为代表的多吡啶类配体有着非常广泛的应用。研究表明,多种多吡啶金属配合物均具有一定的生物活性,并且拥有不同的作用机制。本实验室在以前工作的基础上,合成了一系列的铱(Ⅲ)多吡啶配合物。为了探究该类配合物的抗癌活性及作用机制,我们围绕着其抗黑色素瘤活性进行了研究。本文中,我们首先通过紫外-可见光吸收光谱、荧光光谱对这一系列配合物进行了表征。其后,使用小鼠黑色素瘤细胞(B16),采用噻唑蓝(MTT)法对各个配合物的抗黑色素瘤活性进行评估。从中筛选出了具有较强抗黑色素瘤活性且具有荧光性质的配合物Ir-10,[Ir(2-Phenylquinoline)_2(1,10-Phenanthrolin-5-amine)]PF_6。然后,选用人肝癌细胞(HepG2)、小鼠脑神经瘤细胞(Neuro-2a)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)等细胞系,检测该配合物对不同类型细胞的细胞毒性。并通过流式细胞术、染色观察B16细胞的形态变化等方法验证Ir-10能诱导细胞凋亡。使用荧光显微镜,观察Ir-10在B16细胞内的分布情况;测定经Ir-10处理后B16细胞内活性氧(ROS)水平的变化;使用小牛胸腺DNA(ct-DNA)对Ir-10与DNA的结合能力进行评估;通过流式细胞术,检测Ir-10对细胞周期的影响。最后,采用向C57BL/6小鼠腋下皮下注射B16细胞的方法建立了小鼠皮下黑色素瘤模型。通过该模型,对Ir-10的体内抗癌活性进行验证,并考察其是否对正常组织存在毒副作用。结果显示,具有荧光性质的Ir-10不仅拥有较好的抗黑色素瘤活性,其对顺铂不敏感的癌细胞也能产生理想的抑制效果。Ir-10的作用机制与顺铂等配合物不同,可能是通过促使细胞内ROS水平提升从而诱导细胞产生凋亡。Ir-10在荷瘤小鼠体内能发挥正常的抗癌活性,但同时也会产生一定的毒副作用。综上所述,Ir-10展现出了良好的体内外抗癌活性,这证明了铱(Ⅲ)多吡啶配合物有望成为一种新型的金属类抗癌药物。以上结果为铱类金属配合物的相关研究提供了参考,也为后续进一步改良铱(Ⅲ)多吡啶配合物的结构打下了基础。(本文来源于《西南大学》期刊2019-04-01）
谢欢[6]（2019）在《脂酰化对抗菌肽camel抗黑色素瘤活性的影响研究》一文中研究指出黑色素瘤是最常见的皮肤癌之一,由于目前用于治疗黑色素瘤的药物不仅容易产生耐药性,而且对转移后黑色素瘤效果不显着,因此黑色素瘤治疗的成功率相对较低。开发新型的黑色素瘤治疗药物仍面临着巨大的挑战。抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)是一类阳离子生物防御多肽,具有多种生物活性,如抗菌活性、抗肿瘤活性以及免疫调节活性等。抗菌肽由于独特的破膜机制而受到广泛关注。Camel是由抗菌肽Melittin和Cecropin A的活性片段嵌合而成的一类新型抗菌肽。在前期工作中,本实验室基于camel的脂酰化构建了高效的基因运输载体。在研究中发现脂肪酸的引入会诱导camel形成纳米颗粒。由于关于纳米颗粒对抗菌肽活性的影响的研究较少,因此本论文研究了不同长度的脂肪酸(C4、C8、C12、C16)对camel的自组装活性和抗黑色素瘤活性的影响。本论文实验结果表明C12-camel和C16-camel能够在盐离子的诱导下发生自组装,并且能够形成α-螺旋结构。而camel、C4-camel和C8-camel在纯水和生理盐水中都不会发生自组装。通过透射电镜观察发现,C12-camel自组装形成球状纳米颗粒。由于十六烷酸的疏水作用抑制了肽的静电排斥作用,C16-camel自组装形成了纤维结构。由于自组装纳米结构的形成,C12-camel和C16-camel的酶解稳定性得到显着提高,而camel、C4-camel和C8-camel却在短时间被胰酶降解。尽管不同长度的脂肪酸都会提高camel的抗黑色素瘤活性,但是C16-camel达到相同的抗肿瘤效果需要更长的作用时间。这可能是因为C16-camel形成了比较稳定的纳米纤维,从而阻碍了肽与细胞膜的作用。抗菌实验也验证了这一点,由于形成了比较大而稳定的纳米纤维,导致C16-camel不能透过细菌的外壁而作用到细菌内膜,从而丧失了抗菌活性。通过作用机制的研究发现camel及其类似物都能够诱导黑色素瘤细胞的凋亡,然而对细胞膜的破坏仍然是camel及其类似物杀死肿瘤细胞的主要作用方式。本研究结果也说明自组装并没有显着改变C12-camel和C16-camel的抗肿瘤机制。接下来本论文研究了自组装对C12-camel和C16-camel的体内抗肿瘤活性的影响。结果表明camel、C12-camel和C16-camel经腹腔给药和瘤内给药之后都能够显着抑制肿瘤的生长,其中瘤内给药具有更高的治疗效果。尽管许多研究表明自组装纳米结构会提高药物的抗肿瘤效果,但是我们的研究表明自组装并没有显着提高C12-camel和C16-camel的抗肿瘤效果。这可能与破膜机制仍然是camel、C12-camel和C16-camel杀细胞的主要作用方式有关。因为破膜机制不仅使camel、C12-camel和C16-camel可以直接杀死黑色素瘤细胞,同时还会因细胞坏死引发的免疫反应而抑制黑色素瘤的生长。总之,本论文的研究表明十二烷酸和十六烷酸可以使具有双亲性结构的抗菌肽camel在生理盐水中发生自组装。尽管脂肪酸会提高camel的抗肿瘤活性,但是并没有改变camel以破膜为主的抗肿瘤机制。虽然C12-camel和C16-camel会形成纳米结构,但是并没有显着提高C12-camel和C16-camel的体内抗肿瘤活性。尽管如此,本论文的研究为自组装抗菌肽的抗肿瘤应用提供了一些有价值的理论参考。(本文来源于《兰州大学》期刊2019-04-01）
张竞之,邓波,江小梨,张双伟,蔡敏[7]（2018）在《BRAF在10-姜酚抗黑色素瘤中作用的分子模拟及实验研究》一文中研究指出目的:采用分子模拟技术及细胞实验研究BRAF蛋白在10-姜酚(10-G)抗黑色素瘤中的作用。方法:将10-G(10、20和40μmol/L)刺激人皮肤黑色素瘤A375细胞24 h,采用MTS法和细胞计数检测细胞活力。采用分子对接及分子动力学模拟分析10-G与BRAF蛋白之间的相互关系。采用Western blot技术检测p-BRAF、总BRAF、p-MEK1/2、p-ERK1/2和p-P38的蛋白水平。结果:10-G可剂量依赖性地降低A375细胞活力和数量,与对照组比较差异有统计学意义(P <0. 01)。10-G与野生型BRAF之间的结合能为-7. 358 kcal/mol,与V600E突变型的BRAF之间的结合能为-8. 255 kcal/mol。分子动力学模拟证实BRAF~(V600E)与10-G之间的结合是稳定的。10-G能显着抑制A375细胞中p-BRAF、p-MEK1/2和p-P38的蛋白水平(P <0. 01),对p-ERK1/2的蛋白水平没有影响。结论:10-G能够抑制黑色素瘤细胞的生长,其机制可能与抑制BRAF激活有关。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2018年12期）
冯雨晨,刘深圳,郭蒙蒙,贾慧婕,刘可欣[8]（2018）在《硝呋奇特联合运载IDO2-siRNA减毒沙门氏菌抗黑色素瘤作用及机制研究》一文中研究指出研究背景及目的 :黑色素瘤作为临床上一种恶性程度极高的皮肤肿瘤,对人类健康造成了很大的影响。目前治疗方法有限,无法有效的根治黑色素瘤。硝呋奇特是一种治疗肠道性溃疡的药物,现被证实可以抑制肿瘤。IDO是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径分解代谢第一步的限速酶,其过度表达能够通过一系列机制阻止效应性T细胞的激活,抑制其抗肿瘤免疫反应。因此,抑制IDO的活性可以增强机体的抗肿瘤免疫反应。在本项目中,我们前期设计了针对IDO2的siRNA,已经证明其具有良好的干扰作用。我们团队前期发现减毒沙门氏菌能够有效地运载siRNA到达肿瘤部位,因此,我们的研究目的是探索减毒沙门氏菌运载自主构建的IDO2特异性siRNA质粒对于小鼠黑色素瘤的治疗作用,为临床上开发新的黑色素瘤治疗手段提供一定的实验及理论依据。材料及方法 :在体外,采用Western blot、MTT及划痕实验等方法研究硝夫奇特对黑色素瘤细胞的影响;在小鼠体内,采用流式、免疫组化、Western blot、Elisa等方法研究硝呋奇特联合运载IDO2-siRNA减毒沙门氏菌对于黑色素瘤小鼠模型的作用。结果 :1)与对照组相比,硝呋奇特作用于黑色素瘤细胞24小时、48小时后具有显着的杀伤作用,能够明显的抑制细胞的迁移,减少迁移相关蛋白MMP-2的表达,增加了凋亡相关蛋白Caspase-3的表达; 2)在动物模型中,相比模型组、scramble组、硝呋奇特组及IDO2组,减毒沙门氏菌运载IDO2-siRNA联合硝夫奇特能够显着延长荷瘤小鼠的生存期,抑制黑色素瘤的生长及迁移相关蛋白MMP2的表达。更重要的是,联合应用显着增强了黑色素瘤组织及脾脏中CD8+T淋巴细胞的浸润,抑制了肿瘤组织中IDO2的表达,增加了小鼠血清中IFN-γ的水平,降低了TGF-β的含量。结论 :与单独应用硝呋奇特和IDO2-siRNA相比,联合应用硝呋奇特及IDO2-siRNA更能够有效的抑制小鼠黑色素瘤的生长,提高了小鼠抗黑色素瘤的免疫反应。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
郭婧,刘笑铭,杨云帆,赵铁锁[9]（2018）在《Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA抗黑色素瘤作用研究》一文中研究指出研究背景:黑色素瘤作为一种恶性程度极高的皮肤肿瘤,对人类健康造成了很大影响。随着免疫学发展,针对免疫检查点PD1的单克隆抗体已经证明能够有效地治疗黑色素瘤。目前的单克隆抗体主要是从蛋白水平上抑制PD1通路,而信号通路的抑制也可以直接干扰其基因的表达。因此,我们设想利用RNAi技术实现对PD1通路的抑制,从而提高机体的抗肿瘤免疫反应。我们前期发现减毒沙门氏菌运载PD1干扰序列能够有效到达黑色素肿瘤组织,抑制肿瘤中PD1表达。与此同时,单一疗法的有限治疗效果使得联合治疗受到了学者们越来越多的关注。研究表明,抑制Stat3表达能够显着降低黑色素瘤细胞中PD-L1的表达。Nifuroxazide做为一种抗肠道细菌药物,已经被证明能够抑制Stat3的激活,进而抑制PD-L1的表达。研究目的 :探索Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA对小鼠黑色素瘤的治疗作用,为临床上开发新的黑色素瘤治疗手段提供一定的实验及理论依据。研究方法 :建立小鼠黑色素瘤模型后第7天将小鼠分为模型组、Scramble组、Nifuroxazide组、PD1-siRNA组及Nifuroxazide联合PD1-siRNA组。Nifuroxazide以200μg/只的剂量腹腔注射,每天1次,连续7天。减毒沙门氏菌瘤内注射,每周注射1次,共2次。最后一次注射后7天处死小鼠。采用流式、免疫组化、Western Blot等方法研究Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA对小鼠黑色素瘤的治疗作用。结果:自主构建的PD1-siRNA能够显着抑制肿瘤中PD1的表达,Nifuroxazide能够明显抑制Stat3的表达。与其它组相比,Nifuroxazide联合PD1-siRNA更加明显延长了荷瘤小鼠生存期,抑制黑色素瘤生长。Western Blot结果显示,Nifuroxazide联合PD1-siRNA显着抑制了迁移相关蛋白MMP2的表达,增加了凋亡相关蛋白Caspase3的表达。不仅如此,联合组显着增强了脾脏中CD8+T淋巴细胞、NK细胞的浸润及表达,抑制了Treg细胞及PD1+CD8+T的表达。结论 :相比单独应用Nifuroxazide及PD1-siRNA,Nifuroxazide联合PD1-siRNA能够更加有效的抑制小鼠黑色素瘤生长,提高小鼠抗黑色素瘤的免疫反应。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
柳溪林[10]（2018）在《靶向MC1R重组毒素高效表达纯化、抗黑色素瘤活性及相关靶向信号分析》一文中研究指出恶性黑色素瘤(MM)是始发于黑色素细胞的高度恶性肿瘤,特点为快速发生,易发生远处转移,预后差,是欧美浅肤色人种等国家皮肤癌死亡的首要原因。最常见的亚洲人群原发皮肤黑色素瘤主要为肢端黑色素瘤,约占全部黑色素瘤50%左右,上肢主要在手指末端及甲下,下肢主要在足趾和足底等部位。据统计,世界黑色素瘤每年的发病率以3%~8%的比例增多;黑色素瘤在我国发病率虽然在肿瘤中的比重较小,但总体为上升趋势,新发病例每年约有2万例,也是严重影响我国人民的生命健康病种之一,因此,对于晚期或扩散性黑色素瘤的针对性治疗和早期诊断显得尤为关键。目前治疗黑色素瘤的最佳手段仍是以手术为主,但术后仍有复发和转移的风险。在一些黑色素瘤晚期或不宜手术的患者,选择其他适宜的治疗方式十分必要;由于黑色素瘤对放射、化学疗法不敏感,使这些疗法的临床有效治疗率低,不能够有效延长患者的生存率,而且这些治疗方法对患者的免疫系统损伤较重。生物免疫治疗如黑色素瘤疫苗等,多数还处于研发或临床试验阶段,远期治疗效果还需进一步研究。近些年,靶向治疗开辟了肿瘤治疗的新方向,并有望成为黑色素瘤治疗的主导方法。对于黑色素瘤诊断包括查体、活检、影像学检查及实验室检查等,但目前仍无特异的肿瘤标志物,使其精确诊断受到了一定的限制。靶向药物无论在临床试验还是未来临床治疗中都需要靶向诊断方法进行病例筛选,只有确定适用病例后治疗才有意义。靶向诊断方法的建立首先就要获得靶向标志物。本研究以促黑色素细胞激素(α-MSH)作为引导结构与已经优化了密码子的绿脓杆菌外毒素蛋白相结合,成功构建一种高表达、特异性强的靶向MC1R(Melanocortin 1 Receptor)的重组毒素,并进行了基因工程菌株发酵与纯化研究;通过细胞毒性试验及动物模型试验来分析重组毒素的成药性评价,分析不同细胞MC1R的表达量及其与重组毒素有效性之间的关系,为重组毒素在临床上准确治疗及个体化治疗提供指导。通过生物信息学预测并证明了TCEAL7与miRNA-758的表达关系密切,同时通过调节TCEAL7来研究miRNA-758与黑色素瘤潜在联系,也证明了TCEAL7在黑色素瘤发生发展中起着重要作用,miR-758/TCEAL7可能作为黑色素瘤新诊断的标志物和治疗靶点。为了进一步获得更高表达量的重组毒素以便于能够工业化生产,我们将实验室保存的PE40毒素氨基酸序列,截短降低免疫原性,通过基因修饰将PE毒素羧基端的REDLK转变为KDEL多肽序列,增加活性。通过生物软件的分析及PE优化大肠杆菌嗜好密码子,合成PE38KDEL,以柔性linker将其与a-MSH基因连接,获得新构建的a-MSH-PE38_(KDEL)基因克隆。将重组毒素基因转入pET-30a载体,重组质粒pET-30a/a-MSH-PE38_(KDEL)载体成功构建,通过测序验证序列。将重组质粒转化到Rosseta(DE3)感受态受体菌株中,经卡那霉素抗性筛选后,以PCR及DNA测序验证。对鉴定阳性克隆菌株保种后以LB培养基发酵、IPTG诱导,经电泳基因水平分析和蛋白水平鉴定表达产物,层析扫描确定a-MSH-PE38_(KDEL)重组蛋白的表达量占全菌总蛋白的35%以上。利用Western blot对超声破碎后菌体进行分析,证明融合蛋白以有活性的可溶性表达产物、不直接表现活性的包涵体表达产物两种形式存在。对重组蛋白a-MSH-PE38_(KDEL)的可溶性表达采取粗略纯化与精细纯化相结合的工艺方式进行纯化。首先采用盐析法的硫酸铵沉淀法初步去除大部分杂质,再以疏水层析及离子交换层析对重组蛋白沉淀物进行精细纯化,最后以凝胶过滤层析法脱盐和纯化,并对饱和硫酸铵沉淀和层析条件进行优化。对于重组蛋白a-MSH-PE38_(KDEL)包涵体采取复性方式纯化,对包涵体进行反复的变性、复性,对复性产物进行亲和层析。从纯化结果看,这两种纯化方式终纯度都较高,均可满足后续实验要求。以细胞杀伤活性分析重组毒素a-MSH-PE38_(KDEL)对MC1R受体结合竞争情况;流式细胞仪分析重组毒素是否能够诱发细胞凋亡;选取人A375细胞、鼠黑色素瘤细胞B16-F10进行体外生物活性实验,因为这些细胞高表达MC1R;并以低表达MC1R的人正常肝细胞LO2、人乳腺癌细胞MDA-MB-231、人胆囊癌细胞GBC-SD、人胃癌细胞BGC-823作对照,验证重组毒素的靶向杀伤作用。实验结果证明a-MSH-PE38_(KDEL)确实是通过与MC1R结合后发挥毒性作用的,而其发挥毒性作用的机制之一就是内化进入肿瘤细胞内后诱导细胞凋亡。与目前上市的多数靶向药物对肿瘤细胞信号干扰等相比,本实验中的重组毒素针对的是肿瘤细胞表面受体标志,不易受到其他因素干扰,其效果可能要优于信号干扰药物。a-MSH-PE38_(KDEL)对人正常肝脏细胞L02无杀伤作用,对黑色素瘤细胞A375及B16-F10细胞的杀伤率为93%。进一步分析a-MSH-PE38_(KDEL)重组毒素的体内抗肿瘤活性,采取皮下接种B16-F10细胞悬液建立BALB/c鼠黑色素瘤模型,并用a-MSH-PE38_(KDEL)对荷瘤小鼠进行治疗,分析重组毒素的抑瘤效果、毒副作用以及获得安全性评价等。重组毒素治疗分高、中、低叁组,治疗组BALB/c鼠的肿瘤生长缓慢、未发现转移;而其中以高剂量组治疗效果更为明显,肿瘤消失率为58.3%;长期给予高剂量重组毒素治疗后(50天),治疗组7只BALB/c鼠中有4只肿瘤完全消失。组织病理及电镜结果显示a-MSH-PE38_(KDEL)对BALB/c鼠无明显的毒副作用。MC1R在肿瘤细胞与正常细胞和组织中的分布差异表明其有可能作为检测或靶向治疗的靶标,我们初步建立了一种MC1R的检测方法。分别利用蛋白免疫印迹法和荧光定量PCR法对不同细胞表面上的MC1R定量检测,分析样本中MC1R的含量与a-MSH-PE38_(KDEL)有效性之间的关系。检测的12种细胞中,验证了B16-F10细胞中MC1R mRNA的高表达量,发现人结直肠癌细胞HT29和人食管癌细胞eca-109中MC1R mRNA的表达量较黑色素瘤细胞B16-F10要高3-5倍,HCT-116(人结直肠癌细胞)与B16-F10细胞的mRNA表达量接近,并且荧光定量PCR与蛋白免疫印迹法检测结果基本一致。说明a-MSH-PE38_(KDEL)除了MM细胞外可能具有更强的新的潜在肿瘤靶点。在很多肿瘤中能够见到人转录延长因子A(SII)-样7(TCEAL7)的异位表达,其中包括恶性黑色素瘤,但其功能并不明确。本实验通过Western blot和qPCR方法证明了TCEAL7在黑色素瘤组织及细胞系A375和WM-115中表达量较低;通过慢病毒感染上调了TCEAL7在A375和WM-115细胞系中的表达量;转染siRNA-TCEAL7下调TCEAL7的表达,CCK-8检测法来评估TCEAL7对黑色素瘤生长的影响;流式细胞仪来检测TCEAL7在细胞凋亡过程中的作用。结果表明下调TCEAL7表达量可促进细胞增殖、肿瘤发生及抑制黑色素瘤凋亡。4周龄雌性BALB/c裸鼠,分别在裸鼠背侧皮下注射含有1×10~7转染siRNA和慢病毒感染后的A375和WM-115细胞。结果显示上调TCEAL7的表达量会抑制肿瘤的发生,下调时则会促进其生长。根据生物信息学分析结果表明miRNA-758的表达量与TCEAL7关系密切,通过qPCR证明转染mimics-miR-758的黑色素瘤细胞A375和WM-115中miRNA-758过表达,而Western blot却显示TCEAL7为低表达;双荧光素酶报告基因实验结果表明,在黑色素瘤A375和WM-115细胞上调表达miR-758后,TCEAL7的转录活性受到抑制。进一步分析了miR-758的异位表达在恶性黑色素瘤发展中的作用。WM-115和A375细胞转染mimics-miR-758的CCK-8检测结果显示,该基因能够促进细胞增殖能力;而基于mimics-miR-758过表达TCEAL7时,对细胞增殖的作用被削弱了。并且,当WM-115和A375细胞转染mimics-miR-758后,细胞凋亡被抑制;而基于mimics-miR-758过表达TCEAL7时,这种被过表达miR-758诱导的促细胞凋亡作用亦被抑制。上述结果表明,TCEAL7为黑色素瘤的一种抑癌基因,可抑制黑色素瘤的发生发展;miRNA-758为TCEAL7的上游调控因子,可通过下调TCEAL7表达水平,来发挥促癌作用。总之,本试验通过PE40密码子优化,将基因工程菌株目的蛋白a-MSH-PE38_(KDEL)的表达量从出发株原来的10%提高到现在的35%~40%;确定了实验室规模的a-MSH-PE38_(KDEL)可溶性和包涵体表达产物的纯化工艺,获得纯度超过95%以上的重组毒素产品;通过细胞水平试验明确靶向肿瘤细胞系,同时确定了使用剂量,为动物试验提供基础数据;通过黑色素瘤动物模型治疗试验明确了靶向黑色素瘤的强效杀伤作用,重组毒素能够快速消除鼠体内的黑色素瘤,临床观察、病理组织学切片和电子显微镜超微结构观察未见明显异常,证明其安全性好,是一种非常有前景的黑色素瘤的候选靶向药物;明显优于达卡巴嗪和顺铂化疗药治疗效果,观察到化疗药物治疗组中存在超微结构病理变化;细胞靶向筛选中发现了重组毒素的新肿瘤靶标:人结肠癌细胞系HT29和人食管癌细胞eca-109,而且靶向杀伤作用比黑色素瘤细胞B16-F10还要强几倍;通过黑色素瘤临床样本分析,认为miR-758/TCEAL7可能作为一个新的潜在诊断标志物和治疗靶标。希望本实验的结果能为未来的临床试验及黑色素瘤个性化治疗提供一定的参考。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-06-01）
抗黑色素瘤论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
选题依据:芸豆是一种古老的蔬菜作物和粮食作物,以味道鲜美、营养丰富而闻名。红芸豆(Phaseolus vulgaris L.),又名红菜豆,是一种在全球范围内商业化生产和消费的食用豆。最近的研究表明,红芸豆具有抗氧化的生物活性。红芸豆中富含植物凝集素(PHA),PHA已被发现具有抗肿瘤,抗真菌,抗病毒和α-葡萄糖苷酶抑制等一系列生物活性。黑色素瘤是一种由黑色素细胞引起的恶性肿瘤,其死亡率占皮肤癌死亡率的80%,且五年生存率低于5%。因此,寻找具有抑制黑色素瘤能力的药物刻不容缓。已有研究表明桑椹花色苷可抑制小鼠黑色素瘤细胞转移、柑橘汁提取物可抑制黑色素瘤细胞的增殖。红芸豆具有鲜红的种皮,其颜色可能在于其含有花色苷类成分,因此,我们推测红芸豆可能具有潜在的抗黑色素瘤作用。山西是红芸豆的主产区,为了进一步开发利用山西优质红芸豆资源,本研究拟对红芸豆抗黑色素瘤活性成分及其机制进行研究,为把红芸豆进一步开发为治疗黑色素瘤的潜在药物和功能食品提供依据。目的:本课题以山西特产红芸豆为研究对象,采用B16-F10小鼠黑色素瘤细胞模型,通过化学分析、细胞生物学、代谢组学、网络药理学和多元统计分析技术等多学科方法阐明红芸豆皮提取物抗黑色素瘤的活性成分和作用机制,为红芸豆的进一步开发奠定基础。方法:(1)通过~1H-NMR及LC-MS分析,结合文献数据及标准品对照,分别对红芸豆皮及去皮种子提取物的化学成分进行结构鉴定。(2)采用小鼠黑色素瘤B16-F10细胞模型,首先通过观察红芸豆皮提取物(RKBC)和去皮种子提取物(RKBK)对细胞存活率、细胞迁移、细胞周期、细胞凋亡的影响进行抗黑色素瘤作用药效评价;其次,利用基于LC-MS的细胞代谢组学技术和网络药理学初步探究其抗黑色素瘤的作用机制;最后,采用Western blot对相关通路、靶点进行验证。(3)进一步将RKBC提取物分为石油醚(PE)、乙酸乙酯(EA)、正丁醇(BU)、剩余水层(W)四个萃取部位。通过分析四个萃取部位对B16-F10小鼠黑色素瘤细胞的存活率、细胞迁移、细胞凋亡的影响,明确红芸豆皮抗黑色素瘤活性部位;采用液质联用、结合标准品对照对活性部位的化学成分进行定性分析,采用高效液相色谱和pH示差法对活性部位进行定量分析。(4)通过Western blot分析活性部位对细胞程序性死亡相关蛋白的作用,确认其可能的作用通路。对活性部位中鉴定的单体进行细胞存活率、细胞凋亡的药效评价,选择活性最佳的单体进行细胞程序性死亡相关通路的验证。结果:(1)采用NMR分析,从RKBC及RKBK提取物中共鉴定化合物29个,主要为氨基酸、糖和有机酸。采用LC-MS分析,从RKBC提取物中共鉴定化合物15个,主要为原花青素类、花色苷类及黄酮醇类成分;从RKBK提取物中共鉴定化合物5个,主要为大豆皂苷类。结果表明,RKBC和RKBK提取物具有相似的初级代谢物,但次级代谢物存在很大的差异。原花青素,黄酮醇类成分和花色苷类成分是RKBC提取物的主要成分,大豆皂甙则为RKBK提取物的主要成分。(2)RKBC提取物对B16-F10细胞抑制作用的IC_(50)为36.93±2.74μg/mL,说明对B16-F10细胞具有明显的抑制作用;而RKBK提取物在6.25-200μg/mL的浓度范围内对B16-F10细胞无明显抑制作用。此外,RKBC提取物还可以浓度依赖性抑制细胞迁移,诱导G1期和G2/M期阻滞,并引发细胞凋亡和空泡化。细胞代谢组学结果表明RKBC提取物的抗黑色素瘤作用可能与嘌呤代谢有关。网络药理学结果显示RKBC可能通过调节CDK2和CDK4影响细胞周期。Western Blot分析发现RKBC可降低AKT1/2/3和cleaved-MMP2的水平,并上调Bcl-xl的表达。(3)EA、BU、W和PE四个部位均能抑制B16-F10细胞增殖,EA、BU和W在6.25-100μg/mL的浓度范围内的IC_(50)分别为12.57±0.95μg/mL、11.71±4.44μg/mL、32.80±4.58μg/mL,而PE部位在此范围的最大抑制率仅为35%。从IC_(50)值可以看出BU抑制B16-F10细胞增殖的活性最强,其次是EA、W和PE。细胞迁移、细胞凋亡、AO/EB和Hoechst 33342染色试验结果显示,BU部位在抑制细胞迁移和诱导细胞程序性死亡方面作用较强。活性部位定性分析结果显示,EA、BU和W的化学组成存在显着差异。EA部位以金丝桃苷和槲皮素为主,BU部位以保留时间为9.09 min的色谱峰和金丝桃苷为主,W部位以保留时间为2.63min和9.09 min的色谱峰为主。此外,保留时间为9.09 min的色谱峰通过液质联用分析推测为以槲皮素为母核的黄酮类成分,但具体结构未定。定量分析结果显示,EA、BU和W叁个部位中金丝桃苷含量分别为3.534±0.055、1.716±0.008、0.930±0.003μg/μL,槲皮素含量分别为2.839±0.009、0.811±0.008、0.264±0.010μg/μL;总花色苷含量分别为0.374、0.227、0.107 mg/g。(4)Western blot分析显示BU部位对与细胞程序性死亡调控相关的AKT1/2/3,p-AKT1/2/3,PARP,Bim和Bcl-xl均有一定作用,说明BU部位可能通过影响AKT1/2/3-Bim通路和上调Bcl-xl的表达促进B16-F10细胞的程序性死亡。金丝桃苷、槲皮素和山柰酚的抗黑色素瘤活性结果显示,槲皮素(IC_(50)为17.88±1.28μg/mL)的抗黑色素瘤活性最强,山柰酚次之,金丝桃苷最弱。Western blot的结果显示槲皮素对细胞程序性死亡的机制与BU部位相同。结论:本文通过NMR结合LC-MS分析,共鉴定出红芸豆提取物的55种化合物。发现RKBC提取物和RKBK提取物具有相似的初级代谢物,但次级代谢物存在显着差异。采用小鼠黑色素瘤细胞B16-F10模型证明红芸豆皮具有显着的抗黑色素瘤活性,而去皮种子无明显作用。进一步研究发现RKBC提取物发挥抗黑色素瘤作用可能通过抑制AKT1/2/3-MMP2通路从而抑制细胞迁移,抑制CDK2和CDK4的表达阻滞细胞周期,激活cGMP-PKG通路促进细胞凋亡,上调Bcl-xl的表达促进细胞空泡化等途径实现。进一步的活性部位筛选实验发现BU部位具有较强的抗黑色素瘤作用,其对细胞程序性死亡机制在于影响AKT1/2/3-Bim通路和上调Bcl-xl的表达诱导细胞程序性死亡进而抑制细胞增殖。BU中含有的槲皮素可能为RKBC提取物抑制黑色素瘤细胞增殖的主要活性成分之一。以上研究结果初步阐明红芸豆提取物抑制黑色素瘤细胞的活性成分和作用机制,为基于红芸豆的黑色素瘤治疗药物或功能食品研发奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗黑色素瘤论文参考文献
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[8].冯雨晨,刘深圳,郭蒙蒙,贾慧婕,刘可欣.硝呋奇特联合运载IDO2-siRNA减毒沙门氏菌抗黑色素瘤作用及机制研究[C].第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编.2018
[9].郭婧,刘笑铭,杨云帆,赵铁锁.Nifuroxazide联合减毒沙门氏菌运载PD1-siRNA抗黑色素瘤作用研究[C].第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编.2018
[10].柳溪林.靶向MC1R重组毒素高效表达纯化、抗黑色素瘤活性及相关靶向信号分析[D].吉林大学.2018
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